Использование факторов транскрипции B - клеток BSAP, Oct-2, и BOB.1 и B - клеточных маркеров CD22, и CD79a в дифференциальном диагнозе классической лимфомы Ходжкина (стр. 2 )

Фактор транскрипции иммунопрофиля, в большинстве случаев CHL был следующим: В SAP-положительный; Oct-2-отрицательный или BOB.1-отрицательный; и PU.1-отрицательный. Этот фенотип наблюдался в 74% (42/57) случаев CHL. Хотя имеются литературные различия, экспрессия фактор BSAP наблюдалась почти в 90% всех сообщенных случаев CHL (Список 2).

С другой стороны экспрессия фактора Oct-2 и коактиватора BOB.1 наблюдалась в меньшем числе случаев (20% и 34 %, соответственно).

Наши результаты для фактора BSAP в CHL соответствовали большинству публикаций в литературе18,18,22.Исключением явилось изучения Krenacs et al23, показывающие положительные результаты в 5 (36%) из 16 случаев CHL. В отличие от других исследователей, была использована поликлональная подготовка. Интересно, что поликлональные антитела также оценивались Foss et al16, при этом ответ по сравнению с моноклональным был ниже.

Различия в экспрессии факторов Oct-2 и BOB.1 были опубликованы в литературе. Наши результаты приближались к результатам Stein et al, однако в отличие от наших результатов не отмечалась экспрессия сразу двух факторов Oct-2 and BOB. 1. Re et al11, показали отсутствие Oct-2 and BOB.1 во всех изученных случаях CHL. Re et al использовали моноклональные антитела амино-концевых Oct-2, в то время как наши антитела были поликлональными с карбоксильной-концевой молекулой. Saez et al12, также использовали поликлональную подготовку, и обнаруживали факторы Oct-2 и BOB.1 в 71% из 24 случаев CHL с коэкспрессией в большинстве клеток RS, 2х факторов транскрипции. Отмеченные несоответствия могут быть отнесены к небольшому числу проведенных изучений, и различных методов иммуногистохимии.

Факторы транскрипции фенотипа для всех случаев NLPHL и DLBCL в нашем изучении составили BSAP-положительный/Oct-2-положительный/BOB.1-положительный.

Наши результаты в большинстве согласовывались с результатами, опубликованными в литературе16-18: экспрессия фактора BSAP в 100% случаев NLPHL и в большинстве случаев DLBCL. Krenacs et al.23 обнаруживали экспрессию BSAP только в 2х из 4 случаев NLPHL и только в 79% случаев DLBCL, эти результаты могут быть связаны с использованием поликлональных антител. Обнаружение факторов Oct-2 и BOB.1 в NLPHL также согласовывалось с литературой, которая показывала экспрессию факторов Oct-2 и BOB.1 во всех случаях NLPHL10,12,17. Наши результаты для DLBCL (включая TCRLBCL) были несколько выше, однако в литературе было показано большее число случаев экспрессии Oct-2 и BOB.1 во всех изучаемых случаях12,17. Хотя клетки Ходжкина и Рида - Штернберга были отнесены к зародышевым B - клеткам1,2, экспрессия маркеров CD20, CD22, и CD79a, при этом наблюдалась в меньшем числе случаев.

Список 3 вносит результаты лечения различных изучений, которые оценивали экспрессию B- клеточных маркеров в CHL, NLPHL, и DLBCL10,17,18,21,24,25.

В литературе, описаны в случаи CHL: экспрессия CD20 маркера наблюдалась в (23.76% среди всех случаев), далее наличие CD22 составило (14.6%) и CD79a (10.9%). Данные относительно экспрессии CD20 в NLPHL составили (97.0%), с относительно меньшим числом случаев экспрессии CD22 (12/14[86%]) и CD79a (27/33[82%]). Процент обнаружения маркера CD79a, был намного выше в исследованиях при использовании HIER. Отмечалось снижение экспрессии B-клеточных маркеров в DLBCL. По нашим результатам и по литературным источникам, почти во всех случаях, экспрессия CD20 была выше экспрессии CD79a. Оценка экспрессии маркера CD22 в DLBCL не проводилась.

