Клинико-фармакотоксикологическое обоснование применения препарата «ОВСАР» при токсических гепатозах птицы (стр. 1 )

На правах рукописи

КОЛКУНОВА ЛЮДМИЛА ЕВГЕНЬЕВНА

КЛИНИКО-ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТА «ОВСАР» ПРИ ТОКСИЧЕСКИХ

ГЕПАТОЗАХ ПТИЦЫ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Воронеж - 2013

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. Императора Петра I»

Научный руководитель	доктор ветеринарных наук, профессор Аргунов Муаед Нурдинович
Официальные оппоненты:	доктор биологических наук, ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Российской академии сельскохозяйственных наук, заведующая лабораторией экспериментальной фармакологии Заслуженный ветеринарный врач РФ, кандидат ветеринарных наук, БУВО «Воронежская областная ветеринарная лаборатория», директор лаборатории
Ведущая организация:	ФГБОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им .

Защита состоится «___» ________ 2013 года в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 006.004.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии ( 14-б).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «__» ________ 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Перед современными ветеринарными специалистами стоит не простая задача сохранения и повышения продуктивности животных. Для реализации выше написанного необходимо не только разводить высокопродуктивные породы и линии животных, но и создавать оптимальные условия содержания. Стоит обратить внимание на потерю в виде недополучения продукции и падежа животных, в результате перенесенных ими инфекционных заболеваний, инвазионных, болезней незаразной этиологии и стрессах промышленного выращивания (, 1991; , 2003).

Многие работы отечественных и зарубежных ученых посвящены значению неблагоприятных стресс-факторов для организма животных. У высокопродуктивных кроссов птицы чистопородных линий все чаще начинают проявляться такие нежелательные качества, как стресс-чувствительность, патологическое реагирование даже на самые незначительные изменения в условиях содержания и кормления. Использование птицы с более интенсивным обменом веществ и одновременная контаминация кормов, воды токсикантами обусловливают массо­вое появление расклева, низкой яйценоскости, гепатодистрофии и других болезней (, 2006; , 1981; , 2007).

Для успешного развития отрасли птицеводства категорически обязательно создание и применение абсолютно физиологичных фармакологических средств, обеспечивающих полную безопасность продуктов питания (, , 2007).

Обеспеченность ветеринарии и животноводства лекарственными активными средствами российского производства, в свою очередь, составляет до 15% от необходимого объема (, 2001).

Возросла потребность в расширении фармакологического спектра препаратов, характеризующихся большой терапевтической широтой, укреплением защитных сил организма, тонизирующем действием, повышением устойчивости к инфекционным заболеваниям, регуляцией обменных процессов (, 2009; , 2002; , 2007).

Внедрение препаратов с отсутствием отрицательных эффектов, таких, как токсическое действие, аллергические реакции является актуальным в наши дни. Так, например, некоторые лекарственные средства различных фармакологических групп могут вызывать желудочно-кишечные нарушения:  сгущение и застой желчи, запор или кишечную непроходимость, диарею или колит, диффузную гепатоцеллюлярную недостаточность, изъязвления кишечника, тошноту или рвоту, холестатическую желтуху и др. (, 1982; , 1997).

В связи с этим, возникла необходимость разработки и внедрения в практику птицеводства нового фармакологического средства, обладающего комплексным действием, высокой эффективностью и, самое главное, безопасного для здоровья животных, человека и окружающей среды.

Перспективным в этом плане может быть разработка многокомпонентного композиционного препарата, содержащего недорогие, но эффективные компоненты.

Все выше написанное послужило основанием для выбора направлений наших исследований.

Основная цель и задачи исследования. Основной целью данной диссертационной работы явилось изучение приоритетных причин возникновения и распространения токсических гепатозов цыплят-бройлеров, индюков-бройлеров и разработка средства для их коррекции.

Для этого были решены следующие задачи:

1.  Изучены основные причины и степень распространения токсических гепатозов птиц на примере птицеводческих хозяйств Царство» и .

2.  Разработаны рецептура и технология приготовления препарата «ОВСАР», изучены его физико-химические свойства.

3.  Изучены фар­ма­ко­-ток­си­ко­ло­ги­че­ские свой­ст­ва пре­па­ра­та (параметры и класс токсичности, ал­лер­ген­ные, эмбриотоксические, тератогенные, ку­му­ля­тив­ные свой­ст­ва, хро­ни­че­ская ток­сич­ность).

