Суммарная доза, при которой было отмечено начало падежа животных, составила 26244 мг/кг. При дальнейшем введении препарата гибель белых крыс продолжалась до 23-го дня от начала опыта, когда погибли все подопытные животные, получавшие ДМДПС. Коэффициент кумуляции составил 5,42 и на основании этого ДМДПС может быть отнесен к слабо кумулирующим веществам (, 1981). Об этом также свидетельствует и относительно большая продолжительность жизни животных при его повторном введении.
Оценка раздражающего действия ДМПСД проведена при нанесении его на слизистую оболочку глаза и на кожу кроликов.
В первом опыте (контроль) под конъюнктиву правого глаза кролика вводили 3 капли стерильного физиологического раствора, опытным животным - раствор ДМДПС в концентрациях: 0,01 %; 0,1 %; 1,0 % по 1 разу в день в течение 5 дней. Клиническое состояние кроликов, при введении ДМДПС под конъюнктиву глаз, оставалось в пределах нормы, т. е. не выявлялись изменения температуры тела, частоты пульса и количестве дыхательных движений. ДМДПС в концентрациях 0,01 % и 0,1 % не вызывал изменений общего состояния животных и слизистой глаза по сравнению с контрольными кроликами. Применение 1,0%-го раствора препарата сопровождалось более выраженным, чем в контроле беспокойством, кратковременным (до 30 минут) слезотечением и слабым покраснением слизистой оболочки. Однако эти признаки наблюдаются только в течение первых 30 минут после введения препарата.
При изучении раздражающего действия ДМДПС на кожу установлено, что однократная аппликация на кожные покровы кроликам 0,1 и 1,0%-ного раствора ДМДПС, при плотности нанесения от 0,020 до 0,12 мл/см2, не приводила к повреждению кожи в виде эритемы или ее отеков, т. е. вещество не обладало раздражающим действием. Двадцатикратная аппликация 5%-го раствора ДМДПС при плотности нанесения 0,1 мл/см2 также не вызывал явлений сенсибилизации.
Выявление и количественная оценка потенциальной цитогенетической активности ДМДПС, его способности к индукции хромосомных аберраций, изучена на клетках костного мозга белых крыс, которым ДМДПС вводили внутримышечно однократно в дозе 92,0 мг/кг и четырехкратно в этой же дозе.
Установлено, что ДМДПС ни в одном из вариантов не вызвал увеличения уровня хромосомных аберраций в клетках костного мозга крыс, т. е. диметилдипиразолилселенид в изученной дозе не обладал мутагенной активностью.
3.1.2. Субхроническая токсичность ДМДПС для сельскохозяйственных животных
Субхроническая токсичность диметилдипиразолилселенида изучена на поросятах 2-месячного возраста при введении внутримышечно в дозах 18,2 и 91,2 мг/кг в течение 14 дней.
Установлено, что ДМДПС в изученных дозах не оказывал существенного влияния на клинический статус, скорость роста, поведение и аппетит поросят, а его многократное применение в тех же дозах существенно не влияло на морфологические и биохимические показатели крови животных. лишь при применении ДМДПС в дозе 91,2 мг/кг отмечена тенденция повышения в сыворотке крови уровня мочевины, креатинина, билирубина и активности АсАТ, что свидетельствовало о несколько возросшей нагрузке на почки ипечень.
Изучение субхронической токсичности ДМДПС на телятах месячного возраста при введении диметилдипиразолилселенида внутримышечно в дозах 18,2 или 91,2 мг/кг массы тела показало, что в изученных дозах он также не оказывает существенного влияния на рост, клинический статус, поведение, аппетит, функции пищеварения и мочеотделения телят, морфологические и биохимические показатели их крови. Так же, как и в опыте на поросятах, была выявлена тенденция повышения в сыворотке крови уровня мочевины и креатинина, количества билирубина и активности АсАТ и АлАТ при введении препарата дозе 91,2 мг/кг массы тела.
3.1.3. Адаптогенная активность, стресс-корректорное действие и
антиоксидантная активность диметилдипиразолилселенида
При оценке биоцидных свойств ДМДПС установлено, что данное органическое соединение селена не проявляет биоцидного действия в разведениях 1×10-3 и ниже, а в разведениях 1×10-1, 1×10-6, 1×10-7 не оказывает существенного влияния на устойчивость инфузорий к изменению осмолярности среды. В концентрации 1×10-4 индекс биологической активности составил 1,138, что указывает на защитное влияние препарата для инфузорий при действии на них неблагоприятного фактора, в данном случае 15% раствора натрия хлорида (табл. 3).
Таблица 3
действие ДМДПС при повреждении инфузорий Р. caudatum
гипертоническим раствором NaCl
Испытуемый образец | Индекс биологической активности объекта в разведениях, мг/мл | ||||||
1×10-1 | 1×10-2 | 1×10-3 | 1×10-4 | 1×10-5 | 1×10-6 | 1×10-7 | |
Контроль | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 |
ДМДПС | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,138 | 1,012 | 1,000 | 1,000 |
При определении влияния ДМДПС на интенсивность размножения инфузорий установлено, что он повышает интенсивность размножения свободноживужих одноклеточных. Максимальная интенсивность размножения (МИР) парамеций наблюдается при применении ДМДПС в концентрации 1×10-3, что проявляется повышением МИР в 1,5 раза по сравнению с контролем.
