Метод микродиффузии. Этот метод, основанный на реакции с реактивом Фолина — Чиокальто, применяется для обнаружения фенола в моче, крови и гомогенатах тканей.
Наружную и внутреннюю камеры прибора для микродиффузии заполняют так, как и при исследовании сульфидов. Через 3—4 ч определяют наличие фенолов.
К 1 мл жидкости, взятой из внутренней камеры прибора, прибавляют 2—3 мл 10 %-го раствора гидроксида натрия и 0,5 мл фенолового реактива Фолина-Чиокальто, разбавленного водой (1:3). При наличии фенолов появляется синяя окраска.
5.Достоинства и недостатки метода изолирования лекарственных веществ подкисленным спиртом. Существует ли преимущество у экстрагента этилового спирта перед водой?
Метод Стаса-Отто (1851 г.) - изолирование этиловым спиртом, подкисленным щавелевой или винной кислотой.
Измельченный биологический материал (100-200 г внутренних органов трупа) помещают в колбу, заливают 96% этиловым спиртом так, чтобы были покрыты твердые части объекта, подкисляют 10% спиртовым раствором виннокаменной (или щавелевой) кислоты до значения рН среды 2 - 3 и оставляют на сутки. Объект периодически перемешивают, а значение рН контролируют. Если реакция среды изменилась, то значение рН среды доводят до 2 - 3. Через сутки спиртовые извлечения сливают и операцию экстракции подкисленным спиртом повторяют трижды.
Спиртовые вытяжки объединяют и упаривают на водяной бане при температуре не выше 40°С до консистенции сиропа. Сиропообразную вытяжку обрабатывают 96% спиртом, добавляя его по каплям до тех пор, пока не прекратится осаждение белков. Осадок отфильтровывают и операцию осаждения белков повторяют до полного их удаления. Фильтрат упаривают при температуре 40°С до густоты сиропа и разбавляют горячей водой. Если при разбавлении водой выпадает осадок, его отфильтровывают.
Из полученного водного кислого раствора производят трехкратное извлечение веществ кислотного характера небольшими порциями хлороформа (по 10-15 мл). Далее водное извлечение подщелачивают 25% раствором гидроксида аммония до рН 10 и трижды 'экстрагируют вещества основного характера хлороформом (по 10 -- 15 мл).
Биологический объект (Экстрагирование спиртом, подкисленным винной кислотой)
↓
Упаренное спиртовое извлечение (рН < 7) Осаждение белков абсолютным спиртом
↓
Очищенное спиртовое извлечение (Выпаривание)
↓
Сухой остаток (Обработка горячей водой, подкисление)
↓
Водная фаза (рН < 7)
Экстрагирование хлороформом Подщелачивание
↓ ↓
Хлороформное извлечение из кислого раствора (ВКХ) Водная фаза (рН > 7)
Экстаргирование хлороформом
Хлороформное извлечение, из
щелочного раствора (ВОХ)
Достоинством метода Стаса-Отто является использование на первом этапе изолирования этилового спирта амфифильного растворителя, который хорошо растворяет многие токсические вещества независимо от того, в какой форме они находятся в биологическом материале: в молекулярной или ионной. Это позволяет достаточно полно изолировать как вещества кислотного, так и основного характера (в среднем выход 23 - 50%).
В методе предусмотрена очистка извлечения от примесей, что делает его пригодным для исследования гнилостно измененного биологического материала.
Метод изолирования подкисленным спиртом обладает рядом недостатков, к числу которых относятся следующие: длительность (8-10 дней), большое количество операций.
Классический метод Стаса-Отто теряет свое значение и заменяется более быстрыми, эффективными и экономичными методами.
К экстрагенту предъявляются следующие требования:
• Экстрагент должен хорошо растворять исследуемые вещества. При использовании гидрофильных растворителей токсические вещества переводят в ионизированное состояние. При использовании гидрофобных экстрагентов - вещество переводят в неионизированное состояние.
• Экстрагент должен хорошо проникать в клетки тканей. Гидрофильные и гидрофобные растворители плохо проникают в клетки тканей через липопротеиновую мембрану клеток. Амфифильные растворители, смешиваясь с липидами и другими компонентами клеточной стенки, легко проникают внутрь клетки.
•Экстрагент должен обладать избирательностью и универсальностью. При проведении ненаправленного химико-токсикологического анализа предпочтительнее использовать универсальные растворители (амфифильные). При направленном ходе анализа на конкретное вещество лучше использовать селективный растворитель, который хорошо экстрагирует исследуемое вещество и в тоже время в минимальном количестве извлекает примеси.
• Экстрагент должен иметь низкую температуру кипения, чтобы в ходе анализа его можно было легко удалить.
При изолировании веществ кислотного и основного характера используются различные экстрагенты. В зависимости от свойств они подразделяются на три группы:
1. Гидрофильные (полярные). Примером таких экстрагентов является вода, подкисленная вода, подщелоченная вода. Полярные экстрагенты в процессе изолирования токсических веществ смешиваются с водой, содержащейся в тканях внутренних органов, практически не смешиваются с липидами, плохо проникают внутрь клеток через липопротеиновую мембрану. Полярные экстрагенты характеризуются большой величиной диэлектрической проницаемости (ε воды = 81), они хорошо растворяют вещества, находящиеся в ионизированной форме.
