Влияние оптической изомерии на фармакокинетику препаратов атенолола (стр. 3 )

Хроматографические параметры разделения изомеров атенолола

Параметр	Атенолол субстанция –	Атенолол субстанция – предприятие Оболенское»
Коэффициент емкости (k´)	k´R=0.58 k´S=1.01	k´R=0.52 k´S=1.08
Число теоретических тарелок (N)	R 6900 S 6500	R 6900 S 6500
Селективность (α)	1,74	2,07
Степень разделения, разрешение (R)	2,3	3,5

Таблица 10

Хроматографические характеристики и параметры пригодности системы.

Лекарственное вещество	tR, мин S - атенолола	ts, мин R-атенолола	S/N	RSD%	As	N
Атенолол субстанция –	3,558	4,778	3	2,5%	0,95	6500
Атенолол субстанция – предприятие Оболенское»	3,458	4,917	3	2,5%	1,05	6500

На рисунках 4 и 5 представлены образцы полученных хроматограмм.

Рисунок 4. Хроматограмма субстанции атенолола – .

Рисунок 5. Хроматограмма субстанции атенолола –

предприятие Оболенское».

Как видно из представленных рисунков, в указанных условиях наблюдается хорошее отделение пика одного изомера от другого.

Результаты количественного определения изомеров атенолола в субстанциях представлены в таблице 11.

Таблица 11

Результаты исследования субстанций атенолола

ЛС	R-атенолол	S-атенолол
Атенолол субстанция –	41,2 %	58,8 %
Атенолол субстанция – предприятие Оболенское»	40,5 %	59,5 %

Согласно проведенному исследованию различия в содержании S-атенолола и R-атенолола были статистически не достоверными (р > 0,05).

Таким образом, получено, что различные серии субстанции одного производителя при соблюдении технологии не содержат различий в соотношении изомеров. Однако это соотношение может изменяться в процессе изготовленя лекарственной формы. Поэтому, последующей целью было определение, содержат ли таблетки атенолола необходимое количество левого – «активного» изомера и как он высвобождается в условиях in vitro и in vivo.

Для изучения высвобождения изомеров атенолола in vitro из таблеток различных производителей использовали прибор ERWEKA DT600 - «лопастная мешалка». Тест «растворение» проводили в соответствии с требованиями ОФС 42 ‑ 0003 – 00 «Растворение». Объем среды растворения составлял 900 мл, температура 37 ± 0,5оС, скорость вращения 75 об/мин, время растворения 30 минут. Среда растворения: вода.

Результаты определения высвобождения R-,S - атенолола из таблеток приведены в таблице 12.

Таблица 12

Кинетика высвобождения атенолола из таблеток (n=6)

Производитель	Высвобождение, %
	5	10	15	20	25	30
Pliva Hrvatska d. o.o.	R	44	63	75	80	83	87
S	45	63	78	81	84	85
Ratiofarm GmbH	R	43	63	76	80	84	86
S	42	64	75	80	83	86
Nycomed Danmark AS	R	46	68	77	81	85	87
S	45	65	75	79	84	86
Синтез	R	32	50	60	67	70	72
S	36	55	64	69	72	74
Скопинфарм	R	31	45	57	63	66	68
S	15	33	40	45	53	70
Оболенское ФП	R	27	44	55	58	61	64
S	26	41	51	56	59	62

На рисунке 6 представлена кинетика высвобождения R- атенолола.

Рисунок 6. Усреднённая кинетика высвобождения R - атенолола in vitro из

таблеток разных производителей.

На рисунке 7 представлена кинетика высвобождения S- атенолола.

Рисунок 7. Усреднённая кинетика высвобождения S - атенолола in vitro из

таблеток различных производителей.

Как видно из графиков, кинетика высвобождения R - и S - изомеров атенолола из таблеток разных производителей имеет сходный профиль, однако отличается по скорости и степени высвобождения R - и S - атенолола.

Для изучения соотношения содержания изомеров в зарегистрированных таблетках атенолола разных производителей, атенолол извлекали из таблеток следующим образом. Взвешивали 10 таблеток Атенолола 50 мг, измельчали и помещали их в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляли 100 мл подвижной фазы. Встряхивали раствор в течение 25 минут и подвижной фазой доводили объём до метки. После этого раствор фильтровали через стекловолокнистый фильтр, отбрасывая первые 5 мл фильтрата. 1 мл фильтрата, переносили в мерную колбу вместимостью 20 мл и доводили объем раствора до метки подвижной фазой (раствор А). Хранили раствор в защищённом от света месте. Раствор использовали в течение одного дня. Количественный анализ проводили методом ВЭЖХ с хиральной колонкой LiChroCART 250-4 ChiraDex с УФ – детектором при длине волны 282 нм. Для количественного определения изомеров атенолола проводили хроматографирование испытуемого раствора и растворов сравнения. Содержание атенолола в расчете на среднюю массу таблетки проводили по следующей формуле: m = At x n x 200мл , где:

Ar

At – площадь пика R/S-атенолола на хроматограмме испытуемого раствора;

Ar – площадь пика R/S-атенолола на хроматограмме раствора сравнения;

n – содержание атенолола в растворе сравнения, мг/мл.

В результате исследования таблеток атенолола было установлено, что количественный состав изомеров различен (таблица 13).

