На правах рукописи
МИРОШНИЧЕНКО
Ирина Юрьевна
ВЛИЯНИЕ РЕАМБЕРИНА И α-ЛИПОЕВОЙ КИСЛОТЫ НА РАССТРОЙСТВА ПОВЕДЕНИЯ И МЕТАБОЛИЗМА
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ
14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Челябинск – 2010
Работа выполнена на кафедре фармакологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
Научный руководитель:
заслуженный деятель науки РФ,
доктор медицинских наук,
профессор
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук,
профессор
заслуженный работник высшей школы РФ,
доктор медицинских наук,
профессор
Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Защита диссертации состоится «____» _____________ 2010 года в ________ часов на заседании диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», 4.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
Автореферат разослан «____» ________________________ 2010 года.
Ученый секретарь
диссертационного Совета,
доктор медицинских наук,
профессор
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы
Проблема нейропатических осложнений сахарного диабета (СД) относится к числу важнейших медико-социальных проблем современности и носит глобальный характер. Диабетические нейропатии (ДН), наряду с диабетическими ангиопатиями, относят к числу наиболее часто встречающихся осложнений СД, которые отягощают его протекание, ухудшают прогноз и существенно снижают качество жизни (КЖ) больных (, 2003; и др., 2005; и др., 2006; Amos A. F. et al., 1997; Jakus V., Reitbrock N., 2004).
На сегодняшний день недостаточно изучена проблема центральных диабетических нейропатий, которые считаются клинически менее значимые в сравнении с периферическими нейропатиями. В первую очередь, это относится к диабетической энцефалопатии (ДЭ), ранние этапы развития которой проявляются неспецифическими, слабовыраженными когнитивными и аффективными расстройствами (, 2004; , , 2004; , , 2007; , 2007). Это существенно затрудняет раннюю диагностику и своевременное начало лечения данного синдрома ( и др., 2006). Важно подчеркнуть, что медленное прогрессирование ДЭ резко увеличивает риск развития деменции у больных СД (, , 2004; Allen K. V. et al., 2004).
Изложенные обстоятельства иллюстрируют необходимость целенаправленной разработки подходов к патогенетически обоснованной коррекции нарушений аффективного статуса и когнитивной сферы при СД. Наиболее очевидным путем решения этой задачи является адекватная терапия основного заболевания, направленная на достижение устойчивой компенсации СД ( и др., 2005; и др., 2006). При всей очевидности данного подхода необходимо помнить, что использование препаратов инсулина может привести к неоднозначным последствиям в отношении эмоциональной сферы и интеллектуальных возможностей больных. Весьма проблемным моментом, касающимся влияния препаратов инсулина на функциональное состояние головного мозга у больных СД, является изменение обмена β-амилоидного пептида под влиянием инсулина. Gasparini L. et al. (2001) убедительно продемонстрировали, что инсулин ограничивает протеолитическую деструкцию β-амилоидного пептида, накопление которого в головном мозге играет общеизвестную роль в развитии болезни Альцгеймера. Это хорошо согласуется с данными Noh J. H. et al. (2005) о негативном влиянии инсулинотерапии на эмоциональную сферу и когнитивные функции у больных СД 2 типа (СД 2). Более того, известно, что пациенты, страдающие СД 2, являются группой риска по развитию болезни Альцгеймера (Biessels G. J. et al., 2006; Araki A., 2010; Carlsson C. M, 2010; Umegaki H., 2010). Данные факты свидетельствуют о целесообразности применения средств, ограничивающих СД 2 - ассоциированную гиперинсулинемию и увеличивающих чувствительность к этому гормону, для борьбы с церебральной дисфункцией при болезни Альцгеймера и СД.