4.  Дана оценка экологической безопасности препарата «ОВСАР».

5.  Подобраны оптимальная дозировка и кратность применения препарата.

6.  Изучена фармакокоррекция токсического гепатоза препаратом «ОВСАР» у индюков-бройлеров и цыплят-бройлеров.

7.  Исследована эффективность препарата «ОВСАР» с иммуномодулятором «Риботан» при токсическом гепатозе индюков-бройлеров.

Научная новизна результатов работы. Изучены причины и степень распространения заболеваний печени у птицы в условиях птицеводческих хозяйств Липецкой области. Разработан отечественный экологически чистый безопасный препарат, способствующий фармакологической коррекции токсического гепатоза птиц в заключительной стадии откорма. Разработана технология изготовления препарата, изучены его фармако-токсикологические свойства.

Были разработаны показания к применению и оптимальная доза, изучена эффективность препарата «ОВСАР» для профилактики токсического гепатоза цыплят-бройлеров и индюшат-бройлеров, в том числе и в сочетании с иммуностимулятором «Риботан». Полученные данные расширяют и дополняют представление о токсическом гепатозе птиц и методах его коррекции. Научная новизна работы подтверждена патентом на изобретение № 000.

Теоретическая и практическая значимость. В ветеринарную практику предложен препарат «ОВСАР» для коррекции токсического гепатоза птиц в заключительной стадии откорма. Материалы диссертации могут быть использованы в НИУ и ВУЗах зооветеринарного и биологического направлений.

Апробация материалов диссертации. Результаты исследований по теме диссертации доложены на: ежегодных отчетных заседаниях Ученого совета факультета ветеринарной медицины Воронежского ГАУ им. Императора Петра I годов; научных и учебно-методических конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Воронежского ГАУ им. Императора Петра I годов; I и II конференциях научной школы Заслуженного деятеля науки РФ, профессора ; конкурсе по программе «Участник молодежного научно-инновационного конкрса» (У. М.Н. И.К.); конкурсе инновационных проектов «Инженерные технологии XXI века», НОЦ «Живые системы»; IV съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России, Москва (2013).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных статей, в том числе в рецензируемом издании, определенном перечнем ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, объектов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа изложена на 123 страницах, содержит 40 таблиц, рисунок. Список использованной литературы включает 280 отечественных и 37 зарубежных источников.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Причины и степень распространенности токсических гепатозов индюков-бройлеров и цыплят-бройлеров в промышленном птицеводстве.

2. Технология производства препарата.

3.Физико-химические и фармако-токсикологические свойства.

4.Эффективность препарата «ОВСАР» для фармакокоррекции токсических гепатозов птиц в заключительной стадии откорма.

5. Лечебная эффективность препарата «ОВСАР» при токсическом гепатозе птиц в сочетании с иммуномодулятором «Риботан».

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в годах в условиях кафедры терапии и фармакологии, межкафедральной лаборатории ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени императора Петра I» в соответствии с планом научно-исследовательских работ по теме №01.200.1003994. Раздел 6.8. «Научно-теоретическое обоснование и внедрение инновационных способов и средств ветеринарной защиты и продуктивного здоровья животных». Подраздел №. 6.8.3. «Изучить влияние экотоксикантов на продуктивное здоровье животных и способы их реабилитации в зонах загрязнения».

Для изучения эпизоотологической ситуации по токсическому гепатозу птицы в Липецкой области были проанализированы данные отчетов Липецкой областной ветеринарной лаборатории, записи в журналах эпизоотологического состояния хозяйств, а также обследованы цыплята-бройлеры и индюшата-бройлеры хозяйств царство» Липецкого района и «Задонская» Задонского района. При исследовании свойств объектов использовали общепринятые методики, включающие физико-химические, клинико-физиологические, токсикологические и биохимические исследования.

В лабораторных экспериментах и научно-производственных опытах использо­ваны беспородные белые мыши и белые крысы, морские свинки, цыплята-бройлеры и индюки-бройлеры. Группы животных и птиц формировали по принципу парных аналогов с учетом пола, возраста, массы тела.

