Научный руководитель
(РЭУ им. )
РАЗРАБОТКА МЕТОДА ПРОБОПОДГОТОВКИ СЫРОГО МОЛОКА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ В НЕМ ДЕКСАМЕТАЗОНА С ПОМОЩЬЮ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА.
Дексаметазон (ДМ) – синтетический глюкокортикоид, который широко используется в ветеринарной практике для лечения восполительных заболеваний и нарушения обмена веществ. Применение ДМ может привести к его накоплению в мышечной массе и молоке сельскохозяйственных животных, что оказывает губительное влияние на здоровье человека, вызвая образование злокачественных опухолей, снижение иммунитета и т. д.
Наиболее эффективным аналитическим методом контроля содержания ДМ в пищевых продуктах является иммуноферментный метод анализа (ИФА). ИФА отличает высокая чувствительность, простота проведения анализа, низкая стоимость необходимого для анализа оборудования, возможность проведения тестирования большого количества образцов в короткий промежуток времени.
В свете вышесказанного, в группе проф. (Химический факультет МГУ имени ) была поставлена задача разработки высокочувствительного метода определения ДМ в сыром молоке с помощью хемилюминесцентного ИФА. В рамках данного проекта ранее мною был успешно разработан метод определения ДМ в буферных растворах. Для завершения проекта требовалось адаптировать разработанную методику для определения ДМ в молоке.
Сырое молоко - молоко, не подвергавшееся термической обработке при температуре более чем 40оС или обработке, в результате которой меняются его составные части [Федеральный Закон №88-ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию»], – это сложная коллоидная система, в состав которой входят различные химические соединения как гидрофобной, так гидрофильной природы, что и приводит к необходимости проведения пробоподготовки образцов молока перед проведением аналитического определения с помощью ИФА.
В ходе выполнения работы было апробированы разнообразные методики пробоподготовки молока, ранее описанные в литературе, а именно: удаление жира центрифугированием, обработка молока реактивом Карреза, трихлоруксусной кислотой и метанолом.
Пробоподготовка проводилась в два этапа: на первом этапе из молока удалялся жир, на втором этапе к обезжиренному молоку добавлялись различные реагенты, денатурирующие белки молока. Показано, что обезжиривание молока, хотя и понижает матричный эффект, но не является достаточным для корректного определения ДМ в молоке. При анализе полученных результатов было отмечено, что значения определения ДМ в молоке с применением реактива Карреза и ТХУ имели низкую воспроизводимость. Напротив, результаты экспериментов, полученные после пробоподготовки сырого молока с использованием метанола, отличались хорошей воспроизводимостью, что и позволило говорить о достоверности полученных результатов. Таким образом, в качестве оптимального метода пробоподготовки был выбран метод с использованием центрифугирования для обезжиривания молока с последующей обработкой обезжиренного молока метанолом. Полученные результаты продемонстрировали, что проведение такой пробоподготовки позволяет корректно проводить определение ДМ в сыром молоке с помощью хемилюминесцентного ИФА.
