На правах рукописи
ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОРРЕКЦИИ «ФОСФОГЛИВОМ»
В РАЗЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ
НАРУШЕНИЙ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ
ПРИ ОСТРОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ ГЕПАТОПАТИИ
14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Курск – 2012
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор,
заслуженный деятель науки РФ
Официальные оппоненты:
– доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, заведующий кафедрой клинической фармакологии
– доктор медицинских наук, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Воронежский государственный университет», профессор кафедры фармации последипломного образования Учебного центра «Фармация»
Ведущая организация:
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени » Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Защита диссертации состоится «_29_» ___июня___ 2012 г. в «14:30» часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации ( г. Курск,
ул. К. Маркса, 3).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России.
Автореферат разослан «_28_» __мая__ 2012 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. В настоящее время имеет место существенное учащение токсических, в том числе и лекарственных, поражений различных органов и тканей. Значение этих поражений возросло в связи с либерализацией доступа населения к медикаментам, появлением в свободной продаже большого количества безрецептурных лекарственных средств, широким распространением агрессивной рекламы при отсутствии объективной информации о возможном побочном действии (, 2001; , 2004; Колпаков М. А. и др., 2006).
Известно, что поражения печени, как инфекционной, так и токсической этиологии, характеризуются нарушением иммунной реактивности организма в отношении Т-зависимых антигенов (, 2008; , 2011). Важное значение имеет нестабильность течения патологического процесса как при повышении иммунной реактивности организма на эндо - и экзогенные антигены (активация функции клеток-киллеров, усиление аутоиммунных компонентов заболевания), так и при снижении иммунного ответа (повышение чувствительности к возбудителям инфекционных заболеваний, нарушение иммунологической регуляции процессов физиологической и репаративной регенерации) (, 2010).
Сегодня можно говорить о том, что эритроциты вовлекаются в пато-логический процесс не только при гематологических заболеваниях, но и претерпевают серьезные изменения структуры и функции при болезнях разного генеза: злокачественных новообразованиях, воспалении, нарушениях обмена веществ, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, психических расстройствах, инфекционной патологии и др. (, , 2002; с соавт., 2002, 2003; , 2002; и др., 2011).
В настоящее время остается малоизученной роль изменений физико-химических параметров эритроцитов в условиях острой токсической гепатопатии, отсутствуют данные об эффективных способах их фармакологической и нефармакологической коррекции.
Большой интерес авторов привлекают лекарственные препараты на основе глицирризиновой кислоты, поскольку это соединение с выраженной иммуномодулирующей, противовирусной активностью. При этом отсутствуют экспериментальные, а тем более и клинические исследования, посвященные изучению влияния данной группы препаратов на структурно-функциональные свойства эритроцитов (, 2004).
Цель работы: разработка способов фармакологической коррекции с использованием «Фосфоглива» в различных лекарственных формах нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при экспериментальной острой токсической гепатопатии
Задачи исследования.
1. Оценить изменения белкового и липидного спектра мембран эритроцитов в условиях острого токсического поражения печени, вызванного индометацином и четыреххлористым углеродом.
2. Определить сорбционную способность эритроцитов на различных моделях острого токсического поражения печени.
3. Сопоставить влияние «Фосфоглива», «Фосфоглива Форте» и «Фосфоглива» для инъекций на содержание белков и липидов в мембране эритроцитов, сорбционную способность эритроцитов при остром индометациновом поражении печени.
4. Определить эффективность «Фосфоглива» в различных лекарственных формах в коррекции нарушений белкового и липидного спектра мембран эритроцитов, их сорбционных свойств в условиях гепатопатии, вызванной четыреххлористым углеродом.
5. Провести сравнительную оценку фармакологической коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов с использованием «Фосфоглива» в различных лекарственных формах при токсическом поражении печени, вызванном введением индометацина и четыреххлористого углерода.
Научная новизна. Впервые установлены выраженные нарушения белкового и липидного спектра мембран эритроцитов и их сорбционных свойств в условиях острого индометацинового и тетрахлорметанового поражения печени.
