3.1.2 Инфекции дыхательных путей (стр. 9 )

- выделение культуры возбудителей особо опасных микозов из предполагаемого источника.

Хранение штаммов возбудителей особо опасных микозов

Штаммы микромицетов II группы патогенности поддерживаются в сапрофитической фазе путем периодических пересевов на плотных питательных средах. В качестве основной среды используют плотную среду Сабуро с левомицетином (50 г/л), а частота пересевов составляет 1 раз в 4 месяца.

7 Режим работы в лабораториях, работающих с микромицетами II группы патогенности (опасности)

Все работы с возбудителями особо опасных микозов должны проводиться в строгом соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».

1. В случае аварии во время работы в лаборатории с заразным материалом, как то: бой посуды с посевами, разбрызгивание из шприца или пипетки жидкостей, содержащих возбудителей глубоких микозов, а также во всех других случаях, ведущих к загрязнению заразным материалом окружающих предметов, одежды и открытых частей тела самих работников, немедленно принимаются следующие меры:

а) если не было разбрызгивания заразного материала в воздухе сотрудник, не выходя из комнаты тотчас же вызывает заведующего лабораторией или руководителя учреждения, включает бактерицидную лампу и одновременно приступает к обеззараживанию дезинфицирующими растворами (5% раствор фенола, лизола, формальдегида) всех открытых частей тела, если на них попал заразный материал или имеется подозрение на его попадание;

б) в соседней комнате с пострадавшего снимается зараженная одежда, в последнюю очередь маска, а находившиеся под одеждой подозрительные на соприкосновение с заразным материалом части тела пострадавшего подвергаются обработке дезинфицирующими растворами;

в) сотрудник, оказывающий помощь пострадавшему, должен быть одет в противочумный костюм 1 типа;

г) в глаза и нос пострадавшему вводят несколько капель 1 % раствора азотно-кислого серебра, рот и горло прополоскивают несколько раз раствором перманганата калия 1:2000;

д) после предварительного обеззараживания пострадавший должен принять душ и надеть чистую одежду;

е) снятая с пострадавшего одежда подвергается дезинфекции;

ж) сотрудник, помогавший потерпевшему аварию, проводит дезинфекцию помещения, где произошла авария, объем и вид которой определяется руководителем учреждения в зависимости от характера аварии;

з) сотрудник, проводивший дезинфекцию после снятия одежды и ее дезинфекции, также принимает душ и надевает чистую одежду;

и) если имело место разбрызгивание зараженного материала (бой посуды с культурой, разрыв шприца и т. п.), сотрудники, находившиеся в комнате, немедленно выходят из нее в соседнее помещение, плотно закрывают за собой дверь, чтобы не иметь дальнейшего контакта с заразным материалом, распыленным в воздухе. После этого осуществляют все вышеуказанные меры дезинфекции и санобработки.

2. В случае подозрения на инфицирование пострадавший должен находиться под наблюдением терапевта или инфекциониста в течение 3 недель с обращением внимания на явления со стороны дыхательных путей, эритематозные высыпания и другие симптомы.

3. Вопрос о применении профилактического лечения решается в каждом конкретном случае.

Профилактическое лечение может быть назначено лишь при подозрении на массивное заражение спорами грибов при аварии с разбрызгиванием заразного материала в большом объеме.

4. В случае подозрения, что сотрудник учреждения заболел кокцидиоидомикозом, гистоплазмозом, бластомикозом или паракокцидиоидомикозом, руководитель учреждения обязан немедленно сообщить об этом руководству Роспотребнадзора.

8 Профилактика особо опасных микозов

Специфическая профилактика особо опасных микозов до сих пор не разработана.

Экстренная профилактика особо опасных микозов путем введения медикаментозных средств не применяется. Гуморальные антитела при микозах хотя и формируются, но защитной роли не играют.

Наиболее эффективными в эндемичных очагах глубоких микозов являются меры личной и общественной профилактики. Они связаны с возможностью предотвращения аэрогенного попадания грибов в организм. Для этого используются обычные респираторы.

Общественные меры профилактики (особенно при кокцидиоидомикозе) связаны с увлажнением почвы, асфальтированием площадок, примыкающих к жилищу и т. д. В эндемичных очагах гистоплазмоза рекомендуется ликвидация мест скопления птиц (особенно, скворцов).

Учитывая высокую опасность внутрилабораторных заражений возбудителями особо опасных микозов, при работе с ними предусмотрены меры безопасности, регламентированные санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».

Приложение 1

Питательные среды, применяемые для выделения и идентификации возбудителей особо опасных микозов

Агар Сабуро

-  Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1,0 г

-  D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 4,0 г

-  Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

-  Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72 – до 100 мл

-  Левомицетин (хлорамфеникол) – 0,005%

Агар Чапека

-  D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 20,0 г

-  Калий фосфорнокислый двузамещенный, 3-водный, чда,

ГОСТ 2493-75 – 1,0 г

-  Натрий азотнокислый, хч, ГОСТ 4168-70 – 3,0 г

-  Калий хлористый, хч, ГОСТ 4234-77 – 0,5 г

-  Магний сернокислый, 7-водный, хч, ГОСТ 4523-77 – 0,5 г

-  Железо (II) сернокислое, 7-водное, хч, ГОСТ 4148-78 – 0,015 г

-  Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

-  Водопроводная вода – 1 л

Среда Фрэнсиса

-  Мясной бульон – 1000 мл

-  Дефибринированная кровь (кроличья или лошадиная) – 8%

-  Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1%

-  D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 1%

-  Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 0,5%

-  L-Цистеин, ч, ТУ 6-09-3251-73 – 0,1%

-  Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

Среда применяется для выращивания дрожжевой фазы возбудителя гистоплазмоза из мицелиальной, реже для хранения музейных культур дрожжевой фазы возбудителя.