2.Липофильные (гидрофобные, неполярные). К этой группе экстрагентов относятся органические растворители и их смеси: хлороформ, бензол, дихлорэтан, четыреххлористый углерод, диэтиловый эфир, гексан. Липофильные экстрагенты не смешиваются с водой, хорошо растворяют липиды тканей внутренних органов. Диэлектрическая проницае мость липофильных растворителей низкая, среднее значение ε менее 15. Самым неполярным среди них является гексан (е=1,9). Такие экстрагенты преимущественно растворяют вещества, находящиеся в неионизированной форме.
3. Амфифильные (амфотерные). К группе амфифильных экстрагентов относятся низшие спирты (метиловый, этиловый, пропиловый), ацетон, ацетонитрил, диметилформамид, диметилсульфоксид. Эктрагенты этой группы хорошо смешиваются и с липидами, и с водой, содержащейся во внутренних органах, растворяют вещества в ионизированной и неионизированной форме. Величина диэлектрической проницаемости амфифильных растворителей ε лежит в пределах от 20 до 50.
6.Какая из именных реакций является общей для атропина, дикаина, стрихнина и аминазина? Укажите химизм для каждого вещества.
Реакция Витали — Морена. Эта реакция основана на том, что при нагревании атропина с азотной кислотой он разлагается на тропин и троповую кислоту. При действии азотной кислоты на троповую кислоту образуется тринитропроизводное этой кислоты, имеющее желтую окраску:
При действии щелочи на тринитропроизводное троповой кислоты появляется фиолетовая окраска:
Выполнение реакции. В фарфоровую чашку вносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества и при комнатной температуре выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты, жидкость на кипящей водяной бане выпаривают досуха. При этом сухой остаток приобретает желтую окраску. К сухому остатку с одной стороны помещают 3—5 капель ацетона, а с другой — 1—2 капли 10 %-го спиртового раствора гидроксида калия. При соприкосновении указанных растворов с сухим остатком появляется быстроисчезающая фиолетовая окраска. Появление этой окраски указывает на наличие атропина в исследуемом растворе. Предел обнаружения: 1 мкг атропина в пробе.
Кроме атропина эту реакцию дают: гиосциамин, скополамин, вератрин, стрихнин и другие вещества. При наличии перечисленных веществ окраска имеет несколько иной оттенок и исчезает быстрее, чем окраска атропина.
При нагревании дикаина с азотной кислотой образуется остаток желтоватого цвета, от прибавления к которому спиртового раствора щелочи появляется кроваво-красная окраска.
Стрихнин дает реакцию Витали — Морена. При этой реакции стрихнин дает красно-фиолетовую окраску.
Аминазин. При взаимодействии аминазина с концентрированной азотной кислотой возникает пурпурно-фиолетовая окраска.
7.Проведите описание химико-токсикологического анализа внутренних органов трупа на присутствие тропановых алкалоидов (атропин, скополамин). Дайте схему анализа с учетом выбора оптимального объекта исследования и метода изолирования. Опишите способы обнаружения и количественного определения (с написанием известных уравнений реакций).
План ХТА
1. Изучение сопроводительной документации.
2. Осмотр объектов исследования.
3. Предварительные испытания – изучение окраски, определение запаха, определение реакции среды объектов исследования.
4. Атропин является алкалоидом, содержащимся в белладонне, скополии и в некоторых других растениях. Атропин представляет собой сложный эфир тропина и троповой кислоты. Стереоизомером атропина является гиосциамин, вращающий плоскость поляризации влево. Под влиянием щелочей и температуры левовращающий гиосциамин превращается в атропин, который оптически неактивен. Он состоит из активного левовращающего и малоактивного правовращающего изомеров. В растениях в основном содержится гиосциамин, а при выделении его из растительного материала он превращается в рацемическую форму — атропин. Основание атропина растворяется в хлороформе (1:1), диэтиловом эфире (1 : 60), этиловом спирте (1 : 3), хуже растворяется в воде (1 : 400). Сульфат атропина растворяется в воде (1 : 1), этиловом спирте (1:4), практически не растворяется в диэтиловом эфире и хлороформе. Атропин является алкалоидом, содержащимся в белладонне, скополии и в некоторых других растениях. Атропин представляет собой сложный эфир тропина и троповой кислоты. Стереоизомером атропина является гиосциамин, вращающий плоскость поляризации влево. Под влиянием щелочей и температуры левовращающий гиосциамин превращается в атропин, который оптически неактивен. Он состоит из активного левовращающего и малоактивного правовращающего изомеров. В растениях в основном содержится гиосциамин, а при выделении его из растительного материала он превращается в рацемическую форму — атропин. Основание атропина растворяется в хлороформе (1:1), диэтиловом эфире (1 : 60), этиловом спирте (1 : 3), хуже растворяется в воде (1 : 400). Сульфат атропина растворяется в воде (1 : 1), этиловом спирте (1:4), практически не растворяется в диэтиловом эфире и хлороформе.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 |
