Экспериментальная и клиническая фармакология органических и неорганических препаратов селена и эффективность применения их в ветеринарии (стр. 3 )

Количество живых эмбрионов у животных опытных групп, по сравнению с контролем, через 5 дней было выше на 13,7%, через 10 дней – на 4,2%. При этом общая эмбриональная смертность в опытных группах была ниже, чем в контроле, доимплантационная – на 8,4% и 11,1% на 5-й и 10-й дни соответственно. Не установлено и тератогенного действия селеданта. Его применение способствовало увеличению веса крысят опытной группы, средней длины туловища и массы плаценты.

Крысята, рожденные от самок опытных групп, не отличались от крысят самок контрольной группы. Морфологические исследования показали отсутствие аномалий развития внутренних органов и скелета плодов.

При изучении раздражающего действия селеданта установлено, что клиническое состояние кроликов, после нанесения препарата на конъюнктиву глаза, оставалось в пределах нормы, не было отмечено изменений температуры тела, частоты пульса, количества дыхательных движений и раздражения роговицы, конъюнктивы и век. однократная аппликация селеданта на кожу кроликов с плотностью нанесения от 0,020 до 0,12 мл/см2 не вызывала раздражения и повреждения кожи в виде эритемы или отеков.

Определение раздражающих свойств селеданта при внутрикожной инъекции проведено на кроликах. препарат вводили в объеме 0,3 см3. Через 20 минут после введения препарата внутривенно вводили 1% раствор трипанового синего в дозе 1 см3/кг массы тела. Установлено, что селедант оказывает слабое раздражающее действие через 30 минут после введения, которое проходило через час.

Изучение кожно-резорбтивного действия селеданта проводили на белых крысах, препарат наносили на предварительно подготовленные участки кожи при плотности нанесения 50-60 мг/см2 и экспозиции 2 часа, 6 раз в неделю. Установлено, что 20-кратная аппликация селеданта на кожу крыс не вызывает гибели животных, нарушения её целостности на месте нанесения.

При изучении аллергизирующих свойств селеданта на белых крысах, препарат наносили на кожу по 0,5 мл на площадь 5 см2 (плотность 0,1 мл/см2) в течение трех недель по 6 раз в неделю. Первое тестирование селеданта, путем нанесения в дозе в 5 раз превышающую сенсибилизирующую, проводили после 10 аппликаций, затем – через 14 и 20 суток от начала аппликации. Животным контрольной группы применяли только разрешающие дозы. установлено, что 20-кратная аппликация препарата не вызывает явлений сенсибилизации.

3.2.2. Субхроническая токсичность селеданта для сельскохозяйственных животных

Определение субхронической токсичности селеданта проводили на телятах. Препарат вводили в дозах 10, 20, 40 и 60 мкг/кг в течение 5 дней, животным 5-й группы (контроль) применяли селенит натрия в дозе 100 мкг/кг, 6-я группа телят служила отрицательным контролем.

Применение селеданта в указанных дозах существенно не влияло на клинико-физиологические показатели подопытных телят (поведение, аппетит, заболеваемость, признаки токсикоза, температура тела, частота пульса, дыхания и т. д.). Животные группы отрицательного контроля за 35 дней опыта дали среднесуточный прирост массы ,0±47,5 г. В группе, где телятам применяли селенит натрия, среднесуточный прирост массы тела составил 436,0±27,9 г. наибольшие среднесуточный прирост массы ,0±47,1 г) был у животных, получавших селедант в дозе 10 мкг/кг, что на 18,8% выше, чем у телят контрольной группы.

При изучении влияния селеданта на интенсивность СРО липидов установлено, что наиболее существенно применение селеданта снижает содержание кетодиенов на 14,4 и 15,1%, малонового диальдегида - на 22,1 и 18,0% в дозах 10 и 20 мкг/кг соответственно. Наряду с этим После применения селенита натрия в дозе 100 мкг/кг в крови подопытных телят, по сравнению с контролем, статистически достоверного снижения уровня кетодиенов не зафиксировано, а концентрация МДА была ниже на 12,6%.