Впервые выявлено корригирующее влияние «Фосфоглива», «Фосфоглива Форте» и «Фосфоглива» для инъекций нарушений содержания белков и липидов в мембране эритроцитов, сорбционные свойства красных клеток крови при остром токсическом поражении печени, вызванном индометацином и четыреххлористым углеродом.
Впервые установлено, что в условиях острой индометациновой токсической гепатопатии более эффективна в коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов инъекционная форма «Фосфоглива», а при поражении печени тетрахлорметаном – «Фосфоглив» для инъекций и «Фосфоглив Форте».
Определено, что критериями прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами являются: сорбционная способность эритроцитов, содержание в мембране β-спектрина и триглицеридов.
Практическая значимость. Установлена зависимость выраженности нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропных токсикантов.
Экспериментально доказана эффективность «Фосфоглива» в различных лекарственных формах в коррекции нарушений белкового и липидного спектра мембраны красных клеток крови, их сорбционных свойств на различных моделях острой токсической гепатопатии.
Применение «Фосфоглива», в отличие от «Фосфоглива Форте» и инъекционной формы препарата, в условиях экспериментального острого токсического поражения печени оказалось менее эффективным вне зависимости от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропного токсиканта.
Расширены рекомендации назначения в клинической практике «Фосфоглива» для инъекций с целью коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при остром токсическом поражении печени.
Показана перспектива дальнейшего совершенствования способов фармакологической коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при заболеваниях печени.
Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского, Российского, Самарского государственных медицинских университетов и академий и медицинского факультета Белгородского государственного университета.
Положения, выносимые на защиту.
1. Структурно-функциональные свойства эритроцитов при остром токсическом поражении печени изменяются дифференцированно в зависимости от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропного токсиканта.
2. При острой токсической индометациновой гепатопатии наибольшей эффективностью в коррекции нарушений белкового и липидного спектров мембраны и сорбционных свойств эритроцитов обладает «Фосфоглив» для инъекций.
3. У животных с тетрахлорметановым острым токсическим поражением печени эффективными в коррекции структурно-функциональных свойств красных клеток крови являются инъекционная форма «Фосфоглива» и «Фосфоглив Форте».
4. Для прогнозирования и оценки степени выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами, наиболее диагностически ценными являются определение сорбционной способности эритроцитов и содержание в мембране β-спектрина и триглицеридов.
Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010), XV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2010), Межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии – междисциплинарные проблемы» (Санкт-Петербург, 2010), совместном заседании кафедр фармакологии, биологической химии, хирургических болезней № 2, акушерства и гинекологии Курского государственного медицинского университета (2012).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, 6 из которых в рекомендуемых изданиях ВАК РФ; в работах содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.
Личный вклад автора. Автором составлены план и дизайн исследования, проведен анализ отечественных и зарубежных источников литературы по теме диссертации, лично проводились экспериментальные исследования, анализировались показатели структурно-функциональных свойств эритроцитов. Диссертантом самостоятельно выполнялся анализ и обобщение результатов, составление таблиц и графиков, написание диссертации, сопоставление с литературными данными. Доля автора в совместных публикациях составила 75-95%.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, иллюстрирована 9 таблицами и 9 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 106 отечественных и 97 иностранных источников.
Собственные исследования
Материалы и методы исследования
Экспериментальные исследования. Эксперименты проводили на 296 здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 150-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 10-12 животных. В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника РАМН «Столбовая» одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал ±10%. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986), и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 000 от 01.01.2001 г.). Животных умерщвляли передозировкой средств для наркоза через 24 часа после последнего введения препарата и/или токсиканта.
Дизайн исследования. Способы введения и дозировки фармакологических препаратов. Расчет дозировок препаратов для введения экспериментальным животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз (мг/кг на мг/м2) для крысы и человека в зависимости от массы тела (FreIreich E.J., 1966) (табл. 1).
Токсическое поражение печени моделировали внутрижелудочным введением индометацина в дозе 5 мг/кг, внутрижелудочно, трехкратно, через 24 часа (, 1995) или внутримышечным введением 3 мл/кг четыреххлористого углерода в виде 50% раствора в оливковом масле, трехкратно, через 24 часа (, 1991). Токсикант вводили в последние 3 дня получения препаратов «Фосфоглива».