Список 3. Литературные данные экспрессии маркеров CD20, CD22, и CD79a в образцах тканей.

	Антитела и использованные клоны			CHL					LPHL
							CD20/	CD20/				CD20/	CD20/
Ссылка и год	CD20	CD22	CD79a	CD20	CD22	CD79a	22	79a	CD20	CD22	CD79a	22	79a
Chittal et al,24 1990	L26								4/4
Coles etal,25 1988	L26	—	—	3/25	—	—	—	—	15/16	—	—	—	—
Hall etal,26,271988	L26	—	MB-1 (NS)	5/38	—	0/38	—	—	3/3	—	1/5	—	—
Pinkus and Said,28 1988	L26	—	—	8/63	—	—	—	—	9/9	—	—	—	—
Schmid etal,29 1991	L26		—	32/55	—	—	—	—	—	—	—	—	—
Zukerberg etal,30 1991	L26	—	—	7/20	—	—	—	—	—	—	—	—	—
Carbone et al,31 1992	L26	—	—	11/66	—	—	—	—	—	—	—	—	—
Delsol etal,32 1993	L26	4KB128	HM57	17/63	7/63	0/63	3/3	0/63	3/3	3/3	3/3	3/3	3/3
Enblad etal,33 1993	L26	—	—	39/151	—	—	—	—	1/1	—	—	—	—
Kurtin and Roche,34 1993	L26	—	—	—	—	—	—	—	—	—	—	—	—
Kuzu etal,35 1993	L26	4KB128	HM-57	22/79	15/79	0/79	NS	NS	6/7	7/7	6/7	NS	6/7
Bai et al,36 1994	L26	—	—	15/64	—	—	—	—	—	—	—	—	—
Chadburn and Knowles,37 1994	L26	—	—	—	—	—	—	—	—	—	—	—	—
Korkolopoulou et al,38 1994	L26	—	JCB117	20/67	—	19/94	—	7/67	7/8	—	14/14	—	7/8
O'Grady et al,39 1994	L26	—	—	7/33	—	—	—	—	3/4	—	—	—	—
Ashton-Key et al,40 1995	L26	—	JCB117	8/15	—	6/15	—	4/15	4/4	—	3/4	—	3/4
Mason etal,41 1995	—	—	JCB117	—	—	—	—	—	—	—	—	—	—
Orazi etal,42 1995	L26	—	MB-1 (NS)	9/29	—	5/29	—	2/29	—	—	—	—	—
Herbst etal,43 1996	L26	S-HCL1	—	48/278	10/57	—	NS	—	29/31	2/4	—	NS	—
Vasef etal,44 1997	L26	—	NS	3/43	—	2/44	—	NS	—	—	—	—	—
Foss etal,16 1999	L26	—	—	8/27	—	—	—	—	—	—	—	—	—
Watanabe et al,45 2000	L26	—	NS	18/51	—	13/50	—	11/50	—	—	—	—	—
Stein et al,10 2001	L26	—	JCB117	6/32	—	NS	—	—	35/35	—	NS	—	—
Torlakovic et al,17 2001	NS	—	—	10/35	—	—	—	—	15/15	—	—	—	—
Torlakovic etal,18 2002	L26	—	—	25/117	—	—	—	—	58/58	—	—	—	—
Общее количество	—	—	—	321/ 1,351	29/199	45/412	3/63	23/6324	192/198	12/14	27/33	3/3	19/22
				(23.76)	(14.6)	(10.9)	(5)	(10.7)	(970)	(86)	(82)	(100)	(86)
Настоящее изучение	L26	FPC1	HM57	17/57	10/54	3/53	6/54	2/53	5/5	5/5	5/5	5/5	5/5

CHL, классическая лимфома Ходжкина; DLBCL лимфома из крупных B-клеток; NLPHL узловая лимфома Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием; NS, не дифференцируемая.

