ФГОУ СПО «НИЖЕГОРОДСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ» Министерства здравоохранения и социального развития
Российской федерации
(ФГОУ СПО «НМК» Минздравсоцразвития России)
отделение ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА
ЗНАЧЕНИЕ ПРОВЕДЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКОГО СКРИНИНГА
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПАТОЛОГИИ ПЛОДА
выполнила: студентка группы 6Л
руководитель: преподаватель НМК
1.Введение
В соответствии с данными Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) 2,5-3% всех новорожденных уже при появлении на свет обнаруживают различные врождённые пороки развития (ВПР), обусловленные действием неблагоприятных экзогенных и эндогенных факторов. Согласно официальной статистике в Российской Федерации частота врождённых и наследственных заболеваний (ВНЗ) среди всех новорожденных детей составляет 4-5%, а их доля в структуре младенческой смертности достигает 35-40%. Ежегодно в России на каждую тысячу новорожденных рождается от 40 до 50 детей с врожденными и наследственными заболеваниями. На их лечение государство вынужденно расходовать огромные средства. В этой связи становится совершенно очевидным, что профилактика наследственной и врожденной патологии в России имеет важное социальное значение.
Решающая роль в комплексе мероприятий по профилактике и предупреждению ВПЗ принадлежит пренатальной медико-генетической диагностике, позволяющей предотвратить рождение детей с тяжелыми некорригируемыми пороками развития, генными и хромосомными болезнями и, тем самым, уменьшить генетический груз популяции.
Одним из методов пренатальной диагностики является биохимический скрининг, позволяющий на ранних стадиях беременности выявить пороки генетически обусловленных нарушений развития плода: трисомию 21-ой и 18-ой хромосом и дефект невральной трубки. Маркёрами этих нарушений являются альфа-фетопротеин и бета-субъединица ХГЧ, определяемые в сыворотке крови беременных женщин во втором триместре беременности. Данный комплекс тестов проводится в Нижегородском областном клиническом диагностическом центре (НОКДЦ) и доступен для каждой женщины в первом и во втором триместре её беременности.
Целью настоящей работы явилась оценка концентрации маркерных белков (альфа-фетопротеина и бета-субъединицы ХГЧ) в сыворотке крови беременных женщин в популяции Нижегородской области.
В ходе работы ставились следующие задачи:
· Отработать метод твердофазного двусайтового флуоресцентного иммунометрического анализа для оценки содержания маркерных белков в сыворотке крови беременных женщин второго триместра.
· Исследовать уровень альфа-фетопротеина и бета-субъединицы ХГЧ в сыворотке крови женщин с возможной патологией плода и женщин с нормальным течением беременности в популяции Нижегородской области.
· Оценить эффективность данного теста для выявления возможных патологий плода в Нижегородской области.
2.Материалы исследования
В данной работе мной были использованы образцы сыворотки крови беременных женщин (во втором триместре беременности), поступившие в лабораторию медицинской генетики НОКДЦ из женских консультаций Нижнего Новгорода и Нижегородской области. Целью исследований образцов сывороток крови являлось выявление врождённых пороков развития плода с помощью специальной программы Life Cycle, введённой в память ИФА анализатора Wallac Victor2 D фирмы «Perkin Elmer».
Для проведения исследования в лаборатории использовались:
1)специальные наборы реагентов, имеющие в своём составе моноклональные антитела: DELFIA AFP kit, DELFIA Free hCGb kit, DELFIA PAPP-A kit.
2)оборудование:
- флюориметр - DЕЛЬФИА, оснащенный компьютером;
- автоматический вошер – ДЕЛЬФИЯ (плейвошер);
- автоматический шейкер – ДЕЛЬФИЯ (плейшер).
Исследования проводились методом иммунофлуоресценции. Метод основан на твердофазном двусайтовом флуоресцентном иммунометрическом анализе, при котором один из компонентов системы «антиген – антитело» сорбируется на твердую фазу–лунку планшета. В каждой лунке планшета проводится отдельная реакция, которая затем анализируется. При анализе антигенов на стенке лунок планшета сорбируются антитела против данного антигена, затем добавляется раствор тестируемого антигена (то есть сыворотка с маркерными сывороточными белками) и меченные антитела против того же антигена. Проводится инкубация, в ходе которой происходит взаимодействие «антиген – антитело», в результате чего образуется связанный с твердой фазой комплекс, состоящий из антител, антигена и меченых ионами антител. Реакция «антиген – антитело» проявляется добавлением усиливающего раствора, который диссоциирует ионы из меченного антитела в раствор, где они формируют высокофлуоресцентные хелатные комплексы с компонентами усиливающего раствора. Флуоресцентный сигнал пропорционален количеству антител. Из флюориметра данные поступают в компьютер, где с помощью специальной программы строится кривая стандартов. Данные пациентов сравниваются с полученной кривой, определяется концентрация маркеров в сыворотке пациентов (АФП в нг/мл, а бета – ХГЧ в ед/мл).
Тест заканчивается компьютерным расчетом риска рождения ребенка с патологиями. При расчете индивидуального риска учитываются факторы, изменяющие уровни маркерных белков: возраст и вес беременной женщины, количество плодов, курение, раса и наличие сахарного инсулинозависимого диабета, хромосомная патология ребенка или плода в предыдущей беременности и семейном анамнезе.
3.Результаты и их обсуждение
При внедрении в Нижегородской области пренатального биохимического скрининга с марта 2008 по декабрь 2010 года было обследовано 76658 женщин с 16 по 20 неделю беременности.
На диаграмме приведены данные по группе риска, выявленной при проведении пренатального скрининга беременных женщин; исследования выполнены мной в период 2008-2010г.
Из диаграммы видно, что из общего количества обследованных - 76658 женщин в группу риска «ВСЕГО» вошли 4968 женщин, что составило 6,5%.
Из этого числа выделены подгруппы:
-по болезни Дауна составила 4128 пациенток или 83%;
-по синдрому Эдварса составила 242 пациенток или 5%,
-по дефекту невральной трубки составила 568 пациенток или 11%.
В плане раннего выявления болезни Дауна наиболее эффективным был признан комбинированный ультразвуковой и биохимический скрининг, включающий измерение толщины воротникового пространства, а также определение уровня РАРР-А и свободной бета-субъединицы ХГ в крови беременной. На основании этих комплексных показателей и возраста женщины с помощью автоматизированной программы рассчитывали комплексный риск рождения ребенка с болезнью Дауна. Ожидаемая эффективность выявления риска генетических нарушений развития плода достигла 85-90% при 3-5% ложноположительных результатах, что совпало с данными других авторов, известных в этой области. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости более широкого использования биохимического скрининга в пренатальной медико-генетической диагностике для снижения таких показателей генетического груза популяции, как величина перинатальной смертности, частота хромосомных и генных болезней, а также для профилактики этих тяжелых заболеваний.
4.Выводы:
В ходе исследований, проведённых мной в период 2008г-2010гг, был освоен метод твердофазного двусайтового флуоресцентного иммунометрического анализа для оценки количественного содержания маркерных сывороточных белков в сыворотке крови беременных женщин второго триместра, а также:
1.Установлена динамика изменений концентрации маркерных сывороточных белков при патологии плода.
2.Подтверждена эффективность скрининговых тестов для профилактики рождения детей с врожденными патологиями.