Пристального внимания заслуживают данные о позитивном влиянии оригинальных российских лекарственных средств (ЛС) – производных янтарной кислоты (реамберина и мексидола) на выраженность клинических проявлений нейропатического процесса при СД. Установлено, что оба этих ЛС эффективно корригируют «позитивные» и «негативные» симптомы дистальной симметричной сенсомоторной полинейропатии (ДССП) и улучшают аффективный статус больных СД ( и др., 2004, 2005; , 2005; , , 2007; , 2007). Следует отметить, что реамберин продемонстрировал существенные преимущества по влиянию на симптоматику ДССП в сравнении с мексидолом ( и др., 2005), а также характеризовался меньшей в сравнении с мексидолом «стоимостью единицы эффекта» (, 2005). Кроме того, реамберин проявил заметное, хотя и статистически незначимое, преимущество по влиянию на выраженность эмоциональных нарушений у больных с синдромом диабетической стопы (СДС) в сравнении с мексидолом. Это свидетельствует о перспективе преимущественного применения реамберина в качестве средства патогенетической коррекции расстройства церебральных функций при СД. Справедливость данной постановки вопроса иллюстрируется не только анксиолитическим и тимоаналептическим действием реамберина, но и его благоприятным влиянием на показатели гликемии у пациентов с СДС ( и др., 2005).
|
Накопленные к настоящему времени данные не позволяют прийти к однозначному выводу об относительном вкладе прооксидантной активности сукцинатсодержащих препаратов (Storozheva et al., 2008) и роли сукцината в качестве ко-антиоксиданта ( и др., 2006) в реализации антинейропатического действия производных янтарной кислоты. Данное положение в полной мере касается другого редокс-активного ЛС (α-липоевой кислоты), традиционно применяемого в лечении ДН. Препараты α-липоевой кислоты (α-ЛК) содержат её окисленную форму, которая непосредственно может оказывать только прооксидантный эффект (, , 2010; Dicter N. et al., 2002). Вместе с тем, восстановленная форма α-ЛК (дигидролипоевая кислота) является не менее важным чем сукцинат компонентом антиоксидантной защиты (АОЗ) ( и др., 2006; Konrad D., 2005). В литературе превалирует мнение об антиоксидантной природе антинейропатического действия α-ЛК (Borcea V. et al., 1999; Vincent A. M. et al., 2004). Эффективность данного ЛС в лечении СД-ассоциированного нейропатического процесса аргументировано доказана лишь в отношении периферических нейропатий (Reljanovic M. et al., 1999; Ametov A. S. et al., 2003; Zeigler D. et al., 2004, 2006). Значительно меньше известно о возможном влиянии α-ЛК на проявления ДЭ (Vincent A. M. et al., 2004).
В целом, имеющиеся на сегодняшний день данные не позволяют сформировать однозначного мнения об эффективности реамберина и α-ЛК в коррекции СД-ассоциированных когнитивных и аффективных расстройств. Это иллюстрирует актуальность экспериментальных исследований, посвященных сравнительному анализу влияния реамберина и α-ЛК на расстройства мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения в сопоставлении с действием этих ЛС на нарушения углеводного и липидного обмена и сопутствующими сдвигами в системе «перекисное окисление липидов – антиоксидантная защита» (ПОЛ-АОЗ) при экспериментальном СД. Важным сегментом актуальности таких исследовании является целенаправленное изучение влияния реамберина и α-ЛК на чувствительность к инсулину в сопоставлении со способностью этих ЛС модулировать проявления оксидативного стресса (ОС) in vitro.
Цель исследования
Провести сравнительное изучение влияния реамберина и α-липоевой кислоты на расстройства мотивированного поведения, условнорефлекторного обучения и метаболизма при экспериментальном сахарном диабете в сопоставлении с влиянием этих лекарственных средств на чувствительность к инсулину, толерантность к нагрузке глюкозой и интенсивность перекисного окисления липидов.
Для достижения поставленной цели было необходимо решить нижеперечисленные задачи.