Острую, подострую и субхроническую токсичность, эмбриотоксичность и тератогенность, аллергенную активность и раздражающее действие оценивали в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» ( и др., 2005).

Определение острой токсичности препарата «ОВСАР» проводили в остром опыте на белых мышах и белых крысах. В опыт были взяты 80 белых мышей массой г и 80 белых крыс массой г, которых формировали в группы по принципу парных аналогов. Препарат «ОВСАР» вводили грызунам внутрижелудочно в виде водной взвеси в разной дозировке, интервал между дозами составлял 1000 мг/кг массы тела, начиная с 500 мг/кг у мышей и 1000 мг/кг у белых крыс соответственно. Данным способом были введены дозы от 500 до 5000 мг/кг белым мышам и от 1000 мг/кг до 5000 мг/кг белым крысам. За животными вели наблюдение. Учитывались клинические симптомы интоксикации в течение 14 дней после введения препарата. Проводился учет количества павших и выживших животных.

Хроническую токсичность препарата «ОВСАР» изучали в эксперименте на белых крысах, которым скармливали в течение 45 дней «ОВСАР» в дозах: 1-ой группе - 2,5 г/кг массы тела; 2-ой группе - 5 г/кг массы тела; 3-ей группе препарат не скармливали и она служила контролем. Все животные содержались на едином рационе. В течение всего опыта за подопытными животными вели наблюдение, учитывали поедаемость корма, прием воды, состояние слизистых оболочек, волосяного покрова, поведение, взвешивали в начале и в конце эксперимента.

Субхроническая токсичность изучена на 30 клинически здоровых цыплятах-бройлерах с массой г при пероральном введении препарата в течение 28 дней. Цыплята были разделены на три группы по 10 голов в каждой. Первая группа – контрольная. Вторая группа получала «ОВСАР» в дозе 0,3 г/кг, третья – в дозе 1,5 г/кг.

Действие препарата оценивали по динамике массы тела цыплят при взвешивании 1 раз в неделю, гематологическим показателям и состоянию системы гемостаза – по окончании введения препарата. Также проводился учет поедаемости корма и приема воды.

Кожно-резорбтивное действие многокомпонентного препарата «ОВСАР» изучали на белых крысах, используя методику погружения хвоста. 10 крыс фиксировали в станке так, чтобы их хвосты были помещены на 2/3 длины пробирки с 50% водной взвесью «ОВСАР». Жидкость в пробирках периодически взбалтывали. Для контроля были взяты 3 белые крысы, хвосты которых погружали в пробирки с чистой водой.

Учет реакции проводили через 4 часа после погружения хвоста. Обращали внимание на наличие местных реакций на коже, степень выраженности токсических эффектов, изменение массы тела животных, количество летальных исходов.

Раздражающее действие «ОВСАР» на слизистые оболочки изучали на морских свинках методом конъюнктивальных проб. В ходе опыта двум животным в конъюнктивальный мешок левого глаза закапывали пипеткой по 2 капли 10% водного раствора «ОВСАР». Для контроля в правый глаз этим же животным вносили по одной капле воды. Регистрировали клиническое состояние организма морских свинок через 0,5; 1; 2; 3; 4; 5 и 6 часов после инстилляции препарата.

Аллергенные свойства препарата «ОВСАР» изучали на белых крысах методом накожных аппликаций и на кроликах методом конъюнктивальных проб. В ходе опыта были использованы животные обоего пола массой 210-220 г. Число животных в опытной и контрольной группах было равным и составляло 8 особей. Животным опытной группы на выстриженные участки кожи боковой поверхности, ближе к середине туловища, наносили водный раствор препарата в разведениях 1:1 по 0,6 мл на площадь 6 см2 (0,1 мл /см2). Препарат наносили в течение трех недель ежедневно. Первоначально проводили нанесение «ОВСАР» в дозе, в 5 раз превышающую сенсибилизирующую дозу. Это тестирование начинали после 10 аппликаций, затем – через 14 и 20 суток от начала аппликации реакцию кожи учитывали по шкале оценки проб. Животным группы контроля применяли только разрешающие дозы.

