Исследование молекулярных эффектов тиазолидиндионов в эксперименте (стр. 2 )

Таблица №2

Коэффициенты корреляции между показателями молекулярного профиля мочи крыс аутбредной линии Wistar и инбредной линии AUG контрольной и исследуемых групп на «21» день эксперимента

Показатель	r, коэффициент корреляции
KNG 1, интенсивность экспрессии, усл. ед.
КГ	I группа	II группа	III группа	IV группа
MUG 2, усл. ед.	0,22`	0,22`	0,28`	0,43*	0,31`	0,49**
A1AT, усл. ед.	0,18`	0,18`	0,31`	0,37*	0,42*	0,49**
KLK, усл. ед.	0,27`	0,27`	0,39*	0,44*	0,30`	0,49**
ALB, интенсивность экспрессии, усл. ед.
TBPA, усл. ед.	0,14`	0,16`	0,23`	0,32`	-0,20`	-0,25`
OBP3, усл. ед.	-0,22`	-0,20`	-0,29`	-0,32`	0,17`	0,27`
CES-1, усл. ед.	0,24`	0,26`	0,23`	0,26`	-0,24`	-0,32`
TLL 2, интенсивность экспрессии, усл. ед.
MUG2, усл. ед.	0,25`	0,26`	0,19`	0,25`	0,28`	0,34`
A1AT, усл. ед.	0,21`	0,20`	0,23`	0,27`	0,11`	0,32`
INHBC, усл. ед.	0,14`	0,16`	-0,29`	-0,31`	-0,14`	-0,38*
UMOD, интенсивность экспрессии, усл. ед.
MUG2, усл. ед.	0,22`	0,24`	0,24`	0,26`	0,27`	0,32`
Ig κ, усл. ед.	-0,19`	-0,23`	-0,31`	-0,25`	-0,35*	-0,29`
CDH1, усл. ед.	0,21`	0,24`	0,29`	0,30`	0,32`	0,34`
A1AT, усл. ед.	0,15`	0,17`	0,20`	0,24`	0,22`	0,26`
OBP3, усл. ед.	-0,17`	-0,18`	-0,31`	-0,36*	-0,34`	-0,38*

Примечание. ` - недостоверные различия; * - достоверность связи при р<0,05, ** - достоверность связи при р <0,01.

Наиболее выраженные изменения в значениях коэффициента корреляции зарегистрированы в I группе крыс линии Wistar с CД 2 типа на фоне введения розиглитазона, что свидетельствовало о различиях в эффективности тиазолидиндионов на уровне молекул.

Результаты исследования фармакокинетики тиазолидиндионов в условиях биомоделирования СД 2 типа

Сравнительный анализ ФК параметров розиглитазона и пиоглитазона, выполненный в условиях биомоделирования СД 2 типа на крысах линий Wistar и AUG, продемонстрировал достоверное снижение средних значений показателей AUC0-24 и Т1/2 при статистически значимом увеличении средних значений показателей Tmax, Сmax, Vd/F, CL/F во II и IV группах крыс линии AUG при введении розиглитазона и пиоглитазона по сравнению с аналогичными показателями в контрольных, I и III группах крыс. Средние значения показателя AUC0-24 имели достоверно более низкие значения в III и IV группах крыс обеих линий при введении пиоглитазона по сравнению со средними значениями аналогичных показателей в I и II группах крыс, которым вводился розиглитазон. Средние значения показателей Tmax, Т1/2, Сmax, Vd/F, CL/F в III и IV группах крыс обеих линий при введении пиоглитазона оказались достоверно выше средних значений данных показателей в I и II группах крыс, которым вводился розиглитазон. Разработана схема для создания ФК/ФД моделей розиглитазона и пиоглитазона в эксперименте, которая необходима для выявления в дальнейших исследованиях молекулярных различий ФК процессов, определяющих биодоступность тиазолидиндионов в условиях СД 2 типа и ФД эффекты в периферических тканях. Результаты исследования ФК розиглитазона и пиоглитазона в эксперименте свидетельствуют о наличии лучших показателей ФК для розиглитазона в связи с существованием различий в активности ферментных (CYP3A4, CYP2C8, CYP2C9, PXR) и транспортных систем (ALB, TBPA), отвечающих за распределение и метаболизм тиазолидиндионов.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что достоверное восстановление интегральных показателей жизнедеятельности (объем потребления пищи, воды, прирост массы тела, диурез), показателей шкалы изменений внешних признаков (окрас, покров), активности происходило в группах крыс аутбредной линии Wistar и инбредной линии AUG с аллоксановым СД 2 типа на фоне введения розиглитазона по сравнению с аналогичными показателями при введении пиоглитазона.