Адаптогенные свойства ДМДПС далее оценены на модели острого иммобилизационного стресса в опыте на 120 самцах белых крыс. Животные были разделены на 4 групп по 30 в каждой, из которых три являлись опытными, но различавшимися по вводимой дозе вещества (5,0; 10; 50 мкг/кг); крысам четвертой группы вводили соответствующий объем стерильного физиологического раствора. Иммобилизация проводилась через 6 часов после введения ДМДПС.
Иммобилизация животных контрольной группы сопровождалась развитием у них симптомов острого стресса – снижением массы тела, развитием эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки желудка, гипертрофией надпочечников и инволюцией тимуса и селезенки.
У животных подопытных групп ДМДПС во всех дозах обеспечивал предупреждение стрессогенного снижения массы тела животных на 15,0-45,2%. максимальная эффективность выявлена при применении ДМДПС в дозе 10,0 мкг/кг (табл. 4).
Таблица 4
Влияние ДМДПС при иммобилизационном стрессе на изменение массы тела крыс и язвообразование
Показатели | Контроль | Доза, мкг/кг | ||
5,0 | 10,0 | 50,0 | ||
Масса тела до опыта, г | 138,7±7,5 | 137,5±4,1 | 138,9±5,3 | 141,7±4,9 |
Масса тела после иммобилизации, г | 126,3±6,8 | 129,2±4,0* | 132,1±4,5* | 130,9±3,8* |
Снижение массы, % | 8,94 | 6,0 | 4,9 | 7,6 |
Кол-во животных с язвами, % | 75,0 | 60,0 | 60,0 | 80,0 |
Суммарная длина язв, мм | 6,96±1,89 | 1,40±0,58* | 1,20±0,61* | 4,04±1,55 |
* - Р < 0,05 по отношению к контрольной группе
Ульцеропротективные свойства выявлены при введении ДМДПС во всех испытанных дозах. Это проявлялось снижением количества животных с язвенными поражениями слизистой оболочки желудка в среднем на 15% и уменьшением суммарной длины язв в 1,7-5,8 раза.
Наиболее выраженное снижение интенсивности язвообразования было при введении диметилдипиразолилселенида в дозах 5,0 и 10,0 мкг/кг массы тела.
Стрессогенная гипертрофия надпочечников при иммобилизации в контрольной группе составила 124,0%, в опытных – лишь 104,0; 96,0; 108,0 % соответственно, а по отношению к контролю степень гипертрофии их снижалась на 16,2; 22,6 и 12,9 %. Наиболее эффективно применение диметилдипиразолилселенида в дозе 10,0 мкг/кг, о чем свидетельствует снижение гипертрофии надпочечников в 1,3 раза по сравнению с контрольными животными.
ДМДПС в дозах 5,0; 10,0; 50,0 мкг/кг не оказывал существенного влияния на изменение массы селезенки и тимуса, выявлена лишь тенденция к проявлению защитного эффекта соответственно на 8,8-15,0; 8,0-9,4% и 6,9-9,4-7,3% в зависимости от дозы.
Оценку антиоксидантных свойств ДМДПС проводили на белых беспородных крысах-самцах на модели «оксидативного стресса» при введении 5,6-ди-оксиурацилмоногидрата (ДОУМГ). Животные были разделены на четыре группы. Первая группа – интактные животные. Животным 2-ой группы вводили ДОУМГ (отрицательный контроль). Крысам 3-ей группы за 7, 5, 3 и 1 сутки до интоксикации применяли, внутримышечно ДМДПС в дозе 10,0 мкг/кг раз в сутки. Животным 4-ой группы двукратно, внутримышечно вводили ДМДПС в дозе 10,0 мкг/кг через 1 час и 24 часа после применения ДОУМГ. Об антиоксидантных свойствах ДМДПС судили по накоплению в крови продуктов пероксидного окисления липидов (ПОЛ).
Установлено, что ДОУМГ вызывает гибель 57,1% животных. При профилактическом введении диметилдипиразолилселенида выживаемость животных повышается на 34,2% по сравнению с контролем. На фоне действия ДМДПС, введенного после ДОУМГ, гибель животных снижается на 28,5% по сравнению с группой отрицательного контроля.
При введении ДОУМГ в группе отрицательного контроля масса тела крыс снижалась на 19,9%. Применение ДМДПС до и после введения ДОУМГ предотвращало снижение массы тела на 14,2 и 12,6% соответственно.
Профилактическое введение ДМДПС животным, которым в последующем вводили ДОУМГ, снижало уровень диеновых конъюгатов на 24,9%, кетодиенов на 32,0% и малонового диальдегида на 34,7%, по сравнению с животных, которым вводили только ДОУМГ (табл. 5).
