Использование факторов транскрипции B - клеток BSAP, Oct-2, и BOB.1 и B - клеточных маркеров CD22, и CD79a в дифференциальном диагнозе классической лимфомы Ходжкина (стр. 1 )

Hematopathology / B-Cell Markers in Hodgkin Lymphoma. Am J Clin Pathol 2003; 120:767-777.

The B-Cell Transcription Factors BSAP, Oct-2, and BOB.1 and the Pan-B-Cell Markers CD20, CD22, and CD79a Are Useful in the Differential Diagnosis of Classic Hodgkin Lymphoma

Использование факторов транскрипции B - клеток BSAP, Oct-2, и BOB.1 и B - клеточных маркеров CD22, и CD79a в дифференциальном диагнозе классической лимфомы Ходжкина.

Patrick Browne, MD, PhD,1 Karen Petrosyan, MD,1 Antonio Hernandez, and Joel A. Chan, MD1

Резюме.

Иммуногистохимический анализ в дифференциальном диагнозе между классической лимфомой Ходжкина (CHL), лимфомой из крупных B-клеток (DLBCL), или анапластической лимфомой из больших клеток (ALCL) является затруднительным. В этих случаях определение факторов транскрипции (специфичный B-клеточный активатор белка [BSAP], октаймер - обязательный фактор транскрипции 2 [Oct-2], и обязательный B-клеточный белок 1 [BOB.1]) и B - клеточных маркеров (CD20, CD22, и CD79a), помогают в постановке диагноза.

В 55 случаев (CHL), в 5 случаях узловой лимфомы Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием (NLPHL), и в 33 случаях не - Ходжкинской лимфомы (25 DLBCL и 8 ALCL), был обнаружен фактор транскрипции фенотипа BSAP+ и/или Oct-2-; BOB.1, как фактор прогноза в CHL; BSAP+/Oct-2+/BOB.1 как фактор прогноза для NLPHL или DLBCL, в то время как фактор BSAP, был прогностически важен для ALCL. Экспрессия всех 3 факторов транскрипции была обнаружена только в NLPHL и DLBCL и только один B-клеточный положительный маркер для CHL. Таким образом, факторы транскрипции и все B-клеточные маркеры могут быть полезны в дифференциальном диагнозе CHL.

Большинство лимфом Ходжкина, классическая лимфома Ходжкина (CHL) и узловая лимфома с лимфоцитарным преобладанием (NLPHL), как известно, возникают из B-клеток1,2. Однако причина фенотипа B-клеток и недостаточность экспрессии иммуноглобулина в CHL полностью не объяснены. Как предполагается мутации в гене иммуноглобулина, могут быть причиной отсутствия экспрессии гена иммуноглобулина в CHL3. Однако недавняя работа, направленная на изучение нарушений активации промотора иммуноглобулина, приводящее к нарушению взаимодействия и недостаточности экспрессии факторов транскрипции, рассматривается как ведущий механизм4. Среди большого числа факторов транскрипции B-клеток, которые были описаны и объяснены, настоящая литература останавливается на 4 белках: октаймер - обязательный фактор транскрипции 2 (Oct-2); обязательный B-клеточный белок 1 (BOB.1); специфичный B-клеточный активатор белка (BSAP), и PU.1. Экспрессия гена иммуноглобулина B - клеток требует взаимодействие между октаймерными участками промотора иммуноглобулина и некоторых представителей POU семейства факторов транскрипции (специфичный фактор транскрипции 1 [Pit-1], октаймер - обязательный фактор транскрипции 1[Oct-1], и (Oct-2)5,6. Из этого семейства первоначальная экспрессия Oct-2, как раньше предполагали, ограничивалась B- клетками.7

