ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН
Колориметрический метод
___________________________________________________________
Кат № :
BR 2362 | 2 х 250 мл | 1.Сульфонильная к-та 2. Нитрит Натрия | 2 х 250 мл 1 х 30 мл |
ПРИНЦИП МЕТОДА
Содержание билирубина определяют реакцией с диазотированной сульфанильной кислотой в отсутствии ускорителя реакции (диметилсульфоксида - DMSO).
ТЕСТИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Свежая негемолизированная сыворотка, гепаринизированная (или с ЭДТА) плазма. Перед использованием пробы хранят в темноте.
РЕАГЕНТЫ
Состав | Концентрация р-ров |
1. Сульфонильная кислота Соляная кислота 2. Нитрит натрия | 29 ммоль/л 0.17 моль/л 38,5 ммоль/л |
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ
Все реагенты готовы для использования и стабильны в течение срока, указанного на этикетке при +15 - +25оС.
ПРОЦЕДУРА
Длина волны Температура реакции Кювета Измерение | 546 нм 20 - 25оС световой путь 1см Против Бланк-Реагента |
Внести в пробирку:
Бланк- Реагент (мл) | Проба/ Стандарт (мл) | Проба/ Бланк (мл) | |
Реагент 1 Реагент 2 Проба/ Стандарт | 2,5 1 капля - | 2,5 1 капля 0,1 | 2,5 - 0,1 |
Смешать, дать постоять точно 5 мин при 20 - 25оС, затем немедленно измерить абсорбцию Пробы/Стандарта относительно Бланка-Реагента (А).
ВЫЧИСЛЕНИЯ
Концентрация Прямого Билирубина в Пробе =
А пробы
= -------------- х Концентрация Стандарта
А стандарта
НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ В СЫВОРОТКЕ
Прямой билирубин: до 0.25 мг/дл (4.3 мкмоль/л)
ЛИНЕЙНОСТЬ
Линейность измерения сохраняется вплоть до 256 мкмоль/л (15 мг/дл). При концентрациях, превышающих эти значения развести пробу 1 + 5 0.9%-ным NaCL и повторить измерение. Умножить полученный результат на 6.
ПРИМЕЧАНИЯ
1. Реагенты 1 и 2 перед добавлением в пробы тщательно смешивают.
2. Диазо-реагент может быть приготовлен смешиванием 50 объемов Реагента 1 и одной части Реагента 2. Эта смесь стабильна при хранении в темноте в течение 5 ч при +15 - 25оС и 24 ч при +2 - +8оС. В этом случае тест выполняют используя 2.5 мл диазо-реагента и 0.1 мл пробы или стандарта.
ПОМЕХИ
В холостой пробе не должно быть липидов. Реагент 1 используют как Бланк-Реагент. Перед расчетом концентрации, абсорбцию холостой пробы необходимо вычесть из абсорбции образцов.
КАЛИБРОВКА
Рекомендуют применятть Randox калибровочные сыворотки: I - Кат.№ CAL 2350, или II - Кат.№ CAL 2351, или билирубиновый контроль - Кат.№ BE 454.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для контроля качества и воспроизводимости рекомендуют использовать предлагаемые фирмой RANDOX сыворотки с нормальным, пониженным и повышенным содержанием билирубина, а также с высоким содержанием билирубина контроль Кат.№ BE 454.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Предназначен только для диагностических целей. Не пипетировать ртом. Придерживаться обычных мер предосторожности принятых в лабораторной практике.