Схема 1, является алгоритмом для использования факторов транскрипции в сочетании с B- клеточными маркерами в дифференциальном диагнозе лимфомы Ходжкина.

С тех пор как доказали, что BSAP относится к B-клеточному происхождению, приблизительно в 90% случаев, наличие BSAP исключает диагноз ALCL. Однако важно обратить внимание, что недостаточность экспрессии фактора BSAP, не исключает диагноз CHL, так как подтипы CHL в (9%) случаев не экспрессируют BSAP. В нашем изучении фактор Oct-2 был отрицательный во всех случаях ALCL, тогда как BOB.1 был слабо положителен в 2 (25%) из 8 случаев.

При использовании поликлональных антител, совместные результаты Saez et al12 и Marafioti et al46 показали в 15% (2/13) и 77% (10/13), присутствие Oct-2 и BOB.1, соответственно в ALCL. Таким образом, в отличие от BSAP, факторы Oct-2 и BOB.1 не могут использоваться в дифференциальном диагнозе между CHL и ALCL.

Дифференциальный диагноз лимфомы Ходжкина также включает DLBCL.21

В большинстве случаев CHL в нашем исследовании (74% [42/57]), обнаруживался фактор BSAP, при отсутствии в большинстве случаев DLBCL, экспрессии факторов Oct-2 или BOB.1, при экспрессии в большинстве случаев TCRLBCL, всех 3 маркеров. BSAP при этом не помогает в дифференциальной диагностике, так как экспрессируется в большинстве случаев CHL и во всех случаях DLBCL.

Наличие экспрессии сразу 3 маркеров транскрипции, также помогает в установке диагноза, так как в большинстве случаев CHL (10/57 [18%]), экспрессируются все 3 фактора транскрипции.

Однако наблюдается недостаточная экспрессия факторов Oct-2 или BOB.1 в CHL, начиная со всех случаев DLBCL. Хотя, для CHL факторы Oct-2, BOB.1 могут быть положительны, наблюдается экспрессия в слабом диапазоне.

Кроме, того, присутствие всех 3 B - клеточных маркеров говорит в пользу диагноза DLBCL, потому что в большинстве случаев DLBCL (91%), и ни в одном случае CHL, происходит экспрессия все 3 B - клеточных маркеров.

Обратите внимание, что основанная на нашем алгоритме, в нашем ряду, фракция всех случаев CHL составляет (7% [4/57]), не отделяя от случаев DLBCL (8% [2/25]), при этом все случаи имеют BSAP-позитивный/Oct-2-позитивный/BOB.1-позитивный фенотип факторов транскрипции, при экспрессии 2 или 3 поверхностных B - клеточных маркеров.

DLBCL и CHL DLBCL/NLPHL

BSAP

ALCL Oct-2/BOB.1

2+

3+

0/1+ 2 +

CHL B-клеточные маркеры CD20/CD22/CD79a

0/1 +

Схема 1. Предложенный алгоритм дифференциальной диагностики классической лимфомы Ходжкина (CHL) с использованием факторов транскрипции и B - клеточных маркеров. ALCL, анапластическая лимфома из крупных клеток; BOB.1 обязательный B-клеточный белок; специфичный B-клеточный активатор белка BSAP; DLBCL, лимфома из крупных B-клеток; NLPHL, узловая лимфома Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием; Oct-2, октаймер - обязательный фактор транскрипции 2; 3+, экспрессия 3 маркеров; 2+, экспрессия 2 маркеров; 1+, экспрессия 1 маркера; нет экспрессии маркеров.

Изменения в транскрипции B - клеток и поверхностных маркеров в случаях CHL, были положены в основу дифференциации B- клеток в CHL.

Примечательно, что в 3х из 4 случаев CHL с лимфоцитарным преобладанием (LRCHL), обнаруживался BSAP-положительный/Oct-2-положительный/BOB.1-положительный фенотип, наблюдаемый и в NLPHL.