Однако, для дальнейшей активации промотора иммуноглобулина Oct-2 должен взаимодействовать с кофактором транскрипции BOB.18,9. Как было показано в NLPHL клетки экспрессируют оба фактора Oct-2 и BOB. 110. Напротив экспрессия двух факторов, наблюдается только в некоторых клетках Ходжкина10-12. BSAP фактор, который кодируется геном Pax-513, вовлечен в регуляцию некоторых генов, связанных с развитием B - клеток, в особенности за транскрипцию гена для CD1914,15. Большинство авторов показывают, что экспрессия BSAP наблюдается в большинстве случаев в лимфоме из крупных B-клеток (DLBCL), и NLPHL, и в большинстве случаев в CHL, но не в T- клеточных лимфоме16-18. Последующий продукт PU.1 онкогена spi-1, который специфично связан с пуриновой последовательностью ДНК, принадлежит к семейству Ets факторов транскрипции, и экспрессируется и B - клетках и в миелоцитарной линии. Известно, что происходит регуляция экспрессии иммуноглобулина и других генов, которые являются важными для развития B - клеток, включая CD20, CD72 и Bruton тирозинкиназа19,20, и что экспрессия PU.1 происходит только в NLPHL, а не в CHL17.

Предыдущая литература показывает, что различные образцы экспрессии, существующие для различных факторов транскрипции, имеются не только в CHL и NLPHL, но также и в не - Ходжкинской лимфоме. Однако, ни в одном из предыдущих изучений, не была оценена параллельно экспрессия всех 4 факторов. В этом изучении мы с помощью иммуногистохимического анализа оценили экспрессию факторов BSAP, Oct-2, BOB.1, и PU.1 в CHL и NLPHL. В частности, в виду результатов полученных Torlakovic et al17, мы заинтересовались наличием фактора PU.1, для разграничения CHL от NLPHL. Кроме того, мы оценили экспрессию всех 4 факторов транскрипции в DLBCL и в анапластической лимфоме из больших клеток (ALCL), так как они тоже были включены в дифференциальный ряд при диагностике лимфомы Ходжкина21.

Учитывая важную роль этих факторов транскрипции в фенотипе B - клеток, мы оценили зависимость снижения экспрессии, с различной экспрессией маркеров CD20, CD22, и CD79a в 2х типах лимфомы Ходжкина. Это было сделано, для того, чтобы оценить важность B - клеточных маркеров в дифференциальном диагнозе между DLBCL и CHL. В последующем мы рассмотрели все материалы по использованию факторов транскрипции в CHL и NLPHL, сопоставляя их с полученными нами результатами, установили прогностическую ценность факторов транскрипции, вместе с B - клеточными маркерами в дифференциальном диагнозе CHL.

Материалы и методы.

Образцы ткани.

Фиксированные в формалине, парафин - вложенные образцы опухоли, были получены от IMPATH и Больница Фонда Кайзер, Лос-Анджелес. Были отобраны экземпляры опухоли, 57 от случаев CHL, 5 от NLPHL, 25 от DLBCL (включая 4 случая, классифицируемые как вариант T –клеточной/гистиоцитарной B - клеточной лимфомы из больших клеток [TCRLBCL]), и 8 случаев ALCL (включая 5 с фенотипом T- клеток и 3 из нулевых клеток).

Список 1. вносит распределение различных типов лимфом.

Список 1. Факторы транскрипции и B- клеточные маркеры, настоящее изучение.

	Число случаев	BSAP	Oct-2	BOB.1	PU.1	CD20	CD22	CD79a
ALCL	8	0(0)	0(0)	2(25)	0(0)	ND	ND	ND
DLBCL	25	25(100)	25(100)	24 (96)	10 (40)	25/25 (100)	20/22(91)	21/21 (100)
CHL	57	52(91)	19(33)	16(28)	1 6(28)	17(30)	10/54 (19)	3/53 (6)
MC	10	9(90)	4(40)	3(30)	09(90)	6(60)	1/9(11)	1/8(13)
NS	42	38 (90)	12(29)	10 (24)	1 2(29)	7(17)	7/41 (17)	2/41 (5)
LD	1	1 (100)	0(0)	0(0)	0(0)	1 (100)	1 (100)	0(0)
LR	4	4(100)	3(75)	3(75)	0(0)	3(75)	1/3 (33)	0/3 (0)
NLPHL	5	5(100)	5(100)	5(100)	00)	5(100)	5(100)	5(100)

ALCL, анапластическая лимфома из больших клеток; BOB.1, обязательный B-клеточный белок 1; BSAP, специфичный B-клеточный активатор белка; CHL, классическая лимфома Ходжкина; DLBCL, лимфома из крупных B-клеток; NLPHL, узловая лимфома Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием; NS, не дифференцируемая; Oct-2, обязательный фактор транскрипции 2.