Эмбриотоксическое действие «ОВСАР» изучали на беременных самках белых беспородных крыс массой + 10 г, в количестве 40 голов, которые были поделены на две равные группы. Начало беременности устанавливали по наличию сперматозоидов во влагалищном мазке. Далее, на 5-е сутки беременности (период имплантации) половине самок из 1-ой группы вводили внутрижелудочно «ОВСАР» в дозе 5 г/кг массы тела. Оставшимся животным данной группы в таком же объеме вводили воду. 10-ти самкам 2-ой группы внутрижелудочно вводили «ОВСАР» в дозе 5 г/кг массы тела на 15-е сутки беременности (период органогенеза). Оставшиеся 10 самок служили контролем и им вводили воду. На 20-е сутки беременности, то есть непосредственно перед родами проводили убой 5 голов животных из каждой группы, при этом учитывали раннюю и позднюю резорбцию плода, общую плодовитость, количество желтых тел беременности, живых и мертвых эмбрионов, проводили обмер и взвешивание плодов.

Осмотром и вскрытием плодов определяли тератогенные свойства «ОВСАР» (Аргунов с соавт., 1999).

От оставшихся 20 самок оставляли до наступления естественных родов. За развитием полученного потомства вели наблюдение: проводили взвешивание, замеры длины тела, хвоста, учитывали сроки отлипания ушей, прорезывания глаз, обрастания шерстным покровом, подвижность и активность высасывания молока матери в течение первых дней жизни.

Содержание тяжелых металлов определяли на атомно-абсорбционном спектрометре «Contr AA700».

Биохимическое исследование крови проводилось на биохимическом анализаторе крови Humu Star 600.

Для определения определения концентрации общего белка (г/л) и липидов (г/л) использовали наборы фирмы «Витал Диагностик» (Санкт-Петербург).

Ветеринарно-санитарная оценка мяса птицы проводилась в соответствии с ГОСТ 25391, ГОСТ Р 51447, ГОСТ 9792, физико-химические свойства по ГОСТ 23637.

Каждую отдельно взятую пробу исследовали в 3-х аналитических повторностях. Цифровой материал, полученный в ходе исследований, был обработан в соответствие с государственной системой обеспечения единства измерений «Единицы физических величин» (в соответствии с Международной системой СИ) (ГОСТ 8.471-81). Были использованы методы математической статистики, стандартизированные для биологических и медицинских наук. С использованием Microsoft Office 10 и Excel 10 для Windows XP осуществлялись расчеты и построение графиков, таблиц, а также их описание. Проверялась достоверность различий по t-критерию Стьюдента. Статистически значимыми считались различия при р<0,05.

3. РЕ­ЗУЛЬ­ТА­ТЫ СОБСТВЕННЫХ ИС­СЛЕ­ДО­ВА­НИЙ

3. 1.Токсико-экологическое аудирование «Задонская»

Задонского района Липецкой области

Хозяйство специализируется на промышленном выращивании индюков-бройлеров крупной белой породы. Общее количество голов на птицефабрики насчитывает 120 000. Технологический цикл замкнутый. Способ содержания - напольный. Хозяйство благополучно по особо опасным и опасным инфекционным и паразитарным болезням.

Химико-токсикологическое исследование воды, кормов. Кормление индюшат-бройлеров возрастом 17-22 недели осуществляется комбикормом «Финишер-2» и БВМД 4305 П, ВМКС 4306 П.

Результаты исследования (табл. 1) показывают, что корма содержат высокие уровни токсичных элементов (свинец, кадмий, ртуть), наблюдается превышение ПДК железа в воде (ПДК = 0,3 мг/л).

Таблица 1

Содержание макро - и микроэлементов в кормах и воде

Проба	Медь мг/кг	Цинк мг/кг	Марганец мг/кг	Железо мг/кг	Свинец мг/кг	Кадмий мг/кг	Ртуть мг/кг
корм из цеха №1	10,3+ 1,15	17,7± 0,87	28,2± 2,10	273,2± 27,31	0,76± 0,02	0,14± 0,03	---
корм из цеха №2	11,60± 0,55	17,8± 1,03	18,9± 1,20	363,0± 40,2	0,8± 0,05	0,07± 0,015	---
корм из цеха №5	9,29± 0,15	17,6± 1,40	62,0± 5,60	320,5± 18,15	0,6± 0,03	0,14± 0,02	0,012± 0,0013
корм из цеха №6	13,6± 0,18	18,3± 0,62	18,2± 1,22	120,3± 13,25	1,5± 0,38	0,12± 0,013	---
Вода	0,50± 0,01	0,026± 0,002	0,012± 0,0004	0,39± 0,045	0,035± 0,003	0,00069± 0,0	---

Изучение распространенности токсических гепатозов индюков-бройлеров показало, что технология выращивания включает целый ряд воздействующих на организм факторов, отрицательно влияющих на общую резистентность и продуктивность птицы. Высокая запыленность помещения в купе с плохой освещенностью птичников препятствуют нормальному развитию организма. Индейки плохо поедают корм в условиях его низкой освещенности.