2. Доказана высокая эффективность розиглитазона по сравнению с пиоглитазоном на «21» день эксперимента в отношении восстановления гематологических (эритроциты, гемоглобин, средний объем эритроцитов, тромбоциты, нейтрофилы, моноциты, эозинофилы) и биохимических параметров (концентрации глюкозы, мочевины, креатинина, мочевины, холестерина, триглицеридов, альбумина, билирубина, кальция, калия, хлора) у крыс аутбредной линии Wistar и инбредной линии AUG c аллоксановым СД 2 типа.

3. Показана высокая эффективность розиглитазона по сравнению с пиоглитазоном на «21» день эксперимента в отношении реставрации показателей уровня лактата, активности каталазы, СОД, глутатиона, ГР, ГПО в крови и эритроцитах крыс аутбредной линии Wistar и инбредной линии AUG c аллоксановым СД 2 типа.

4. Отсутствуют достоверные различия в значениях концентраций кортизола, ИРИ, С-пептида и лептина в I группе крыс линии Wistar c аллоксановым СД 2 типа, получавших розиглитазон, на «21» день эксперимента и в контрольной группе крыс.

5. Обнаружены молекулярные причины достоверных различий эффективности и безопасности розиглитазона и пиоглитазона в группах крыс аутбредной линии Wistar и инбредной линии AUG c аллоксановым СД 2 типа, связанные с различной интенсивностью экспрессии и межмолекулярными взаимодействиями белков ЦТК, пентозо-фосфатного цикла, клеточного роста и протоокогенов, апоптотических, нейросекреторных и сократительных белков, сигнальных белков иммунной системы, амилоидогенных белков, белков свертывающей и противосвертывающей системы, белков липидного, углеводного и водно-электролитного видов обмена, прооксидантных и антиоксидантных систем, гидролиза, онкомаркеров в крови, моче и ткани поджелудочной железы.

6. Продемонстрированы лучшие показатели фармакокинетики для розиглитазона (AUC0-24, Tmax, Сmax, Т1/2, Vd/F, CL/F) по сравнению с пиоглитазоном и влияние различной интенсивности экспрессии белков транспортных систем (ALB, TBPA) и систем метаболизма (CYP3A4, CYP2С8, CYP2С9, PXR, GSTP1, GSTM1) на процессы всасывания, распределения и элиминации тиазолидиндионов у крыс аутбредной линии Wistar и инбредной линии AUG в условиях СД 2 типа.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На основании полученных результатов экспериментального исследования молекулярных эффектов тиазолидиндионов рекомендуется к применению база данных, содержащая молекулы – мишени для разработки инновационных сахароснижающих лекарственных средств (PXR, TLL2, CPB1, AMY2α, ELA3B).

2. Показана необходимость проведения молекулярного тестирования НПР сахароснижающих лекарственных средств разного химического строения на основе токсикопротеомного анализа в экспериментальном фармакологическом исследовании с выявлением молекулярного профиля, определяющего возникновение НПР (UMOD, PXR, KNG1).

3. Для исследования механизма действия, молекулярных эффектов и фармакокинетики новых сахароснижающих лекарственных средств в фармакологическом эксперименте рекомендуются к применению новые методы фармакопротеомного и биоинформационного видов анализа.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.  , , Макляков хронофармакологического подхода в режимах лекарственной профилактики сахарного диабета 1 типа // Владикавказский медико-биологический вестникг. – Т.7. - № 14. - С. 235-238.

2.  , , Каркищенко новых мишеней для разработки сахароснижающих лекарственных средств на основе биомоделирования сахарного диабета 2 типа и протеомных технологий // Биомедицина. – 2008. - № 1. - С.5-13.

3.  Sarvilina I., Krishtopa A., Maklyakov Yu., Gordienko D. AIDA: software for modeling of glucose-insulin interactions in patients with diabetes mellitus type 1 // Материалы 4-го Международного симпозиума «Компьютерные методы в токсикологии и фармакологии, включающие Интернет-ресурсы «(СМТРI-2007)». – Москваг. - С. 143.

4.  , , Макляков молекула-мишень для разработки инновационных противодиабетических лекарственных средств // Психофармакология и биологическая фармакологияг. – Т.7. - С.1938.

5.  , , Криштопа молекулярного паттерна плазмы крови при медленно прогрессирующем аутоиммунном сахарном диабете у взрослых на фоне инсулинотерапии // Сборник материалов научно-практической конференции "Рациональная фармакотерапия: теория и практика применения лекарств". - Хабаровскг. - С. 59-62.