8 образцов лимфатической ткани с фолликулярной гиперплазией, 7 образцов лимфатического узла и миндалины, также были включены в это изучение.

Все случаи были рассмотрены независимо двумя патологами (P. B. and J. A.C.), диагнозы были подтверждены и классифицированы, согласно Мировой Организации Здравоохранения и Классификации Опухолей21. Диагнозы устанавливали, согласно стандартным процедурам: морфологическое исследование, иммуногистохимический анализ, цитометрический анализ, полимеразная цепная реакция (ПЦР), и когда было необходимо, хромосомный и цитогенетический анализ с методом флуоресцентной гибридизации in situ.

Иммуногистохимический анализ.

Парафиновые блоки были приготовлены, в 4 µm для микроскопии. После процедуры HIER, материалы, охлаждались и промывались в 0.01-mol/L.

Иммуногистохимический анализ выполнялся с помощью TechMate 500 (Ventana Medical Systems). Использовались следующие первичные моноклональные антитела: анти-BSAP ( антитело 24, Лаборатория Transduction, BD Biosciences, Lexington, KY); анти-PU.1 (G148-74, Лаборатория Transduction, BD Biosciences); анти-CD20 (L26, DAKO); анти-CD22 (FPC1, Novocastra, Newcastle upon Tyne, England); и анти-CD79a (HM57, DAKO).

Поликлональные антитела, использовались с целью определения факторов Oct-2 (sc-233, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, C A) и BOB.1 (sc-955, Santa Cruz Biotechnology). Антитела для BSAP, Oct-2, BOB.1, и PU.1 использовались в разведениях 1:200, 1:1,000, 1:2,000, и 1:1,500 соответственно.

Образцы ткани выделялись вместе с первичными антителами в течение 60 минут при комнатной температуре. Оценка результатов, независимо проводилась двумя исследователями (P. B. and K. P.). Результаты подсчитывались в диапазоне от 0 to 3+

( отрицательный, слабый, умеренный и соответственно сильный).

Результаты.

Реактивная лимфоидная ткань.

Все 8 реактивных ткани, показывали стойкое взаимодействие B - клеток с BSAP Oct-2, и BOB.1.

Рисунок 1. Реактивная фолликулярная гиперплазия. A. клетки зародышевого центра (FCCs) и мантийные клетки (MCs) показывают сильную связь с (специфичным B-клеточным активатором белка [BSAP], ×200). B. отмечена связь с фактором PU.1. клетки макрофаги и гистиоциты показывают более сильный ответ, чем FCCs и MCs (PU.1, ×400). C. Присутствие подобного BSAP, октаймер - обязательного фактора транскрипции 2 [Oct-2]. FCCs показывают более выраженную связь с фактором, чем MCs (Oct-2, ×200). D. В отличие от других факторов транскрипции, обязательный B-клеточный белок 1 [BOB.1] присутствовал и в ядре и в цитоплазме клеток. FCCs показывают более выраженную связь с фактором, чем MCs (BOB.1, ×200).

Присутствие BSAP фактора наблюдалось чаще в ядре, со случайным обнаружением в цитоплазме, больше обнаруживался в клетках зародышевого центра и мантийных клетках. Преобладание фактора Oct-2 больше наблюдалось в цитоплазме. Это показывало большую частоту обнаружения в клетках зародышевого центра и меньшую в мантийных клетках. Преобладание ядерного и цитоплазматического фактора BOB.1 чаще выявлялось в клетках зародышевого центра, чем в мантийных клетках. Было определено наличие фактора PU.1 только в ядре, с одинаковым преобладанием, как в клетках зародышевого центра, так и в мантийных клетках, однако обнаружение этого фактора в B - клетках было ниже, чем в клетках макрофагах и гистиоцитах, используемых как контроль.