Высокая плотность посадки молодняка (свыше 3-5 гол/м2) вызывает конфликтность в поголовье. Интенсивный метаболизм молодняка ведет к образованию большого объема экскрементов, что приводит к скоплению углекислого газа, аммиака, сероводорода в местах нахождения птиц. Недостаточный воздухообмен является причиной высоких концентраций вредных газов в птичнике. Высокая плотность посадки птицы обуславливает превышение значений температуры и относительной влажности. Хроническая интоксикация организма птицы субтоксическими уровнями солей тяжелых металлов приводит к дефициту эссенциальных элементов даже при сбалансированном кормлении.

Диспансеризации было подвергнуто поголовье цеха №1, где находилось 1000 индюшат возрастом 140 суток. В процессе диспансеризации поголовья птичника (1000 голов) была установлена полная картина о распространенности и структуре заболеваний токсическим гепатозом. Патология отмечалась у 670 индюков-бройлеров, т. е. у 67 %.

Вследствие технологического стресса, погрешностей в кормлении обмен веществ протекает весьма напряженно. В результате биохимических исследований сыворотки крови была получена биохимическая картина, характеризующая статус организма. Отмечается повышенное содержание АЛТ и АСТ. Также превышены предельно допустимые значения по кадмию и свинцу. Уровень эритроцитов снижен. Гемоглобина недостаточно. Количество лейкоцитов выше нормы. Патологические изменения в перечисленных ранее показателях свидетельствуют о развитии токсической дистрофии печени. В связи с этим регистрировались высокие уровни показателей резервной щелочности, общего белка, и щелочной фосфатазы. На вскрытии у вынуждено убитых и павших птиц отмечали увеличение печени в 1,5-2 раза. Цвет печени варьировал от бурового до желто-коричневого с точечными кровоизлияниями. На разрезе тусклая. Консистенция печени рыхлая. Под капсулой печени отмечали наличие сероватых очажков. При гистологическом исследовании печени отмечена жировая дистрофия гепатоцитов. Желчный пузырь у некоторых особей был растянут желчью.

В табл. 2 представлено содержание отдельных химических элементов в органах и тканях птицы.

Таблица 2

Содержание микро - и макроэлементов в органах и тканях

Наименование пробы	Медь, мг/кг	Цинк, мг/кг	Марганец, мг/кг	Железо, мг/кг	Свинец, мг/кг	Кадмий, мг/кг	Ртуть, мг/кг
Содержимое зоба птицы	6,0± 0,15	19,4± 1,05	8,7± 0,43	100,02± 4,32	0,1± 0,04	0,06± 0,013	0,006± 0,0011
Содержимое желудка	3,8± 0,04	7,72± 0,30	6,5± 0,14	50,26± 2,28	0,3± 0,030	0,18± 0,006	0,0062± 0,0005
Почки	3,7± 0,1	8,40± 0,50	3,9± 0,23	295,36± 6,30	0,48± 0,04	0,16± 0,04	0,008± 0,0032
Печень	4,9± 0,18	59,8± 6,20	2,7± 0,28	281,59± 20,15	0,42± 0,04	0,28± 0,041	0,008± 0,0002
Желудок	3,4± 0,2	30,8± 1,22	0,42± 0,06	75,19± 6,02	0,12± 0,003	0,070± 0,0015	---
ПДК в органах'	5,0	70,0	-	-	0,5	0,05	0,03

В исследуемом материале обнаружены высокие уровни тяжелых металлов, что говорит об их длительном поступлении и кумуляции. Хроническая интоксикация организма птицы субтоксическими уровнями солей тяжелых металлов приводит к дефициту эссенциальных элементов даже при сбалансированном рационе. Клинически это выражается снижением уровней резистентности и продуктивности птицы.