Сердечно-мозговой агар

-  Вытяжка из говяжьего мозга – 20%

-  Вытяжка из говяжьего сердца – 25%

-  Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1%

-  Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 0,5%

-  Натрий фосфорнокислый двузамещенный, чда, ГОСТ 11773-76 – 0,25%

-  D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 0,2%

-  Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

Среда применяется для культивирования дрожжевой фазы возбудителя гистоплазмоза.

Сахарный мясо-пептонный агар

-  Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

-  Мясной бульон – 100 мл

-  Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1%

-  Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 0,5%

-  D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 1%

Среда применяется для выращивания дрожжевой фазы возбудителей бластомикоза и паракокцидиоидомикоза.

Среда Курунга

-  Крахмал (нерастворимый) – 1,0 г

-  Желтки куриных яиц – 150 мл

-  Белки куриных яиц – 50 мл

-  Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72 – 100 мл

Среда применяется для хранения дрожжевой фазы возбудителя гистоплазмоза.

Среда Конверса

-  Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72 – 1 л

-  Калий фосфорнокислый однозамещенный, хч, ГОСТ 4198-75 – 0,3 г

-  Калий фосфорнокислый двузамещенный, 3-водный, чда,

ГОСТ 2493-75 – 0,4 г

-  Магний сернокислый, 7-водный, хч, ГОСТ 4523-77 – 0,4 г

-  Цинк сернокислый, 7-водный, чда, ГОСТ 4174-77 – 0,2 мл (1% р-р)

-  Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 1,4 мл (1% р-р)

-  Кальций хлорид, 2-водный, ч, ТУ 6-09-5077-83 – 0,003 г

-  Натрий углекислый кислый, хч, ГОСТ 4201-79 – 1 мл (1% р-р)

-  Аммоний уксуснокислый, хч, ГОСТ 3117-78 – 1,23 г

-  D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 10 г

Среда применяется для получения сферул возбудителя кокцидиоидомикоза.

Приложение 2

Приготовление рабочих растворов и реагентов

для проведения ПЦР

2.1 Лизирующий буфер с 6 М гуанидинтиоцианатом (ЛБ) – на 50 мл: гуанидинтиоцианат Na – 35,4 г, растворяют в дистиллированной воде, добавляют 1 мл 0,5 раствора ЭДТА и доводят до 50 мл дистиллированной водой. К раствору гуанидинтиоцианата Na добавляют в сухом виде дитиотрейтол (ДТТ) до конечной концентрации 20мМ. На 50 мл раствора гуанидинтиоцианата Na необходимо взвесить 154 мг. Буфер хранят в полипропиленовой посуде при 4-10 оС до 6 месяцев.

2.2 Раствор 4 М гуанидинтиоцианата натрия – навеску гуанидинтиоцианата Na, равную 23,6 г растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора до 50 мл. Рекомендуется добавить ДТТ до конечной концентрации 20мМ.

2.3 Раствор для первой отмывки 1 – к 1 мл раствора 1 М Трис-HCl, рН 8,5, добавить 1 мл 5 М раствора натрия хлорида, довести объем до 30 мл дистиллированной водой и добавить спирт этиловый 70 мл. Буфер хранят в полипропиленовой посуде при 4-10 оС – до 6 месяцев.

2.4 Суспензия сорбента (СС) – готовят 50 % (вес/объем) суспензию силикагеля (SiO2) с размером частиц 0,5-10 мкм в деионизованной воде.

2.5 TE буфер рН 7,4: на 100 мл – 1М раствор Трис-HCl, рН 8,0 – 1 мл, 0,5 М раствор ЭДТА – 0,2 мл, деионизованная вода – до 100 мл. Буфер хранят в полипропиленовой посуде при 4-10 оС – до 6 месяцев.

2.6 0,5 М раствор ЭДТА, рН 8,0. 18,61 г соли помещают в химический стакан на 100 мл, добавляют 80 мл дистиллированной воды, интенсивно размешивают на магнитной мешалке и доводят рН до 8,0±0,1 с помощью натрия гидроокиси. Раствор хранят в темной полипропиленовой посуде при температуре (4±2) оС до 3 мес.

2.7 1 М раствор трис-HCl, рН 8,0±0,1. Навеску трис-(оксиметил)-аминометана – 6,5 г помещают в химический стакан на 50 мл, добавляют 25 мл дистиллированной воды. После полного растворения соли доводят дистиллированной водой до 50 мл и выставляют рН 8,0±0,1 с помощью концентрированной соляной кислоты. Раствор хранят при температуре (4±2) оС до 3 мес.