Таблица 1
Использованные препараты, дозировки, способы и кратность введения интактным крысам и животным с острым токсическим
поражением печени
Препарат | Доза, мг/кг, в пересчете на: | Введение | |||
Лецитин | ГК | Способ | Количество | Кратность | |
«Фосфо-глив» | 1500 | 800 | внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии | 14 | Через 24 часа |
«Фосфоглив Форте» | 1500 | 240 | внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии | 14 | Через 24 часа |
«Фосфо-глив» для инъекций | 1500 | 600 | внутрибрюшинно | 14 | Через 24 часа |
Информация о лекарственных формах «Фосфоглива», изученных в работе. «Фосфоглив» – препарат, состоящий из липоида С80 (0,065 г), глицирата (0,035 г), микрокристаллической целлюлозы HP 101 (0,08 г), кальция карбоната (0,2636 г), аэросила А300 (0,0032), кальция стеарата (0,0032 г), талька (0,01).
«Фосфоглив Форте» – состоит из липоида PPL-400 (0,300 г), глицирата (0,065 г), бутилгидрокситолуола (0,0001 г), масла подсолнечного (0,0229 г), спирта этилового ректификата (0,012 г).
«Фосфоглив» для инъекций – лиофилизированный порошок, состоящий из лецитина (0,5 г) и глицирризиновой кислоты (0,2 г).
Исследование структурно-функциональных свойств эритроцитов. Эритроциты получали из 5 мл гепаринизированной крови по методу E. Beutler (1985) с незначительной модификацией. Цельную кровь отстаивали дважды в 10 мМ Na-фосфатном буфере (рН=7,4), содержащем 0,9% хлорида натрия и 3% декстрана Т-500, в течение 30 минут при температуре 37ºС. После этого кровь центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость аспирацией. Эритроцитарную массу подвергали дополнительной очистке на хроматографической колонке через НВS-целлюлозу.
Определялась общая сорбционная способность эритроцитов, обусловленная наружной архитектоникой клеточной мембраны ( и др., 1988), сорбционная емкость гликокаликса эритроцитов для альцианового синего (, 1998) и уровень малонового диальдегида в эритроцитах ( и др., 1987).
Мембраны эритроцитов получали методом G. T. Dodge (1963), разрушая эритроциты осмотическим и механическим гемолизом в 10 мМ Na-фосфатном буфере, после чего проводили отмывку теней от гемоглобина в 10 мМ и 5 мМ Na-фосфатном буфере. Электрофорез проводили в присутствии додецилсульфата натрия в вертикальных пластинах полиакриламидного геля по методу U.K. Laemmli (1970). Белки окрашивали кумаси голубым R-250 по модифицированной методике G. Fairbanks (1971). Количественное содержание белковых фракций рассчитывали через площадь и известную концентрацию яичного альбумина, выступающего в качестве маркерного белка. Полученные значения пересчитывали на 1 мг общего белка в исследуемом образце сухих мембран эритроцитов. Липиды выделяли методом тонкослойной хроматографии ( и др., 1984).
Статистическая обработка полученных результатов. Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя параметрические и непараметрические методы, факторный анализ, кластерный анализ, критерий χ2, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена (, Генкин А. Р., 1973; , 1980). Статистически значимыми считали различия с p<0,05.
___________________________
Примечание. Определение белкового и липидного спектра мембран эритроцитов проведено в лаборатории иммуноферментного анализа НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета, за что выражаем сотрудникам соответствующего подразделения глубокую признательность.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при четыреххлористом токсическом поражении печени и использовании «Фосфоглива». При ОТПП у экспериментальных животных снижается представительность в мембране эритроцитов обеих подфракций спектрина, анкирина, анионтранспортного белка (АТБ), белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (Г-3-ФД), тропомиозина, глутатион-S-трансферазы и повышается уровень белка полосы 4.1 и паллидина (табл. 2). Кроме этого, в данной группе животных снижена ССЭ, СЕГ и повышена концентрация внутри красных клеток крови малонового диальдегида (МДА) (табл. 2).
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 |