Классическая лимфома Ходжкина.

Список 1, включает 57 исследованных случаев CHL и рисунок 2 показывает эти результаты.

Рисунок 2. Классическая лимфома Ходжкина (CHL). A. Вариант лакунарных клеток Рида - Штернберга при нодулярном склерозе CHL, присутствующих среди большого количества маленькихB - и T- клеток (H&E, Ч1,000). B. RS клетки и некоторые другие B - клетки имели более частое присутствие ядерного специфичного B-клеточного активатора белка [BSAP]. Вообще фактор BSAP, наблюдался чаще в большинстве RS клеток (PU.1, Ч1,000). D. В отличие от BSAP, экспрессия октаймер-обязательного фактора транскрипции 2 (Oct-2) снижена в RS клетках. В этой области RS клетка на 10 часах - положительна, в то время как другие на 1 и 3 часах - отрицательны (Oct-2, Ч400). E. Подобно экспрессии Oct-2, экспрессия обязательного B-клеточного белка 1 (BOB.1) наблюдается в подтипе RS клеток, но ниже, чем при BSAP (BOB.1, Ч400). F, Экспрессия маркера CD20 обнаруживалась только в 30% случаев (17/57); однако экспрессия была сильнее в большинстве RS клеток (CD20, Ч400). Умеренная экспрессия маркеров CD22 (Ч400) и CD79a (Ч400), обнаруживалась в подтипе RS клеток.

Экспрессия факторов BSAP, Oct-2, и BOB.1 отмечалась в 91% (52/57), 33% (19/57), 28% (16/57) всех случаев, соответственно. В 10 случаях (18%), определялись факторы BSAP, Oct-2, и BOB.1. В большинстве случаев (72% [41/57]), BSAP был отнесен к среднему показателю (2+/3+) и наблюдался в большинстве клеток Рида – Штернберга.

В большинстве случаев (49/57 [86%]), показатели фактора BSAP были больше или равны показателям факторов t Oct-2 или BOB.1, которые имели более слабый показатель (1+/2+) и чаще наблюдались в RS клетках. Во всех случаях, за исключением одного, при отсутствие фактора ВSAP (5 случаев [9%]), также наблюдалось отсутствие факторов Oct-2, BOB.1, и PU.1.

Экспрессия маркеров B - клеток, наблюдалась в меньшем количестве случаев, 30% (17/57), 19% (10/54), и 6% (3/53) экспрессии маркеров CD20, CD22, и CD79a, соответственно. Положительная экспрессия CD20 маркеров, наблюдалась в большинстве клеток RS. В большинстве случаев экспрессия маркеров CD22 и CD79a была низкой. В 8 случаях (15%), наблюдался маркер CD20 с коэкспрессией маркеров CD22 или CD79a, и в 1 случае отмечалась экспрессия только CD22 или CD79a маркеров. Случаев экспрессии всех 3 маркеров не было. Из 11 случаев экспрессии факторов BSAP, Oct-2, и BOB.1, 7 случаев показали экспрессию только одного B - клеточного маркера, 4 других случая показали экспрессию двух B - клеточных маркеров.

Узловая лимфома Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием.

Опухолевые клетки во всех 5 случаях NLPHL, показывали присутствие факторов BSAP, Oct-2, и BOB.1, с большим преобладанием фактора Oct-2 Рисунок 3. Не отмечалось присутствие фактора PU.1. Во всех 5 случаях отмечалась более выраженная экспрессия только CD20 маркера, по отношению к маркерам CD22 и CD79a.

Рисунок 3. Узловая лимфома с лимфоцитарным преобладанием (NLPHL). A. H&E клетки с малыми лимфоцитами (H&E, Ч1, 000). B. Во всех клетках определяется (специфичный B-клеточный активатор белка [BSAP], Ч1,000). C. случаев обнаружения PU.1 не было. При этом малые B - клетки положительны (PU.1, Ч1,000). D. Обнаружение во всех случаях октаймер - обязательный фактор транскрипции 2 (Oct-2) (Oct-2, Ч1,000). E. Подобно факторам BSAP и Oct-2, наблюдается наличие во всех случаях обязательного B-клеточного белка 1 (BOB.1) (BOB.1, Ч1,000). F. Все случаи положительны для всех 3 B - клеточных маркеров (l CD20, Ч1,000; middle panel, CD22, Ч1,000; CD79a, Ч1,000).

