Аллерген туляремийный жидкий (Тулярин)

Аллерген туляремийный        ФС

жидкий (Тулярин)        Взамен  ГФ Х, ст. 708,

  ФС 42-3928-00

______________________________________________________________

Настоящая фармакопейная статья распространяется на аллерген туляремийный жидкий (Тулярин), суспензию для накожного скарификационного нанесения, представляющий собой убитую нагреванием взвесь культуры вакцинного штамма Francisella tularensis 15 НИИЭГ в 0,9 % растворе натрия хлорида.

Препарат содержит консервант - глицерин.

В  ампуле  содержится  20 накожных доз, одна доза (0,05 мл) содержит 5∙108 микробных клеток (м. к.).

Препарат предназначен для определения специфического иммунитета и диагностики туляремии.

ПРОИЗВОДСТВО

Технология производства аллергена туляремийного жидкого (Тулярина) предусматривает получение производственных посевных культур F. tularensis 15 НИИЭГ I, II, III, IV и V генераций; накопление и разведение бактериальной массы V генерации 0,9 % раствором натрия хлорида с 3 % глицерином до необходимой концентрации; первая и вторая инактивация микробной массы V генерации при температуре (75±5) оС; разведение микробной массы 0,9 % раствором натрия хлорида до рабочей концентрации; розлив, герметизацию; инактивацию при температуре (75±5) оС и маркировку ампул с препаратом.

На стадиях приготовления производственных посевных культур проводят испытания на отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов, определяют концентрацию микробных клеток. На стадии приготовления аллергена проводят анализ специфической стерильности инактивированной микробной массы и определяют концентрацию микробных клеток.

Вакцинный штамм F. tularensis 15 НИИЭГ должен иметь типичные культуральные, морфологические, биохимические и серологические свойства; остаточная вирулентность (LD50) вакцинного штамма для белых мышей массой 18-20 г должна находиться в пределах от 102 до 2106 живых микробных клеток (м. к.); штамм не должен вызывать гибель морской свинки при введении дозы, равной 5109 м. к; при накожной иммунизации морских свинок дозами 5106 и 5107 м. к. должен вызывать появление инфильтрата и гиперемии диаметром от 5 до 15 мм; показатель иммуногенности (ЕD50) для морских свинок должен быть не более 1∙ 103  живых микробных клеток при инфицировании вирулентным штаммом F. tularensis 503/840.

Перед приготовлением производственной культуры вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных иммуногенных (белых) колоний, образующихся на плотной питательной среде при посеве селезенки и регионарных лимфатических узлов.

Работу с культурой штамма F. tularensis 15 НИИЭГ проводят с соблюдением СП «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», с культурой вирулентного штамма F. tularensis 503/840 – СП «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», действующих в РФ.

ИСПЫТАНИЯ

Описание. Гомогенная суспензия белого цвета с сероватым или желтоватым оттенком, без посторонних включений, при отстаивании разделяющаяся на 2 слоя: верхний - бесцветная прозрачная жидкость, нижний - осадок белого цвета с сероватым или желтоватым оттенком, легко разбивающийся при встряхивании. Определение проводят визуально.

Подлинность. Должна быть чистая культура туляремийного микроба. Определение проводят прямым иммунофлуоресцентным методом с помощью иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих туляремийных сухих соответствующего года выпуска.

В мазках из препарата, окрашенных в соответствии с инструкцией по применению иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих туляремийных сухих, при просмотре не менее 30 полей зрения микробные клетки должны иметь яркое зеленовато-желтое свечение по периферии.

pH. От 6,8 до 7,2. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Извлекаемый объем. Должен быть не менее номинального (не менее 1,0 мл). Испытание проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность» методом, указанным в нормативной документации.

Специфическая стерильность. Аллерген не должен содержать живых клеток туляремийного микроба.  Испытание проводят путем высева по 0,1 мл аллергена на одну пробирку с рыбно-дрожжевой цистеиновой питательной средой или с питательной средой для культивирования и выделения туляремийного микроба (FT-агар) и на одну пробирку с питательной средой Мак-Коя. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 7 сут. Посевы должны быть стерильными. 

Приготовление питательных сред (рыбно-дрожжевая цистеиновая и Мак-Коя) должно быть указаны в нормативной документации.

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность».

Испытания проводят путем внутрибрюшинного введения по 0,5 мл 5 белым мышам массой 18-20 г и подкожного введения по 0,5 мл одной морской свинке массой 250-300 г., если нет других указаний в нормативной документации. Период наблюдения за животными составляет 7 сут.

Специфическая активность. Концентрация микробных клеток должна составлять 9,0 ∙10 9 - 10,0 ∙10 9  0,5 мл  м. к./мл. Определение проводят визуально путем сравнения со стандартом мутности бактериальных взвесей 10 МЕ, эквивалентного 5∙109 м. к. туляремийного микроба.

При накожном скарификационном нанесении 0,1 мл аллергена, иммунизированным морским свинкам на месте введения должна быть реакция в виде инфильтрата и гиперемии не менее 10 мм поперек сделанных насечек.

Двух морских свинок массой 375 – 425 г предварительно иммунизируют накожно вакциной туляремийной живой в дозе 2∙10 8 живых м. к./мл. Для этого содержимое ампулы с вакциной разводят водой для инъекций в объеме, который рассчитан для накожного применения для данной серии аллергена туляремийного. Затем микробную взвесь разводят 0,9 % раствором натрия хлорида в 10 раз до концентрации 2∙10 8 м. к./мл. На участок депилированной кожи размером 4x4 см боковой поверхности туловища, предварительно обработанной спиртом, затем эфиром, после испарения эфира наносят одноразовым шприцем 2 капли (0,1 мл) микробной взвеси, концентрацией 2∙10 8 м. к./мл на расстоянии 23-27 мм одну от другой. Через каждую каплю оспопрививательным пером делают по 2 параллельные насечки длиной от 8 до 12 мм, которые не должны кровоточить. Нанесенную на кожу взвесь тщательно втирают в течение 1 мин плоской стороной оспопрививательного пера. Через 25-30 сут иммунизированным и одной контрольной (неиммунизированной) морской свинке ставят скарификационную кожную пробу с аллергеном. Для этого на  участке депилированной кожи противоположной боковой поверхности животного, предварительно обработанной спиртом, затем эфиром, одноразовым шприцем наносят две  капли аллергена (0,1 мл) на расстоянии 23-27 мм одной от другой. Через каждую каплю оспопрививательным пером делают по 2 параллельные насечки длиной 8-12 мм, которые не должны кровоточить.

Учет проводят через 48 ч по кожной реакции в виде гиперемии и инфильтрата на месте нанесения препарата. Положительной считают реакцию в виде гиперемии и инфильтрата не менее 10 мм поперек сделанных насечек. Отрицательной реакцией считают отсутствие кожных проявлений или наличие гиперемии и инфильтрата менее 10 мм поперек сделанных насечек. У контрольной морской  свинки кожная реакция на месте нанесения препарата должна отсутствовать.

Вещества, входящие в состав препарата. Консервант – 3 % глицерин (расчетная величина).

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8 °С в условиях, исключающих замораживание препарата, в соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты», если нет других указаний в нормативной документации.