Хотя число подтвержденных случаев слишком мало, для того чтобы сделать заключение, это наводит на мысль о том, что подтип LRCHL, связан с NLPHL, ближе, чем другие подтипы в CHL47. Подобный фенотип факторов транскрипции для NLPHL и LRCHL, приводит к поддержанию нормального B - клеточного фенотипа.

Как техническое примечание, мы обнаружили, что с помощью моноклональных антител для BSAP и поликлональных для Oct-2 и BOB.1, легко получались и интерпретировались результаты.

Кроме того, хотя наши результаты, согласовывались с Torlakovic et al17 которые обнаруживали PU.1 положительный, только в 2 (6%) из 35 случаев CHL, мы не смогли подтвердить экспрессию PU. 1 во всех случаях NLPHL.

Наши результаты подтверждают происхождение CHL и NLPHL из B - клеток. Также обнаружение различных B - клеточных факторов транскрипции и B- клеточных маркеров экспрессии в CHL, определяет спектр для дифференцирования B - клеток в пределах этой группы.

Мы обнаружили, что из-за специфичного B - клеточного происхождения в CHL, BSAP является лучшим маркером для дифференциальной диагностики CHL и фенотипа нулевых/ клеток ALCL.

Таким образом, хотя рутинные морфологические и иммуногистохимические изучения помогают в диагностике CHL от других подтипов, экспрессия различных факторов BSAP, Oct-2, and BOB.1 и B - клеточных маркеров CD20, CD22, и CD79a в трудных случаях помогает в диагностике CHL от NLPHL и DLBCL.

Литература.

1. Kuppers R, Rajewsky K, Zhao M, et al. Hodgkin disease: Hodgkin and Reed-Sternberg cells picked from histological sections show clonal immunoglobulin gene rearrangements and appear to be derived from B cells at various stages of development.

Proc Natl Acad Sci USA. 1994;91:.

2. Hummel M, Ziemann K, Lammert H, et al. Hodgkin's disease with monoclonal and polyclonal populations of Reed - Sternberg cells. N EnglJMed. 1995;333:901-906.

3. Kanzler H, Kuppers R, Hansmann ML, et al. Hodgkin and Reed-Sternberg cells in Hodgkin's disease represent the outgrowth of a dominant tumor clone derived from (crippled) germinal center B cells. J Exp Med. 1996;184:.

4. Marafioti T, Hummel M, Foss H-D, et al. Hodgkin and Reed - Sternberg cells represent expansion of a single clone originating from a germinal center B-cell with functional immunoglobulin gene rearrangements but defective immunoglobulin transcription. Blood. 2000;95:.

5. Scholer HR. Octamania: the POU factors in murine development. Trends Genet. 1991;7:323-329.

6. Theil J, Laumen H, Marafioti T, et al. Defective octamer - dependent transcription is responsible for silenced immunoglobulin transcription in Reed-Sternberg cells.

Blood.2001;97:.

7. Latchman DS. The Oct-2 transcription factor. IntJ BiochemCellBiol. 1996;28:.

8. Chang JF, Phillips K, Lundback T, et al. Oct-1 POU and octamer DNA cooperate to recognize the Bob-1 transcription coactivator via induced folding. J Mol Biol. 1999;288:941-952.

9. Laumen H, Nielsen PJ, Wirth T. The BOB.1/OBF.1 coactivator is essential for octamer-dependent transcription in В cells. Em] Immunol. 2000;30:458-469.

10. Stein H, Marafioti T, Foss H-D, et al. Down-regulation of BOB. 1/OBF. 1 in classical Hodgkin disease but not in lymphocyte predominant Hodgkin disease correlates with immunoglobulin transcription. Blood. 2001;97:496-501.

11. Re D, Muschen M, Tahaman A, et al. Oct-2 and Bob-1 deficiency in Hodgkin and Reed-Sternberg cells. Cancer Res. 2001;61:.