6.  . , , Криштопа методов оценки результатов клинико-экономического анализа генерических лекарственных препаратов в лечебно-профилактических учреждениях г. Ростова-на-Дону // Проблемы стандартизации в здравоохраненииг. - № 11. - С.74.

7.  В, , Горшкова производных тиазолидиндионов // Материалы XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». – Москваг. - С.322.

8.  , , Сарвилина 3-(2, 2, 2-триметилгидразиния) пропионата // Токсикологический вестник. – 2009. - № 6. – С 12 – 16.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

2,3 – ДФГ 2,3 - дифосфоглицерат

АЛТ аланинаминотрансфераза

АОС антиоксидантная система

АСТ аспартатаминотрансфераза

ВЭЖХ высокоэффективная

жидкостная хроматография

ГГТ гамма-глутамилтранспептидаза

ГПО глутатион-пероксидаза

ГР глутатион-редуктаза

ИРИ иммунореактивный инсулин

КГ контрольная группа

ЛДГ лактатдегидрогеназа

МДА малоновый диальдегид

МС масс-спектрометрия

НПР неблагоприятная побочная

реакция

НСТ нитросиний тетразолий

ПОЛ перекисное окисление липидов

РИА радиоиммунологический анализ

СД сахарный диабет

СДГ сукцинатдегидрогеназа

СОД супероксиддисмутаза

СРО свободнорадикальное окисление

ТГ триглицериды

ФД фармакодинамика

ФК фармакокинетика

ХС холестерин

ЦТК цикл трикарбоновых кислот

ЦХО цитохромоксидаза

A1AT α-1-антитрипсин

ACT актин

ALB cывороточный альбумин

AMY2α α-амилаза

ATP6V1A АТPаза, H+ транспортная

AUC площадь под кривой «концентрация-время»

CASP каспаза

CDH1 E-кадгерин

CES-1 карбоксиэстераза

CHGB хромогранин - β

CL клиренс

CP карбоксипептидаза

CTLA4 белок 4 цитотоксических Т-лимфоцитов

CYP цитохром

ELA3B эластаза 3 B

ENO1α α-энолаза

F биодоступность

FABP1 белок, связывающий жирные кислоты

FAH фумарилацетоацетатгидролаза

FBP1 фруктозо-1,6-дифосфатаза 1

GLP Правила качественной лабораторной практики

GRP 58 белок, регулируемый глюкозой

GSTM1 глутатион – S-трансферазаMu 1

GSTP1 глутатион-S-трансфераза Р1

HDHPR дигидроптеридин-редуктаза

HIST4H2AA гистоновый белок H2A, тип 4

Ig κ иммуноглобулин каппа-цепь

INHBC С-цепь ингибина β

KLK калликреин

KNG 1 Т-кининоген 1

KRT8 кератин, тип II, форма 8

MALDI-TOF время-пролетная масс-спектрометрия с лазерной десорбцией и ионизацией

MUG 2 ингибитор 3 α-1-протеиназы

OBP3 альфа2u-глобулин

p42 МАРK митоген-активируемая

протеинкиназа p42

PCK2 конвертаза прогормона 2

PDIA дисульфид-изомераза

PEBP фосфотидилэтаноламин-связанный белок

PFN1 профилин 1

PIN1 пептидил-пролилизомераза А

PK пируваткиназа

PMF1 остеокальцин

PNLIP триацилглицерол-липаза

PPARγ рецепторы, активирующие

пролиферацию пероксисом,

подтип гамма

PPIA пептидилпролилизомераза A

PRDX6 пероксиредоксин 6

PXR ядерный рецептор, группа 1

PYGL изофермент гликоген-фосфорилазы печени

SCGN секретоагогин

SDS-PAGE гель-форез с натрия додецилфосфатом

T1/2 период полувыведения

TBPA транстиретин -преальбумин

TLL 2 толлоидоподобный белок 2

Tmax время достижения максимальной

концентрации вещества

TPM1 тропомиозин, изоформа 1

TRA1 эндоплазмин

TUBA 1 тубулин – альфа 1

TUBB 5 тубулин - бета 5

UMOD уромодулин

Vd объем распределения

Сmax максимальная концентрация

ТКТ транскетолаза

[1] Выражаем благодарность сотрудникам центра протеомных исследований ИБМХ РАМН (г. Москва) за участие в выполнении протеомных исследований биообразцов лабораторных животных.