Задачи работы:
Оценить влияние однократного введения реамберина и α-липоевой кислоты на чувствительность крыс к инсулину и сопоставить полученные данные с ПОЛ-модулирующим эффектом изученных лекарственных средств. Изучить влияние реамберина и α-липоевой кислоты на толерантность крыс к нагрузке глюкозой. Исследовать антигипоксическое и противовоспалительное действие реамберина и α-липоевой кислоты в экспериментах на мышах. Исследовать влияние курсового введения реамберина и α-липоевой кислоты на расстройства углеводного и липидного обмена, мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения при экспериментальном сахарном диабете у крыс и мышей. Изучить зависимость выраженности психотропных и метаболических эффектов реамберина и α-липоевой кислоты от дозировок и кратности введения этих лекарственных средств животным с экспериментальным сахарным диабетом, сопоставить полученные данные с влиянием реамберина и α-липоевой кислоты на чувствительность к инсулину, толерантность к сахарной нагрузке, устойчивость к гипоксии и острому флогогенному воздействию.Научная новизна
Впервые проведено сравнительное экспериментальное исследование влияния реамберина и α-липоевой кислоты на расстройства мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения лабораторных животных с экспериментальным сахарным диабетом. Продемонстрировано, что оба лекарственных средства уменьшают выраженность гипергликемии и нормализуют этологический статус мышей и крыс с аллоксановым диабетом. Установлено, что курсовое введение реамберина и α-липоевой кислоты лабораторным грызунам с аллоксановым диабетом корригируют расстройства углеводного и липидного обмена, мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения в зависимости от влияния изученных лекарственных средств на чувствительность к инсулину и толерантность к нагрузке глюкозой.
Впервые показано, что реамберин снижает выраженность гипергликемии и существенно корригирует нарушения мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения лишь при краткосрочном (1 и 7 дневном) применении относительно низких доз. Более продолжительное (14 дневное) применение реамберина сопровождается развитием толерантности в отношении его сахароснижающего и психотропного эффектов с одновременным усугублением дислипидемических расстройств при аллоксановом диабете.
Впервые показано, что α-липоевая кислота, в отличие от реамберина, обладающая антигипоксическим и противовоспалительным действием, характеризуется кумулятивным развитием сахароснижающего, гиполипидемического, тимоаналептического, анксиолитического и ноотропного эффектов при аллоксановом диабете. Выраженность этих эффектов α-липоевой кислоты достигает максимума при 14 дневном курсовом применении данного лекарственного средства.
Теоретическая и практическая значимость работы
Полученные в диссертационном исследовании результаты существенно расширяют представления о фармакодинамике реамберина и α-липоевой кислоты в условиях экспериментального сахарного диабета. Это позволяет использовать полученные данные в рамках учебного процесса на кафедрах фармакологии и фармацевтической химии медицинских и фармацевтических вузов, а также для обучения врачей, интернов и ординаторов в системе последипломного и дополнительного образования. Высокая эффективность реамберина и α-липоевой кислоты в коррекции нарушений метаболизма, мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения при аллоксановом диабете может служить теоретическим основанием для совершенствования стандартов комплексного лечения больных сахарным диабетом.
Положения, выносимые на защиту:
Однократное введение реамберина и α-липоевой кислоты в дозах, эквивалентных терапевтическому диапазону для человека, увеличивает чувствительность крыс к инсулину в зависимости от выраженности прооксидантного эффекта изученных лекарственных средств. α-липоевая кислота, в отличие от реамберина, обладает антигипоксическим и противовоспалительным действием, а также увеличивает толерантность крыс к сахарной нагрузке. Несмотря на выраженную инсулин-потенциирующую активность реамберина, его однократное введение оказывает гипергликемизирующее действие и снижает толерантность крыс к нагрузке глюкозой. Ежедневное введение реамберина и α-липоевой кислоты лабораторным грызунам с аллоксановым диабетом на протяжении 14 дней корригируют расстройства метаболизма, мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения в зависимости от влияния изученных лекарственных средств на чувствительность к инсулину и толерантность к сахарной нагрузке.Апробация работы
Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы в материалах VI итоговой научно-практической конференции молодых ученых ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Челябинск, 2008), в материалах V Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2008), в материалах VII итоговой научно-практической конференции молодых ученых ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Челябинск, 2009), в материалах Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009), в трудах научной сессии профессорско-преподавательского состава ЧелГМА, посвященной 65-летию медицинской академии «Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения» (Челябинск, 2009).
Апробация работы состоялась на расширенном заседании кафедры фармакологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (протокол , от 25 июня 2010 года).
Внедрение в практику
Результаты диссертационного исследования используются в учебном процессе на кафедре фармакологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по теме «Гормональные препараты» в разделе «Фармакотерапия сахарного диабета» и в элективном курсе «Новые направления в фармакологии», а также на кафедрах фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета при изучении тем «Использование различных вариантов спектрофотометрии в фармацевтическом и биологическом анализе», «Барбитураты в химико-токсикологическом анализе» и «Предельные карбоновые кислоты».