12. Saez A-I, Artiga M-J, Sanchez-Beato M, et al. Analysis of the octamer-binding transcription factors Oct2 and Oct1 and their coactivator BOB.1/OBF.1 in lymphomas.

Mod Pathol. 2002;15:211-220.

13. Adams B, Dorfler P, Aguzzi A, et al. Pax-5 encodes the transcription factor BSAP and is expressed in B lymphocytes, the developing CNS, and adult testis.

Genes Dev. 1992;6:.

14. Urbanek P, Wang ZQ, Fetka I, et plete block of early В cell differentiation and altered patterning of the posterior midbrain in mice lacking Pax/BSAP. Cell. 1994;79:901-912.

15. Kozmik Z, Wang S, Dorfler P, et al. The promoter of the CD19 gene is a target for the B-cell-specific transcription factor BSAP. Mol Cell Biol. 1992;12:.

16. Foss H-D, Reusch R, Demel G, et al. Frequent expression of the B-cell—specific activator protein in Reed-Sternberg cells of classical Hodgkin's disease provides further evidence of its B - cell origin. Blood. 1999;94:.

17. Torlakovic E, Tierens A, Dang HD, et al. The transcription factor PU. 1, necessary for B-cell development is expressed in lymphocyte predominance, but not classical Hodgkin's disease.

AmJ Pathol. 2001;159:.

18. Torlakovic E, Torlakovic G, Nguyen PL, et al. The value of anti—PAX-5 immunostaining in routinely fixed and paraffin - embedded sections: a novel pan pre-B and B-cell marker. Am
JSurgPathol. 2002;26:.

19. McKercher SR, Torbett BE, Anderson KL, et al. Targeted disruption of the PU.1 gene results in multiple hematopoietic abnormalities. EMBOJ. 1996;15:.

20. Oikawa T, Yamada T, Kihara-Negishi F, et al. The role of Ets family transcription factor PU. 1 in hematopoietic cell differentiation, proliferation and apoptosis.

Cell Death Differ.1999;6:599-608.

21. Jaffe ES, Harris NL, Stein H, et al, eds. Pathology and Genetics of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Lyon, France: IARC Press; 2001. World Health Organization Classification of Tumours.

22. Hertel CB, Zhou X, Hamilton-Dutoit SJ, et al. Loss of B-cell identity correlates with loss of B cell-specific transcription factors in Hodgkin/Reed-Sternberg cells of classical Hodgkin lymphoma. Oncogene. 2002;21:.

23. Krenacs L, Himmelmann AW, Quintanilla-Martinez L, et al. Transcription factor B-cell-specific activator protein (BSAP) is differentially expressed in B cells and in subsets of B-cell
lymphomas. Blood. 1998;92:.

24. Chittal SM, Alard C, Rossi J-F, et al. Further phenotypic evidence that nodular, lymphocyte-predominant Hodgkin's disease is a large B-cell lymphoma in evolution.

AmJ SurgPathol. 1990;14:.

25. Coles FB, Cartun RW, Pastuszak WT. Hodgkin's disease, lymphocyte-predominant type: immunoreactivity with B-cell antibodies. ModPathol. 1988;1:274-278.

26. Hall PA, d'Ardenne AJ, Stansfeld G. Paraffin section immunohistochemistry, I: non-Hodgkin's lymphoma. Histopathology. 1988;13:149-160.

27. Hall PA, d'Ardenne AJ, Stansfeld G. Paraffin section immunohistochemistry, II: Hodgkin's disease and large cells anaplastic (Ki1) lymphoma. Histopathology. 1988;13:161-169.

28. Pinkus GS, Said JW. Hodgkin's disease, lymphocyte predominance type, nodular: further evidence for a B cell derivation: L&H variants of Reed-Sternberg cells express L26, a pan B cell marker. AmJ Pathol. 1988;133:211-217

29. Schmid C, Pan L, Diss T, et al. Expression of B-cell antigens by Hodgkin's and Reed-Sternberg cells. AmJ Pathol.1991;139:701-707.