Таблица 5
Влияние профилактического применения ДМДПС на показатели ПОЛ
в крови крыс в норме и при ввведении ДОУМГ
№ | Группа животных | Диеновые конъюгаты, D232/мг липидов | Кетодиены, D278/мг липидов | МДА, мкМ/л |
1 | Контроль | 0,122±0,010 | 0,030±0,021 | 1,39±0,015 |
2 | ДОУМГ | 0,305±0,024* | 0,075±0,030* | 2,22±0,041* |
3 | ДМДПС + ДОУМГ (профилактика) | 0,229±0,036*@ | 0,051±0,034*@ | 1,45±0,057*@ |
4 | ДОУМГ +ДМДПС (лечение) | 0,235±0,012@ | 0,049±0,015@ | 1,55±0,010@ |
*–P1–2,3,4 < 0,05; @ – P2-3,4 <0,05
Применение ДМДПС после интоксикации так же ограничивало интенсивность свободнорадикального окисления (СРО).
В целом применение ДМДПС в меньшей степени отражается на содержании первичных продуктов ПОЛ – конъюгированных диенов и в большей степени на концентрации малонового диальдегида.
Это может объясняться, вероятно, тем, что его применение способствует ограничению ПОЛ на более поздних этапах СРО и блокирует дальнейшее развитие цепных реакций СРО.
Таким образом, проведенными исследованиями установлено наличие стресс-корректорного, адаптогенного и антиоксидантного действия у ДМДПС.
3.2. Токсикометрическая и фармакологическая оценка селеданта
3.2.1. Острая и хроническая токсичность селеданта
Эксперименты по определению острой токсичности селеданта выполнены в двух повторностях на белых мышах и белых крысах обоего пола при введении препарата однократно внутрь в дозах от 5,0 до 30,0 г/кг и 10,0-60,0 г/кг массы тела и внутрибрюшинно (дозы выше 15,0 г/кг вводили в два приема с интервалом в 2 часа). Гибели животных при всех дозах в период опыта на протяжении 14 дней не установлено.
Среднелетальную дозу – LD50 определить не удалось, так как при введении селеданта внутрь в дозе 30,0 г/кг или 60 г/кг м. т. внутрибрюшинно гибели животных не отмечалось.
Патоморфологическое изучение, по окончании эксперимента, не выявило нарушений в структурной организации внутренних органов.
При изучении подострой токсичности селеданта установлено, что семикратное введение селеданта внутримышечно в дозах (по ДВ) 10 и 100 мкг/кг не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных – поведение, аппетит, частота дыхания у всех животных опытных групп в период опыта и в течение месяца после они оставались в пределах нормы.
| Характер динамики роста крыс под влиянием селеданта в дозе 10 мкг/кг в период наблюдений существенно не отличался от животных контрольной группы, но при этом интенсивность набора массы тела была устойчиво выше на 3,7-9,1% (рис. 2). Такое действие было равномерным и стабильным и наблюдалось еще 30 дней после опыта. Селедант в дозе 100 мкг/кг проявил такое же, но менее выраженное влияние на рост белых крыс. Относительная масса внутренних органов крыс, которым применяли препарат, морфологические и |
Рис.2. Среднесуточные привесы крыс при многократном введении селеданта в дозе 10 и 100 мкг/кг массы тела (в % к исходному)биохимические показатели крови существенно не отличались от таковых у крыс контрольной группы.
Эмбриотоксическое и тератогенное действие селеданта изучено на самках белых крыс. Животным опытных групп на пятый день беременности (период имплантации) и второй на 10-й день беременности (период органогенеза) вводили внутримышечно селедант в дозе 100 мкг/кг, третья группа – контрольная.
Результаты изучения эмбриотоксического действия селеданта в дозе 100 мкг/кг показали, что у крыс опытных групп наблюдалась определенная тенденция положительного влияния селеданта на эмбриогенез (табл. 6).
Таблица 6
Эмбриотоксическое и тератогенное действие селеданта
в дозе 100 мг/кг (по ДВ)
Показатели | Контроль | Через | |
5 дней | 10 дней | ||
Количество желтых тел на 1 самку | 11,9±0,5 | 11,7±0,4 | 11,6±0,5 |
Количество живых эмбрионов на 1 самку | 9,5±0,3 | 10,8±0,3* | 9,9±0,4 |
Количество мертвых эмбрионов на 1 самку | 1,0±0,3 | 0,9±0,4 | 1,0±0,3 |
Общая эмбриональная смертность, % | 13,5±0,5 | 12,9±0,4 | 12,7±0,5 |
Доимплантационная гибель, % | 4,5±0,5 | 4,12±0,09* | 4,0±0,15* |
Постимплантационная гибель, % | 9,2±0,7 | 9,0±0,4 | 8,9±0,4 |
Выживаемость,% | 86,2±9,1 | 88,9±10,5 | 88,9±0,4 |
Средний вес 1 крысенка, г | 6,03±0,184 | 6,14±0,169 | 6,19±0,217 |
Средняя длина туловища | 46,2±0,4 | 48,3±0,9 | 48,9±0,5 |
Средняя масса плаценты, мг | 295,6±40,2 | 312,4±28,4 | 309,6±27,7 |
* - Р<0,01 по сравнению с контролем
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
