По материалам диссертации опубликовано 15 научных работ, из них 6 – в зарубежной печати, 4 – в рекомендуемых ВАК РФ изданиях, издано 1 методическое пособие.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста, иллюстрирована 5 таблицами, 55 рисунками. Работа состоит из введения, 3 глав, включающих обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографического указателя. Список литературы включает 299 источник, из них 47 –русскоязычных и 203 – иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Материалы и методы экспериментальных исследований

В качестве материала экспериментальных исследований были использованы глаза 25 кроликов породы шиншилла, средней массой от 2.5 до 3.5 кг, серо-черной масти. Глаза были разделены на группы: интактная группа - левые глаза (25 глаз) экспериментальных животных, контрольная группа - 12 правых глаз, на которых была проведена процедура кросслинкинга коллагена роговицы по стандартному протоколу, опытная группа – 13 глаз были подвергнуты процедуре кросслинкинга коллагена роговицы с интрастромальным введением раствора фотосенсибилизатора. Экспериментальное исследование проведено с соблюдением международных рекомендаций по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (, 2003). Хирургическое вмешательство осуществлялось стерильным инструментарием в условиях стерильного операционного поля под общей анестезией, которую осуществляли путем внутримышечного введения смеси из диазепама и атропина (из расчета по 15мг/кг).

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

Особенности проведения процедуры фотомодификации
кросслинкинга коллагена роговицы по стандартному протоколу

Кросслинкинг роговичного коллагена проводился под местной инстилляционной анестезией с раствором оксибупрокаина гидрохлорида 0.4%. В оптической зоне производили деэпителизацию заданного диаметра (8-9 мм). Затем настраивалась фокусировка излучения (расстояние между лампой и роговицей - 5 см). Выполнялось воздействие ультрафиолетом с длиной волны 365 нм, мощностью излучения - 3,0 мВт/см2 (5,4 Дж/см2) с использование лампы собственной конструкции. Мощность воздействия определялась с помощью ультрафиолетметра (Waldmann) для достижения желаемой дозы в 5,4 Дж/см Одновременно продолжались инстилляции раствора рибофлавина 0,1% (1-2 капли каждые 2 минуты). Воздействие ультрафиолетом осуществлялось в течение 30 минут, после чего закапывался антибактериальный препарат левофлоксацин 0.5% .

Особенности проведения кросслинкинга коллагена роговицы

с интрастромальным введением раствора фотосенсибилизатора

Без предварительной деэпителизации роговицы на фоне терминальной анестезии с оксибупрокаина гидрохлоридом 0,4 % через интактный эпителий при помощи инсулинового шприца с запрессованной иглой интрастромально (внутрироговично) вводили 0,1 % водный раствор фотосенсибилизатора рибофлавин на глубину 0,1–0,15 мм из 3–4 вколов, проводили полное насыщение роговицы раствором фотосенсибилизатора (Патент КР 1376 от 01.01.2001). Контроль полноты и интенсивности насыщения фотосенсибилизатором осуществляли при увеличении микроскопа ?8–10 с дополнительной подсветкой. После достижения адекватного прокрашивания роговицы проводили кросслинкинг с применением фокусированного луча ультрафиолетового света: 3 мВт/см? (в дозе 5.4 Дж/см2 ) в 5 см от поверхности роговицы с использованием излучающего диода с длиной волны 365–370 нм. В послеоперационном периоде конъюктивальную полость закладывали тетрациклиновую мазь 1% 2 раза в день на протяжении трех дней после вмешательства.

Методы исследования роговиц экспериментальных животных (кроликов) после процедуры кросслинкинга коллагена роговицы

Осмотр и биомикроскопия на щелевой лампе SL-120 Carl Zeiss (Германия, 2001 г. выпуска). Проводилась оценка состояния конъюнктивы, роговицы и глубжележащих отделов глаза.

Исследование биомеханических свойств роговиц проводили при помощи способа прижизненного определения упругих свойств роговицы, предложенный с соавт. в 2008 г. При  значении эластоподъема более 11 мм рт. ст. определяли упругие свойства роговицы как сниженные, при значении от 9 до 11 мм рт. ст. – как нормальные, при значении менее 9 мм рт. ст. – как повышенные.

Морфологического исследования роговиц экспериментальных
животных (кроликов) после процедуры кросслинкинга коллагена роговицы. Морфологические исследования проводились в лаборатории Республиканского патологического бюро г. Бишкек, Кыргызской Республики. Изготавливали препараты общепринятым методом. Исследования проводились с применением световой микроскопии полутонких (4–5 мкм) срезов, которые окрашивались полихромным красителем гематоксилином и эозином. Изучение окрашенных срезов роговицы проводили в сроки: 1 сутки, 1, 3, 6 и 12 месяцев. Исследовали все 5 слоев роговиц. Для контроля исследован топографически аналогично расположенный участок неповрежденного (интактного) левого глаза.

Материалы и методы клинических исследований

Исследование проведено на базе отделения микрохирургии глаза № 2 Национального Госпиталя при Министерстве здравоохранения КР (зав. отд. – д-р мед. наук ) c 2010 по 2013гг.

Общая характеристика групп пациентов с начальным кератоконусом

Исследование основано на клиническом анализе результатов обследования и лечения 36 пациентов (50 глаз) с установленным диагнозом начального кератоконуса (стадии I–II по Амслер). У пациентов было подтверждено увеличение данных кератометрии на 1,0 D в течение последнего года, а также необходимость изменений очковой или контактной коррекции в течении предшествовавших двух лет. От всех пациентов было получено информированное согласие на проведение процедуры после подробного объяснения сути предстоящего лечения. Пациентов с операциями на роговице, интрастромальными кольцами или длительно незаживающими воспалительными процессами на роговице в анамнезе из исследования исключали. Пациенты были рандомизированы в группы:

1 группа (контрольная) – 17 пациентов (23 глаза) были подвергнуты лечению методом кросслинкинга по стандартной методике (Wollensak G. С соавт., 2003).

2 группа (основная) – 19 пациентов (27 глаз), которым была проведена процедура фотомодификации роговицы по модифицированной методике с интрастромальным введением 0,1 % раствора рибофлавина.

Методы исследования, использованные для оценки

состояния роговиц пациентов с начальным кератоконусом

Биомикроскопия проводилась на щелевой лампе SL-200 Carl Zeiss (Германия). Фотосъемка на фотощелевой лампе Topcon SL 7 (Япония) и на операционном микроскопе Opcon OPMi 6 CFR (Германия) при помощи фотокамеры, входящей в комплект.

Визометрия проводилась при помощи проектора оптотипов комбайна OAP 211 и набора стекол, входящего в комплект (Carl Zeiss, Германия) для определения остроты зрения.

Офтальмометрия (кератометрия) на офтальмометре OAP 211 офтальмологического комбайна (Carl Zeiss, Германия) для измерения оптической силы роговицы.

Авторефрактометрия на приборах ARK-530A, RKT-7700 (Nidek, Япония) применялась для объективной оценки клинической рефракции глаза.

Тонометрия – измерение внутриглазного давления при помощи тонометра Маклакова весом 10 г.

Оптическая когерентная томография роговицы на когерентном томографе Cirrus HD 300 (Carl Zeiss, Германия). C помощью томографа измеряли кератопахиметрию.

Компьютерная топография роговицы (Humphrey Atlas Corneal Topography System) модель-990 (США) применялась для исследования топографии роговичной поверхности.

Исследование биомеханических свойств роговицы проводили методом дифференцированной тонометрии на приборе Glau Test-60 (Россия) для оценки коэффициента ригидности роговицы (CRF).

С помощью Specular Microscope Topcon SP-2000P (Япония) проводился анализ клеток эндотелия роговицы до и после процедуры кросслинкинга в динамике

Статистическая обработка результатов исследования. Проводилась с использованием профессионального пакета SPSS 16. Нормальность распределения исследуемых параметров  проверялась с помощью теста Колмогорова-Смирнова. Проводился расчет статистических показателей (средние значения, ошибки средних, среднеквадратические отклонения). Для сравнения средних применяли t-тест. Оценку линейных связей между параметрами проводили при помощи корреляционного и регрессионного анализов с расчетом коэффициентов корреляции Пирсона и Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты экспериментальных исследований

Результаты исследования биомеханических свойств
роговиц экспериментальных животных (кроликов) после процедуры кросслинкинга коллагена роговицы. В интактной группе, в которой глаза подопытных животных не подвергались процедуре фотомодификации в сроки наблюдений 3 и 12 месяцев значения эластоподъема оставались неизменными (р > 0,05). В контрольной группе с применением стандартного протокола кросслинкинга к 3 месяцу после процедуры увеличение прочностных свойств роговицы происходило в 2,36 раза, в опытной группе с применением интрастромальных инъекций раствора фотосенсибилизатора в 4,12 раза (р ? 0.001). К 12 месяцу в контрольной и опытной группах прочностные свойства увеличивались в 3,93 раза, и в 6,7 раза соответственно (р ? 0,001). Полученные результаты указывают на зна?чимый укрепляющий эффект проводимой процедуры кросслинкинга при применении модифицированной методики с интрастромальным введением раствора фотосенсибилизатора (р?0,001).

Биомикроскопическое исследование роговиц экспериментальных животных (кроликов) после процедуры кросслинкинга коллагена роговицы Течение раннего послеоперационного периода в контрольной группе с применением стандартного протокола кросслинкинга отличалаось выраженным роговичным синдромом с альтеративно-экссудативными процессами в деэпителизированной роговице. В те же сроки в опытных глазах с интрастромальным введением раствора фотосенсибилизатора послеоперационный период характеризовался ареактивным течением, отек роговицы в раннем послеоперационном периоде был незначительным, умеренная сосудистая реакция (перикорнеальная инъекция бульбарной конъюнктивы) носила быстро проходящий характер.

Морфологические исследования роговиц экспериментальных животных (кроликов) после процедуры кросслинкинга коллагена роговицы. Данные, полученные при морфологическом исследовании срезов глаз экспериментальных животных (кроликов) контрольной группы с использованием стандартного протокола кросслинкинга, показали, что процесс заживления роговичного эпителия после проведенной деэпителизации проходил через 3 фазы (рис. 1). Первая фаза (латентная или альтеративная) заключалась в миграции клеток базального эпителия с краев раны (деэпителизированной зоны). За латентной фазой следовала вторая фаза клеточной миграции, во время которой эпителиальные клетки уплощались, делились, увеличивались в объеме и мигрировали к раневой поверхности, чтобы закрыть ее. Скрепление эпителиальных клеток с базальной мембраной происходило за счет десмосом, содержащих коллаген VII типа. Укрепление связей между эпителием и стромой заканчивалось к 1 месяцу после проведения процедуры. Процесс полного восстановления клеточной архитектоники поврежденного эпителия заканчивался к 3 месяцу пролиферативной фазой. В отличии от контрольной группы в опытной группе с интрастромальным введением раствора фотосенсибилизатора в раннем послеоперационном периоде на фоне сохранного эпителия наблюдался активный апоптоз кератоцитов (рис. 2).

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4