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, из них 5 - по перечню рецензируемых научных журналов, определенных ВАК.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 145 листах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 14 таблицами и 2 рисунками. Список литературы содержит 333 источников, из которых 91 опубликован в отечественной литературе и 242 – в зарубежных изданиях.
Содержание работы
Материалы и методы исследования
Работа выполнена на 515 белых беспородных мышах массой 18-20 г и 483 белых беспородных крысах массой 200-250 г. Организация работы соответствовала международным этическим нормам, регламентирующим эксперименты на животных (, 1998), отражённых в приказе Минздрава СССР № 000 от 01.01.2001 г., в законе о благополучии животных Конвенции Европейского Союза и Европейской Конвенции защиты позвоночных животных для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, 1986), в международных правилах Good Laboratory Practice for Nonclinical Laboratory Studies от 01.01.2001 г. и в приказе МЗ РФ № 000 от 19.г. «Об утверждении правил лабораторной практики».
В работе были использованы препарат α-липоевой кислоты и 1,5 % раствор реамберина (табл. 1).
Таблица 1.
Фармакологические препараты использованные в исследовании
№ | Фармакологические препараты, [лекарственное средство], форма выпуска | Фармакологическая группа (регистр лекарственных средств России, выпуск 14, 2006) |
1. | Берлитион® 300 [α-липоевая кислота], (Berlin-Chimie AG/Menarini Grup, Германия), раствор для инъекций 25 мг/мл этилендиаминовая соль альфа-липоевой кислоты в ампулах коричневого стекла по 12 мл | 11.2.3. (Гепатопротекторы) |
2. | Реамберин [N-(1-дезокси-D-глюцитол-1-ил)-N-метиламмония, натрия сукцинат] (, Санкт-Петербург) раствор для инфузий 1,5 % во флаконах по 400 мл | 8.7 (Детоксицирующие средства) 8.11 (Регуляторы вводно-электролитного обмена и КЩС) |
Примечание к табл. 1: в левом столбце указаны торговые наименования лекарственных препаратов. В скобках обозначены международное непатентованное наименование [МНН] лекарственного вещества (для α-ЛК) и химическое название активного компонента (для реамберина) с указанием производителя препаратов в обоих случаях.
Исследуемые препараты разводили в 0,9 % растворе NaCl и применяли в трех дозах, экстраполированных из разовых дозировок терапевтического диапазона для человека с учётом различий в величинах относительной площади поверхности тела ( и др., 2000). В обоих случаях минимальной дозой изучаемого диапазона являлась ½ от расчетного эквивалента средней терапевтической дозы (ЭСТД). В качестве максимальной дозировки использовался удвоенный ЭСТД. Разовые дозы 1,5 % реамберина для крыс составили 12,5, 25 и 50 мл/кг, для мышей – 25, 50 и 100 мл/кг. Препарат α-ЛК вводили крысам в дозах 25, 50 и 100 мг/кг, соответствующие дозировки для мышей составили 50, 100 и 200 мг/кг. Животные контрольных подгрупп получали соответствующие объемы 0,9 % раствора NaCl.
В серии экспериментов по изучению влияния реамберина и α-ЛК на чувствительность к инсулину было использовано 70 интактных крыс, подвергнутых предварительному суточному голоданию при свободном доступе к воде. Исследуемые ЛС вводили однократно внутрибрюшинно в ранее указанных разовых дозах. Контрольные животные получали 0,9 % раствор NaCl в соответствующем объеме. Сразу после внутрибрюшинного введения изучаемых ЛС или 0,9 % раствора NaCl крысам проводили струйную внутривенную инфузию нейтрального раствора инсулина для инъекций (Хумулин регуляр, «Eli Lilly», Франция), предварительно разведенного в растворе Рингера (состав: на 400 мл водного раствора - 3,6 г NaCl, 0,08 г KCl, 0,08 г СаС12, 0,4 г глюкозы) до концентрации 8 IU/мл в объёме 5 мл/кг (доза 40 IU/кг) ( и др., 1993). Чувствительность животных к инсулину оценивали по длительности временного промежутка с момента инъекции до развития комы ( и др., 1993).
