Так как метод радиотерапии применяется в настоящее время чаще, чем энуклеация, ТИАБ представляет собой эффективный способ проведения генетического анализа для всех пациентов с увеальной меланомой. Для пациентов, которым была впоследствии проведена энуклеация, возможно проведение повторного генетического анализа, для сбора дальнейшей информации о гетерогенности опухоли и чувствительности теста. В целом, результаты работы свидетельствуют об адекватности и оправданности применения ТИАБ для генетического анализа.
ВЫВОДЫ
1. Проведен анализ потери гетерозиготности хромосомных районов 1p36, 1р31.3, 3p25.3, 3p21.3, 3p14.2, 3q12, 3q26.3, 3q28, 8p22, 9p21.2-p21.3, 10q23.2-q23.3, 13q14. Наиболее частым специфическим изменением, выявленным в клетках увеальной меланомы, является ПГ по всем информативным маркерам хромосомы 3, определенная как моносомия 3 (45%). Выявлено наличие аллельных потерь в хромосомных локусах 1р36 (29,9%) и 8р22 (35,9%).
2. Проведен анализ метилирования генов CDKN2A, RB1, RASSF1A, MLH1, FHIT и VHL. Показано, что метилирование промоторной области RASSF1A определяется в 24,3% образцов УМ, а в условно нормальной хориоидее тех же пациентов метилирование отсутствует.
3. Показано, что для увеальной меланомы не характерны основные молекулярные нарушения, свойственные меланоме кожи, в том числе мутация T1796A гена BRAF, аллельные делеции в локусе PTEN, а также ПГ и гиперметилирование промоторных районов генов пути регуляции CDKN2A → RB1.
4. Обнаружены статистически достоверные ассоциации моносомии 3 с агрессивными характеристиками опухоли, такими как эпителиоидный клеточный тип (р<0,0001), цилиарная локализация (р=0,001) и пигментация (р=0,018). Определена достоверная ассоциация аллельных делеций 1р36 с экстрасклеральной инвазией опухоли (р=0,012), снижающей выживаемость пациентов, а также с увеличенным размером опухоли (р=0,024). Также определена ассоциация метилирования гена RASSF1A с отсутствием аллельных потерь по маркерам RASSF1A в хромосоме 3.
5. Разработана система диагностических маркеров увеальной меланомы, основанная на анализе молекулярно-генетических нарушений в образцах опухоли. Подтверждено, что ТИАБ представляет собой эффективный способ получения материала для генетического анализа пациентов с увеальной меланомой, позволяющий провести микросателлитный анализ не менее чем по 15 маркерам.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
В настоящей работе получены данные о характерных генетических и эпигенетических нарушениях при УМ, выявлены ассоциации структурных и численных хромосомных нарушений с прогрессией первичной опухоли. Комплексный анализ полученных данных и сопоставление их с данными литературы позволили предложить практические рекомендации по использованию результатов настоящей диссертационной работы в клинической практике.
1. Определение потери гетерозиготности по маркерам хромосомы 3 и 1р36 в материале первичной опухоли целесообразно проводить наряду с патоморфологическим исследованием для дифференциальной диагностики и оценки прогноза УМ.
2. Материал, полученный с помощью ТИАБ, может быть использован для комплексного исследования, включающего не только морфологический, но и молекулярно-генетический анализ.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Манохина, метилирования промоторных областей некоторых генов-супрессоров онкогенеза в увеальных меланомах / , , // Молекулярная медицина. – 2009. - №2, - С. 27-31
2. Манохина, И. К. Aнализ аллельных потерь в увеальных меланомах / , , // Медицинская генетика. – 2008. –Том 7, №6 (72). - С.19-23
3. Залетаев, маркеры в диагностике онкозаболеваний / , , // Молекулярная медицина. – 2008. - №4. – С.46-51
4. Системы ДНК-маркеров в диагностике онкозаболеваний / под. ред. . М.: МЕДИЦИНА, 2009. - в печати
5. Manokhina, I. K. Status of some tumor-suppressor loci in uveal melanoma / I. K. Manokhina, N. V. Sklyarova, S. V. Saakyan, D. V. Zaletaev // European Journal of Human Genetics. – 2009. - Vol. 17. – Suppl. 2. - в печати
6. Manokhina, I. K. Analysis of the molecular genetic changes in uveal melanoma / I. K. Manokhina, N. V. Sklyarova, S. V. Saakyan, D. V. Zaletaev // European Journal of Human Genetics. – 2008. - Vol. 16. – Suppl. 2. - p.237
7. Манохина, И. К. Aнализ молекулярно-генетических нарушений в увеальных меланомах / , , // Сбрник тезисов к V Конференции молодых ученых России "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины." – 2008. – С. 266
8. Манохина, аспекты увеальной меланомы: хромосомные нарушения и идентификация генов, вовлеченных в канцерогенез / , , // Современные технологии в дифференциальной диагностике и лечении внутриглазных новообразований: сб. науч. тр. – Москва, 2007. - С. 93-97
9. Manokhina, I. K. Identification of tumor-suppressor loci that may contribute to the pathogenesis of uveal melanoma / I. K. Manokhina, N. V. Sklyarova, S. V. Saakyan, D. V. Zaletaev // European Journal of Human Genetics.- 2007. - Vol. 15. - Suppl. 1, p.173
10. Manokhina, I. K. Status Of Some Tumor-Suppressor Genes In Uveal Melanoma / I. K. Manokhina, N. V. Sklyarova, S. V. Saakyan, D. V. Zaletaev // Abstracts for International Society of Ocular Oncology Meeting. - 2007, - р.314
11. Saakyan, S. V. Correlation Between Clinical-Morphological And Genetic Parameters In Uveal Melanoma / S. V. Saakyan, N. V. Skliarova, G. V. Zaharova, I. K. Manokhina, D. V. Zaletayev // Abstracts for International Society of Ocular Oncology Meeting. - 2007, - р. 210.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ И АББРЕВИАТУРЫ ГЕНОВ
ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота
п. н. – пар нуклеотидов
ПГ – потеря гетерозиготности
ПЦР – полимеразная цепная реакция
ТИАБ – тонкоигольная аспирационная биопсия
УМ – увеальная меланома
SRO – наименьшие области перекрывания делеций
RASSF1A - Ras association (RalGDS/AF-6) domain family member 1
VHL - von Hippel-Lindau tumor suppressor
FHIT - fragile histidine triad gene
MLH1 - mutL homolog 1, colon cancer, nonpolyposis type 2
CDKN2A - cyclin-dependent kinase inhibitor 2A (melanoma, p16, inhibits CDK4)
RB1 - retinoblastoma 1
BRAF - v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 |