Таблица 13

Содержание изомеров атенолола в таблетках

Производитель	R-изомер, %	S-изомер, %
Pliva Hrvatska d. o.o., Хорватия	76	24
Ratiofarm GmbH, Германия	58	42
Nycomed Danmark AS AS, Дания	56	44
Атенолол – ФПО, Россия	75	25
Синтез, Россия	63	37
Скопинфарм, Россия	53	47

Из представленных данных следует, что таблетки атенолола содержат как S-, так и R-энантиомеры в различных количествах.

Подготовку проб для фармакокинетического исследования проводили следующим способом: к 1 мл плазмы прибавляли 1 мл хлороформа, смесь встряхивали на механическом шейкере в течение 1 минуты, затем центрифугировали в течение 5 минут при  3000 об/мин, отбирали надосадочную жидкость, упаривали, сухой остаток растворяли в 150 мкл подвижной фазы. Через 10 минут аликвоту (100 мкл) вводили в хроматограф. Пробы готовили непосредственно перед анализом. Разделение проводили на колонке «ChiraDex» LiChroCART 250-4 при комнатной температуре. В качестве подвижной фазы использовали смесь ацетонитрила и буферного раствора в соотношении 27:1 (об/об) с добавлением гексансульфоната натрия (буферный раствор содержал 190 мл дигидрофосфата калия рН 4,9). Минимальная определяемая концентрация – 10 нг/мл. Относительная погрешность определения изомеров атенолола при его концентрации от 10 до 50 нг/мл составляла 13,8 %; при концентрации от 50 до 100 нг/мл – 8,5 %. Индивидуальные профили изменения концентрации (С) изомеров атенолола в плазме крови во времени (t), зарегистрированные после приема таблеток атенолола, характеризовали максимальной концентрацией лекарственного вещества (Cmax, наибольшее из измеренных значений) и временем её достижения (tmax), а также площадью под кривой «концентрация – время» в пределах от нуля до момента отбора последней пробы крови (t = 24 ч), рассчитанной методом трапеций (AUC24h).

Время достижения максимальной концентрации для всех препаратов колебалось в интервале времени 3-6 часов. Во всех исследуемых препаратах наибольшие значения концентрации наблюдались для R-изомера, что может быть связано с тем, что атенолол оказывает антиадренергическое действие в неизменённом виде, накапливаясь и выделяясь симпатическими терминалями преимущественно за счет S-изомера, при этом выделяется из организма в неизменённом виде только S-изомер атенолола, в то время как R-изомер накапливается в организме.

На рисунках 8 и 9 представлены фармакокинетические кривые R - и S - атенолола.

Рисунок 8. Динамика содержания R-атенолола в плазме крови.

Рисунок 9. Динамика содержания S-атенолола в плазме крови.

Основные фармакокинетические параметры изомеров атенолола представлены в таблице 14.

Таблица 14

Значения фармакокинетических параметров (R, S)-атенолола

разных производителей

Препарат	Cmax, нг/мл	tmax, час	AUC, нг*ч/мл	t1/2, час
R	S	R	S	R	S	R	S
Pliva, Хорватия	130	120	3	3	2543	1867	6,5	5,5
Ratiofarm, Германия	135	95	3	3	2134	1956	8,2	6,5
Nycomed, Дания	115	130	4	3	2806	1695	9,0	6,0
Синтез, Россия	130	92	4	3	1856	1759	6,5	4,5
Скопинфарм, Россия	127	82	6	4	2594	1534	7,0	8,0
Оболенское ФП, Россия	128	84	4	4	2645	1598	7,0	8,0

Общие выводы

Разработана методика определения R - и S - изомеров атенолола в растворах и плазме крови методом ВЭЖХ с применением УФ – детектора и хиральной неподвижной фазы (колонки), что позволило добиться разделения изомеров атенолола. Определено соотношение R - и S - изомеров атенолола в субстанциях различных серий (содержание R-изомера составляет в среднем 40-42%, а содержание S-изомера около 58-59 %). Показано, что в различных сериях одного производителя, соотношение R - и S - изомеров статистически достоверно не различалось. Определено процентное содержание R - и S - изомеров в таблетках разных производителей. Установлено, что соотношение R - и S - изомеров атенолола в препаратах, выпущенных на разных производствах, достоверно различается, что может быть связано с различиями в технологии изготовления. Изучено высвобождение R - и S- атенолола из таблеток в условиях in vitro. Определено, что степень и скорость высвобождения R - и S - атенолола у препаратов, выпущенных на разных производствах, может достоверно различаться. Изучена фармакокинетика R - и S - атенолола в плазме крови добровольцев после перорального приема таблеток атенолола разных производителей. Показано, что уровни R - и S - изомеров атенолола в крови могут статистически достоверно отличаться при приеме препаратов разных производителей.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.  , , Аналитические подходы к изучению фармакокинетических особенностей оптических изомеров лекарственных средств// Биомедицина. – 2006. - №5. - С. 51.

2.  , Влияние оптических изомеров различных лекарственных средств на их фармакокинетику // Материалы VIII конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» - Томск: СибГМУС. 141-142.

3.  В, Влияние оптических изомеров на фармакокинетику лекарственных средств // Фармация№1. - С.

4.  В, Разработка методики разделения изомеров атенолола с помощью метода ВЭЖХ // Материалы XV Рос. нац. конф. "Человек и лекарство". – МоскваС. 729.

5.  В, Разделение и определение изомеров с использованием метода ВЭЖХ // Мат. конф. «Фармация и общественное здоровье». - ЕкатеринбургС. 316 – 318.