В отдельной серии экспериментов оценивали влияние реамберина и α-ЛК на толерантность к глюкозе у интактных крыс. Было использовано 70 животных, подвергнутых предварительному суточному голоданию при свободном доступе к воде. Через 30 минут после однократного внутрибрюшинного введения ЛС в изучаемых дозах у животных забирали кровь из хвостовых вен для регистрации исходных значений гликемии и выполняли тест толерантности к глюкозе (ТТГ). С этой целью применяли нагрузку глюкозой в дозе 2 г/кг (5 мл/кг 40% раствора глюкозы, внутрибрюшинно). Изменения гликемии в динамике ТТГ регистрировали через 60 и 120 минут после сахарной нагрузки. Животным контрольных подгрупп за 30 минут до ТТГ вместо изучаемых ЛС вводили эквиобъемные количества 0,9 % раствора NaCl.
Учитывая известную роль редокс-праимирования инсулинового рецептора в регуляции чувствительности к этому гормону (Goldstein B. J. et al., 2005), в отдельной серии экспериментов было изучено ПОЛ-модулирующее действие реамберина и α-ЛК in vitro. Для изучения влияния реамберина и α-ЛК на интенсивность свободнорадикального (перекисного) окисления липидов in vitro использовался метод и др. (2000), основанный на анализе переокисления липидов стандартизованного препарата гомогенатов головного мозга крыс в присутствии изучаемых препаратов. Влияние ЛС на интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) in vitro оценивали по изменениям накопления веществ, реагирующих с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) в 2% гомогенатах головного мозга крыс, инкубируемых в атмосфере воздуха при 37 0С в течение 60 минут ( и др., 2000). Для изучения ПОЛ-модулирующего действия реамберина и α-ЛК в зависимости от их концентрации готовили ряд серийных разведений исходных растворов этих ЛС в 10, 100, 1000, 10000, 100000 и 1000000 раз. Это позволило оценить влияние реамберина и α-ЛК на ПОЛ в диапазоне от миллимолярной до наномолярной концентрации. Каждая проба выполнялась в 5 параллельных повторностях с последующим расчетом среднего показателя.
Изучение антигипоксического действия реамберина и α-ЛК проводилось на модели острой гипоксической гипоксии (асфиксии утопления) ( и др., 1986). Для оценки противовоспалительного действия изучаемых ЛС использовали тест «формалинового отека» на мышах ( и др., 1988; и др., 2000).
Аллоксановый диабет моделировали на крысах и мышах. В серии экспериментов на крысах индукцию аллоксанового диабета осуществляли путем внутрибрюшинного введения аллоксана тригидрата («La Chema», Чехия) или аллоксана моногидрата («ДИАэМ», Россия) в эквивалентных дозах (200 мг/кг и 163 мг/кг, соответственно). Экспериментальный СД у мышей вызывали путем подкожного введения аллоксана тригидрата («La Chema», Чехия) или аллоксана моногидрата («ДИАэМ», Россия) в эквивалентных дозах (300 мг/кг и 245 мг/кг соответственно). В обеих экспериментальных сериях контрольным животным вместо аллоксана вводили эквиобъёмное количество 0,9 % раствора NaCl.
Учитывая общеизвестную фазную динамику гликемии и инсулинемии у лабораторных грызунов после введения аллоксана, выраженность проявлении экспериментального СД оценивали не ранее чем через 72 часа с момента моделирования этого состояния (Lenzen S., 2008).
На фоне сформировавшегося экспериментального СД была изучена эффективность трех схем введения реамберина и α-ЛК. Каждый препарат вводили животным внутрибрюшинно 1 раз в сутки в ранее обозначенных дозах на протяжении 1, 7 и 14 дней.
Для предотвращения фатального кетоацидоза и гибели животных, начиная с 4 дня после инъекции аллоксана всем лабораторным грызунам с 7 и 14 дневным курсом терапии экспериментального СД проводили базисную инсулинотерапию (Federiuk I. F. et al., 2004). Для этого животным раз в сутки подкожно вводили раствор инсулина аспарата двухфазного (НовоМикс 30 Пенфилл, «Novo nordisk», Дания) в дозах 3 IU/кг (для крыс) и 6 IU/кг (для мышей).
