Морфометрические особенности постнатального развития околоушной слюнной железы крыс в условиях питания диспергированной пищей (стр. 2 )

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, списка литературы. Текст диссертации изложен на 148 страницах машинописного текста, иллюстрирован 32 рисунками и 9 таблицами. Список использованной литературы содержит 285 работ, из которых 104 отечественных и 181 иностранных авторов.

Содержание работы

Материал и методы исследования

Экспериментальные исследования проведены на 56 самцах беспородных белых крыс (табл. 1). Для периодизации постнатального онтогенеза крыс использована схема, предложенная и (1975). Забор материала осуществляли в возрасте 21 (поздний молочный период), 60 (препубертатный период), 120 (пубертатный период), 180 (репродуктивный период), 240 (период возмужания) суток развития. На 21-е сутки после рождения животных произвольно разделяли на контрольную и две
(I и II) опытные группы. Животные контрольной группы (контроль) содержались в обычных условиях вивария на естественном для грызунов корме. Животных I опытной группы (опыт I) с 21-х по 240-е сутки эксперимента кормили диспергированной пищей того же состава (измельченная в механической мельнице зерновая смесь, переработанные посредством мелкой терки овощи и мясной фарш). Животные II опытной группы (опыт II) питались диспергированной пищей до 120-х суток постнатального онтогенеза, после чего переводились до окончания эксперимента (240-е сутки онтогенеза) на корм животных контрольной группы. Забор материала животных II опытной группы, осуществляли на 180-е и 240-е сутки постнатального онтогенеза. Все эксперименты проводились в соответствии с «Правилами проведения работ и использования экспериментальных животных», утвержденных Приказом МЗ СССР № 000 от 12 августа 1977г., а также положениями Хельсинкской Декларации от 1964 г., дополненной в 1975, 1983, 1989 и 2000 гг. На проведение исследований было получено разрешение Этической Комиссии Ульяновского государственного университета № 03 от 22 января 2010 г.

Описание, сравнительно-морфологический анализ и морфометрия структур околоушных слюнных желез производились на гистологических препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином Майера и гематоксилин-пикрофуксином по методу Ван-Гизона с помощью бинокулярного микроскопа Motic B3 (Motic, КНР) при увеличении 10´100. Также срезы околоушной слюнной железы окрашивали метиловым зеленым-пиронином по Браше, а также проводили ШИК-реакцию (, 1967). Для морфометрического исследования использовалась компьютерная система, включающая микроскоп, цифровую видеокамеру JVC (Victor company, Япония) и компьютерную программу денситофотометрии «Мекос-Ц1» (Россия). В процессе морфометрических исследований руководствовались рекомендациями (1990).

Таблица 1

Материал и методы исследования

Методы исследова- ния Гуппа животных, возраст (сутки)	Анатоми-ческие	Гистологи- ческие (количество животных / препаратов)	Морфометрические
Определение веса и длины тела	Измерение длины кишечника	Ацинусы (4 параметра)	Ядра сероцитов (2 параметра)	Вставочные протоки (6 параметров)	Ядра эпителио-цитов ВП (2 параметра)	Исчерченные протоки (6 параметров)	Ядра эпителио-цитов ИП (2 параметра)
Контроль-Опыт 21	5	-	5/12	251	1017	90	563	89	819
Контроль-60	5	4	5/20	246	1045	87	547	96	863
Опыт I-60	5	5	5/18	211	842	38	244	64	579
Контроль-120	5	5	5/21	253	1091	88	589	114	1027
Опыт I-120	5	5	5/22	231	946	58	365	107	940
Контроль-180	5	5	5/19	251	1120	68	447	142	1318
Опыт I-180	5	5	5/19	254	1171	55	356	133	1230
Опыт II-180	5	5	5/27	231	1010	61	416	177	1660
Контроль-240	5	5	6/14	261	1272	74	511	128	1213
Опыт I-240	5	5	5/19	249	1168	64	444	164	1571
Опыт II-240	5	5	5/17	254	1216	85	583	161	1526
Всего	55	49	56/217	2692	11898	768	5065	1375	12746

Морфометрические исследования включали определение:

-  площади сечения ацинусов, просветов и стенок внутридольковых протоков, ядер и цитоплазмы сероцитов и эпителиоцитов внутридольковых протоков (мкм2);

-  эквивалентного диаметра ацинусов, просветов внутридольковых протоков и их диаметра, ядер сероцитов и эпителиоцитов (мкм);

-  количества клеток на площади сечения ацинусов, а также в стенке внутридольковых протоков на их поперечных срезах;

-  ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО) сероцитов и эпителиоцитов внутридольковых протоков.