30. Zukerberg LR, Collins AB, Ferry JA, et al. Coexpression of CD15 and CD20 by Reed-Sternberg cells in Hodgkin's disease. AmJ Pathol. 1991;139:475-483.

31. Carbone A, Gloghini A, Volpe R. Paraffin section immunohistochemistry in the diagnosis of Hodgkin's disease and anaplastic large cell (CD30+) lymphomas.

Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol. 1992;420:527-532.

32. Delsol G, Meggeto F, Brousset P, et al. Relation of follicular dendritic reticulum cells to Reed-Sternberg cells of Hodgkin's disease with emphasis on the expression of CD21 antigen. Am
] Pathol. 1993;142:.

33. Enblad G, Sundstrom C, Glimelius B. Immunohistochemical characteristics of Hodgkin and Reed-Sternberg cells in relation to age and clinical outcome.

Histopathology.1993;22:535-541.

34. Kurtin PJ, Roche PC. Immunoperoxidase staining on non - Hodgkin's lymphomas for T-cell lineage associated antigens in paraffin sections: comparison of the performance characteristics of four commercially available antibody preparations. Am J Surg Pathol. 1993; 17:898-904.

35. Kuzu I, Delsol G, Jones M, et al. Expression of the Ig - associated heterodimer (mb-1 and B29) in Hodgkin's disease. Histopathology. 1993;22:141-144.

36. Bai MC, Jiwa NM, Horstman A, et al. Decreased expression of cellular markers in Epstein-Barr virus—positive Hodgkin's disease. J Pathol. 1994;174:49-55.

37. Chadburn A, Knowles DM. Paraffin-resistant antigens detectable by antibodies L26 and polyclonal CD3 predict the B - or T-cell lineage of 95% of diffuse aggressive non- Hodgkin's lymphomas. Am J Clin Pathol. 1994;102:284-291.

38. Korkolopoulou P, Cordell J, Jones M, et al. The expression of the B-cell marker mb-1 (CD79a) in Hodgkin's disease. Histopathology. 1994;24:511-515.

39. O'Grady JT, Stewart S, Lowrey J, et al. CD40 expression in Hodgkin's disease.

AmJ Pathol. 1994;144;21-26.

40. Ashton-Key M, Thorpe PA, Allen JP, et al. Follicular Hodgkin's disease.

AmJ SurgPathol. 1995;19:.

41. Mason DY, Cordell JL, Brown MH. CD79a: a novel marker for B-cell neoplasms in routinely processed tissue samples. Blood. 1995;86:.

42. Orazi A, Jiang B, Lee CH, et al. Correlation between presence of clonal rearrangements of immunoglobulin heavy chain genes and B-cell antigen expression in Hodgkin's disease. Am
JClinPathol. 1995;104:413-418.

43. Herbst H, Raff T, Stein H. Phenotypic modulation of Hodgkin and Reed-Sternberg cells by Epstein-Barr virus. JPathol. 1996; 179:54-59.

44. Vasef MA, Alsabeh R, Medeiros LJ, et al. Immunophenotype of Reed-Sternberg and Hodgkin's cells in sequential biopsy specimens of Hodgkin's disease: a paraffin-section immunohistochemical study using the heat-induced epitope retrieval method.

AmJ Clin Pathol. 1997; 108:54-59.

45. Watanabe K, Yamashita Y, Nakayama A, et al. Varied B-cell immunophenotype of Hodgkin/Reed-Sternberg cells in classic Hodgkin's disease. Histopathology. 2000;36:353-361.

46. Marafioti T, Ascani S, Pulford K, et al. Expression of B - lymphocyte-associated transcription factors in human T-cell neoplasms. AmJ Pathol. 2003;162:861-871.

47. Anagnostopoulos I, Hansmann ML, Franssila K, et al. European Task Force on Lymphoma project on lymphocyte predominance Hodgkin disease: histologic and immunohistologic analysis of submitted cases reveals 2 types of Hodgkin disease with a nodular growth pattern and abundant lymphocytes. Blood. 2000; 96: