Межгосударственный стандарт Продукты пищевые (стр. 5 )

суспендированного в 30 см  хлороформа. Не позволяя просохнуть  верхней кромке слоя силикагеля, на него насыпают слой  сернокислого  натрия толщиной  20  мм.  Растворителю  дают  стечь,  после  чего  в  колонку  вносят

экстракт. Хлороформу дают стечь до поверхности слоя сернокислого натрия,

после чего через колонку последовательно пропускают 150 см гексана и 150

см этилового эфира. Элюат отбрасывают. В колонку вносят 150 см  смеси хлороформ-метанол (97:3) и с этого момента начинают собирать элюат. После

прекращения выхода элюата из колонки его по частям упаривают в остродонной  колбе  на  ротационном  испарителе  при  температуре  35-40  °С

досуха.  Остаток  в  отгонной  колбе  растворяют  в  0,4  см  смеси бензол - ацетонитрил (97:3) и используют для хроматографического анализа.

Очистка экстракта из кофе и чая

Очистку экстракта проводят с помощью колоночной хроматографии. Для этого на дно стеклянной колонки помещают ватный тампон, на который насыпают  слой  сернокислого  натрия  толщиной  5  мм  и  5  г  флоризила,

суспендированного в 20 см  хлороформа. Не позволяя просохнуть  верхней кромке слоя флоризила, на него насыпают слой  сернокислого  натрия толщиной  20  мм.  Растворителю  дают  стечь,  после  чего  в  колонку  вносят

экстракт. Хлороформу дают стечь до поверхности слоя сернокислого натрия,

после чего через колонку пропускают 150 см диоксана. Элюат отбрасывают.

В  колонку  вносят  100  см  смеси ацетон-метанол (9:1). С этого момента начинают собирать элюат. После прекращения выхода элюата из колонки его по частям упаривают в остродонной колбе на ротационном испарителе при

температуре 35-40 °С досуха. Остаток в отгонной колбе растворяют в 0,4 см смеси  бензол-ацетонитрил  (97:3)  и  используют  для  хроматографического анализа.

Очистка экстракта из растительных масел

Ацетонитрильный        экстракт        обезжиривают        гексаном,        предварительно

насыщенным  ацетонитрилом.  Для  этого  160  см  гексана  встряхивают  в

делительной воронке с 10 см  ацетонитрила. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отбрасывают.

Ацетонитрильный  экстракт  из  пробы  масла  переносят  в  делительную

воронку,  куда  добавляют  50  см  гексана, насыщенного ацетонитрилом. Содержимое воронки встряхивают в течение 1 мин. После разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Обезжиривание экстракта повторяют

еще два раза в аналогичных условиях, каждый раз используя свежую порцию гексана, насыщенного ацетонитрилом. Обезжиренный ацетонитрильный экстракт обезвоживают добавлением 10 г сернокислого натрия и выдерживанием в темноте в течение 30 мин.

Экстракт        фильтруют        через        ватный        тампон        в        грушевидную        колбу        и упаривают  досуха  на  ротационном  испарителе  при  температуре  40-45  °С.

Остаток в отгонной колбе растворяют в 2 см  хлороформа и проводят его очистку с помощью колоночной хроматографии. Для этого на дно стеклянной колонки помещают ватный тампон, на который насыпают слой сернокислого

натрия толщиной 5 мм и суспензию 4 г силикагеля в  20 см  бензола. Не позволяя просохнуть верхней кромке слоя силикагеля, на него насыпают слой сернокислого натрия толщиной 20 мм. Растворителю дают стечь, после чего в

колонку  вносят  экстракт.  Экстракту  дают  полностью  впитаться  в

фильтрующий  слой,  после  чего  в  колонку  вносят  100  см  смеси бензол - гексан-этиловый эфир (1:1:2).  Растворителю  дают  полностью  пройти через

колонку, элюат отбрасывают. В колонку вносят 100 см  смеси хлороформ - ацетон (9:1), с этого момента начинают собирать элюат. После прекращения выхода элюата из колонки его по частям упаривают в остродонной колбе на

ротационном  испарителе  при  температуре  35-40  °С  досуха.  Остаток  в

отгонной  колбе  растворяют  в  0,4  см  смеси бензол-ацетонитрил (97:3) и используют для хроматографического анализ

а.

Очистка экстракта из молочных продуктов (включая животное масло)

Очистку экстракта проводят с помощью колоночной хроматографии. Для этого готовят колонку по 3.5.2.4, используя при этом 2 г силикагеля. В колонку вносят экстракт и дают ему полностью впитаться в фильтрующий слой. После этого  проводят  последовательное  элюирование  следующими  смесями

растворителей порциями по 25 см:

толуол-уксусная кислота (9,5:0,5); гексан; этиловый эфир-гексан-ацетонитрил (5:3:0,5).

Элюаты отбрасывают. В колонку вносят 60 см смеси хлороформ-ацетон (4:1), с этого момента начинают отбирать выходящий элюат. После прекращения  выхода  элюата  из  колонки  его  по  частям  упаривают  в

остродонной  колбе  на  ротационном  испарителе  при  температуре  35-40  °С

досуха.  Остаток  в  отгонной  колбе  растворяют  в  0,2  см  смеси  бензол - ацетонитрил (97:3) и используют для хроматографического анализа.

Качественное определение афлатоксинов В и M

На пластинку "Силуфол" сверху и снизу наносят две тонкие карандашные

линии на расстоянии 1,5 см от краев. На нижней (стартовой) линии отмечают 3 точки  на  расстоянии  2  см  друг  от  друга,  в  которые  наносят  с  помощью

микрошприца  по  0,002,  0,005  и  0,01  см  рабочего раствора смеси афлатоксинов B  и В. При испытании молочных продуктов в эти же точки наносят  дополнительно  по  0,002,  0,005  и  0,01  см  рабочего раствора афлатоксина  M.  На  расстоянии  1  см  между  пятнами  рабочих  растворов

наносят 0,01 и 0,02 см исследуемого раствора. Пластинку стартовой линией вниз помещают в хроматографическую камеру, предварительно заполненную

смесью этиловый эфир-метанол-вода (94:4,5:1,5) (при испытании молочных продуктов - этиловый эфир-метанол-вода (90:8:2)). Развитие хроматограммы проводят до достижения фронтом растворителя верхней карандашной линии.

Пластинку извлекают из камеры, сушат на воздухе 5 мин и рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете. На хроматограмме рабочего раствора  смеси  афлатоксинов  последние  располагаются  по  направлению

движения  фронта  растворителя  в  следующем  порядке:  М,  В,  B. Обнаружение на хроматограммах экстракта пятен, соответствующих по хроматографической  подвижности  и  цвету  флюоресценции  пятнам