Определялись также вес животных, индивидуальное количество потребляемой пищи в граммах, длина тела, тонкого и толстого кишечника в сантиметрах. Полученные данные подвергали статистической обработке с помощью пакета прикладной компьютерной программы «Statistica 6.0» (StatSoft Inc., USA). При описании данных использовались основные показатели описательной статистики (, 2002). Сравнение выборок проводилось с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Поскольку в диссертации исследованы морфологические параметры органа животных разных возрастных групп, то проводился дисперсионный анализ Краскела-Уоллиса. Оценка прямолинейной зависимости параметров проводилась при помощи корреляционного анализа по методу Пирсона.

Результаты исследования и их обсуждение

Постнатальный морфогенез околоушной слюнной железы белых крыс

Ранние этапы постнатального морфогенеза околоушной слюнной железы белых крыс характеризуются статистически значимым уменьшением диаметра ацинусов с 16,92±0,12 мкм до 16,41±0,13 мкм, обуславливая тенденцию снижения их площади (табл. 2). При этом ЯЦО сероцитов последовательно увеличивается, а затем к 120-м суткам снижается и стабилизируется до 240-х суток. В более позднем периоде онтогенеза с 60-х по 240-е сутки происходит рост площади сечения и диаметра ацинусов, вероятно, обусловленный увеличением площади сечения цитоплазмы сероцитов, а в период возмужания (180-240-е сутки) увеличением их числа на площади сечения ацинуса.

Период с 60-х по 120-е сутки характеризуется статистически значимым увеличением площади сечения и диаметра просветов вставочных протоков, а также уменьшением их стенок и диаметра. Последнее, на наш взгляд, обусловлено снижением площади сечения ядер и цитоплазмы эпителиоцитов на фоне увеличения их количества в стенках протоков. В указанный период постнатального онтогенеза ЯЦО эпителиоцитов уменьшается (р<0,01). Последующему периоду (120-240-е сутки) свойственны как увеличение площади сечения стенок, так и просветов вставочных протоков, что сопровождается одновременным увеличением площади ядер и цитоплазмы эпителиоцитов и их числа на площади сечения протока, аналогично ацинусам. К концу периода возмужания (240-е сутки) величина ЯЦО эпителиоцитов вставочных протоков достоверно снижается (табл. 3). Возрастная динамика изменений морфометрических параметров исчерченных выводных протоков принципиально не отличается от таковой вставочных протоков.

Таким образом, в норме морфогенез околоушной слюнной железы в период с 21-х по 240-е сутки характеризуется увеличением в 1,5 раза площади сечения концевых отделов, в основе которого лежит увеличение как количества сероцитов на площади сечения ацинуса, так и размеров самих клеток. При этом, судя по ЯЦО, функциональная активность сероцитов отличается максимальной интенсивностью в пубертатном периоде (60-120-е сутки) постнатального онтогенеза. Изменения морфометрических параметров внутридольковых выводных протоков околоушной слюнной железы характеризуются двухэтапностью. Уменьшение площади сечения стенок вставочных и исчерченных протоков в раннем постнатальном онтогенезе сменяется их увеличением на более поздних этапах. Эти явления сопровождаются аналогичными изменениями размеров ядер и цитоплазмы эпителиоцитов. Функциональная активность эпителиоцитов внутридольковых выводных протоков наиболее интенсивно увеличивается на поздних этапах постнатального онтогенеза.

Особенности постнатального морфогенеза ацинусов околоушной
слюнной железы белых крыс при питании диспергированной
пищей

Препубертатный период характеризуется уменьшением площади сечения и диаметра ацинусов животных I опытной группы, что обусловлено статистически значимым снижением площади ядер и цитоплазмы сероцитов.