В экспериментах на крысах через 1, 7 и 14 дней от начала терапии реамберином и α-ЛК исследовали поведение животных в «открытом поле» по показателям локомоции, исследовательско-ориентировочной активности, груминга и дефекации, считающейся вегетативным эквивалентом тревоги у крыс ( И др., 1991; и др., 2000). В работе применялся вариант актографа «открытое поле», разработанный и соавт. (1993, 1998, 2000). Примененный подход позволяет получить интегральную характеристику аффективного статуса грызунов, активность которых в «открытом поле» формируется как равнодействующая двух противоположных тенденций - страха незнакомого пространства и мотивации к его исследованию ( и др., 1991; и др., 2000). По завершении тестирования крыс в «открытом поле» оценивали их способность к выработке условного рефлекса активного избегания (УРАИ). В работе использовался вариант УРАИ, связанный с формированием навыка «избегания плаванием» за одну попытку ( и др., 1991). О качестве формирования УРАИ судили по кратности снижения латентного периода избегания через 24 часа после обучающей попытки.
В отдельных сериях экспериментов на мышах через 1, 7 и 14 дней от начала терапии аллоксанового диабета исследовали поведение мышей в «открытом поле». Для этой цели применяли актограф, конструкция которого описана в работе M. L. Weischer (1976). Сразу после завершения регистрации активности мышей в «открытом поле» выполняли шестиминутный тест подвешивания за хвост (Steru L., 1985) с регистрацией длительности «поведения отчаяния», который рассматривается как гомолог депрессивных расстройств у человека (Steru L., 1985).
Выраженность метаболических расстройств у экспериментальных животных с аллоксановым диабетом оценивали по показателям гликемии после 24 часовой депривации пищи при свободном доступе к воде. В серии экспериментов на крысах дополнительно определяли сывороточную концентрацию фруктозамина (ФА), отражающего интенсивность неферментного гликозилирования белков плазмы крови ( и др., 1987). О состоянии липидного обмена судили по общему содержанию холестерина (ХС) и триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови, которые регистрировали с помощью унифицированных клинико-лабораторных методов ( и др., 1987). Уровень продуктов ПОЛ в сыворотке крови определяли спектрофотометрически с раздельной регистрацией липопероксидов в гептановой и изопропанольной фазах липидного экстракта ( и др., 1989, 2000). Результаты выражали в единицах индексов окисления (е. и.о.) – Е232/Е220 (относительное содержание диеновых коньюгатов; ДК) и Е278/Е220 (уровень кетодиенов и сопряженных триенов; КД и СТ). О состоянии АОЗ судили по содержанию α-токоферола (α-ТК) и церулоплазмина (ЦП) в сыворотке крови. Концентрацию α-ТК определяли с использованием реактива Эммери-Энгель и поправкой на оптическое поглощение каротинов ( и др., 1979). Уровень ЦП регистрировали модифицированным методом Ревина ( и др., 1976).
Статистический анализ полученных данных проведен с использованием пакета прикладных компьютерных программ SPSS – 13.0 и StatSoft Statistica v. 6.0. Полученные данные были обработаны методами дескриптивной статистики и представлены в виде средней арифметической и её стандартной ошибки (M±m). О достоверности межгрупповых различий судили с помощью непараметрических критериев Манна-Уитни, Вальда-Вольфовица и Колмогорова-Смирнова. Анализ динамики гликемии при выполнении ТТГ проводился с помощью парного критерия Уилкоксона, предназначенного для суждения о значимости различий в связанных выборках. Межгрупповые сопоставления показателей летальности проводили с помощью точного критерия Фишера. Для изучения статистических взаимосвязей рассчитывали коэффициент ранговой корреляции по Спирману (rs) и Кендалу (rk). Проверка статистических гипотез осуществлялась при критическом уровне значимости Р=0,05.
Результаты и обсуждение
В результате проведенного исследования было установлено, что реамберин и α-ЛК оказывают инсулин-потенциирующее действие in vivo (табл.2) и способствуют накоплению ТБК-реактивных веществ в гомогенатах головного мозга крыс in vitro (рис. 1).
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 |