DLBCL, включая TCRLBCL.

Все 25 случаев показывали наличие факторов BSAP и Oct-2.

Рисунок 4. (DLBCL). A. Типичное проявление DLBCL, с преобладанием больших опухолевых клеток (H&E, Ч400). B. Во всех больших опухолевых клетках обнаружен (специфичный B-клеточный активатор белка, Ч200). C. Почти половина случаев была отрицательна для PU.1.В то время, как клетки гистиоциты были положительны для этого фактора (PU.1, Ч200). D. Обращает на себя внимание присутствие во всех больших опухолевых клетках октаймер - обязательного фактора транскрипции 2 (Oct-2) (Oct-2, Ч200). E. Присутствие фактора обязательного B-клеточного белка 1 (BOB.1) распространенно повсеместно (BOB.1, Ч200). F. Все случаи показывают присутствие маркеров CD20 (Ч400) и CD79a (Ч400). В большинстве случаев определялся маркер CD22 (Ч400); по сравнению с маркерами CD20 и CD79a.

За исключением 1 случая TCRLBCL, все остальные случаи были положительны для BOB.1. Из этих 25 случаев,%), отмечалась слабо положительная или отрицательная индукция фактора PU.1, все 4 случая TCRLBCL были отрицательны. Во всех этих изучениях наблюдалось присутствие маркеров CD20 и CD79a (25/25 и 21/21, соответственно). 22 случая%) были положительны для маркера CD22.

T/нулевые клетки ALCL.

Ни в одном из 8 случаев не обнаруживались факторы BSAP, Oct-2, PU-1 или B - клеточные маркеры. В 2 случаях имелся слабый диапазон для фактора BOB. 1.

Обсуждение.

Список 1 показывает наши результаты, а список 2 показывает публикации других исследований.

Список 2. Опубликованные данные экспрессии факторов транскрипции в образцах тканей.

	Антитела и использованные клоны		CHL			NLPHL
Ссылка и год	BSAP	Oct-2	BOB.1	PU.1	BSAP	Oct-2	BOB.1	PU.1	BSAP	Oct-2	BOB.1	PU.1
Krenacs et al,23 1998	7077				5/14				2/4
Foss et al,16 1999	NS	—	—	—	28/31	—	—	—	10/10	—	—	—
Re et al,11 2001	—	PT1	sc-955	—	—	0/20	0/18	—	—	—	—	—
Stein et al,10 2001	—	$		—	—	4/32	8/32	—	—	35/35	35/35	—
Torlakovic et al,17 2001	24	AB-1	—	G148-74	27/29	0/29	—	2/35	15/15	15/15	—	15/15
Hertel et al,22 2002	24	—	—	G148-74	13/18	—	—	0/18	—	—	—	—
Saez et al,12 2002	—	sc-233	sc-955	—	—	17/24	17/24	—	—	5/5	5/5	—
Torlakovic et al,18 2002	24	—	—	—	112/117	—	—	—	58/58	—	—	—
Marafioti et al,46 2003	—	sc-233	sc-955	—	—	—	—	—	—	—	—	—
Total	—	—	—	—	185/209	21/105	25/74	2/53	85/87	55/55	40/40	15/15
					(88.59)	(20.0)	(34)	(34)	(98)	(100)	(100)	(100)
Present study	24	sc-233	sc-955	G148-74	52/57	19/57	16/57	1/57	5/5	5/5	5/5	0/5

AB, антитела; ALCL, анапластическая лимфома из больших клеток; BOB.1, обязательный B-клеточный белок 1; BSAP, специфичный B-клеточный активатор белка; CHL, классическая лимфома Ходжкина; DLBCL, лимфома из крупных B-клеток; NLPHL, узловая лимфома Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием; NS, не дифференцируемая; Oct-2, обязательный фактор транскрипции 2.