Определение субхронической токсичности на поросятах, получавших селедант в дозах 20, 40 и 60 мкг/кг в течение 5 дней, показало, что препарат в указанных дозах не оказывает отрицательного влияния на аппетит, общее состояние, поведение. В дозе 20 мкг/кг массы тела селедант более заметно оптимизирует показатели гомеостаза за счет повышения содержания эритроцитов и гемоглобина.

3.3. Токсикометрическая и фармакологическая оценка селемага

3.3.1. Острая и хроническая токсичность селемага

установлено, что по параметрам острой токсичности на лабораторных животных селемаг согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к IV классу опасности – веществам малоопасным (табл. 7).

Таблица 7

Параметры острой токсичности селемага для лабораторных животных (мг/кг) при однократном внутрижелудочном введении

Вид животных	Параметры токсичности	SLD50
МПД	LD16	LD50	LD84	LD100
Белые мыши	4000,0	4926,0	7671,3 ()	10515,1	11912,4	±574,7
Белые крысы	4000,0	4848,5	8313,3 ()	11913,7	13680,1	±563,4

Изучение хронической токсичности показало, что многократное пероральное введение селемага в дозах 166,3 и 831,3 мг/кг на 7, 14 и 21-й дни опыта не вызывало существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, частота дыхания животных контрольной и опытных групп в период применения препарата, оставались в пределах нормы, нарушений функций пищеварения и мочеотделения и гибели животных зафиксировано не было.

Относительная масса органов крыс, которым 21 день вводили селемаг, морфологические и биохимические показатели крови существенно не отличались от таковых у животных контрольной группы на 7, 14 и 21 дни его применения.

Раздражающие свойства селемага были изучены на кроликах. Нанесение препарата на слизистую глаз или однократная аппликация на кожу, при плотности нанесения 0,020-0,12 мл/см3 поверхности не вызывает изменения кровенаполнения конъюнктивы, лакримаций, повреждений кожи, эритемы или отёков.

При оценке аллергизирующих свойств селемага на морских свинках и белых крысах, с помощью конъюнктивальной пробы, реакции непрямой дегрануляции тучных клеток (РДТК), реакции специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ) и реакции специфического лизиса лейкоцитов установлено отсутствие аллергенного действия селемага.

Оценку эмбриотоксического и тератогенного действия препарата проводили на самках белых крыс, разделенных на три группы: контрольную и две опытные. Крысам первой опытной группы на пятый день беременности (период имплантации) и второй на 10 день беременности (период органогенеза) вводили селемаг в дозе 0,05 мл/кг внутримышечно. Половину самок убивали на 19-20 день беременности.

Существенных различий в плодовитости крыс опытных и контрольной групп не установлено. Число мертвых эмбрионов и желтых тел на самку было одинаково во всех группах, доимплантационная гибель на 5-й день в опыте была ниже, чем в контроле на 6,1%, к 10-му дню – 9,4%, а постимплантационная - на 6,8% и 5,3% соответственно. Общая эмбриональная смертность крысят из подопытной группы также была ниже, чем в контроле на 5 и 10 дни на 21,6 и 9,0%. Следовательно, селемаг в дозе 0,05 мл/кг не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.

Изучение субхронической токсичности селемага, показало, что его введение поросятам в дозе 0,05 мл/кг (терапевтическая доза) в течение 10 дней не влияет на клинико-физиологическое состояние животных.

Рис. 3. Влияние селемага на динамику массы тела поросят

В течение опыта поросята были энергичными, имели хороший аппетит, рефлексы сохранены, нарушений функций пищеварения и мочеотделения не было установлено. Прирост массы тела поросят опытной группы был несколько выше, чем в контроле на 7,14 и 21 день (рис.3). Существенных изменений морфологических и биохимических показателей крови и мочи поросят, получавших селемаг, не установлено. Данные о функциональном сос-

тоянии печени, почек, других систем и органов, показатели, характеризующие белковый, углеводный, жировой и минеральный обмены, а также активность ферментных систем находились в пределах физиологической нормы.

Изучение защитных свойств селемага на белых крысах при «оксидативном стрессе», при профилактическом применении препарата в дозе 0,05 мл/кг за 7, 5, 3 и 1 сутки до введения ДОУМГ (профилактическая эффективность) и через 1 час и 24 часа после введения ДОУМГ (лечебная эффективность), показало, что препарат достаточно выраженными защитными свойствами, связными с наличием у него антиоксидантной активности.

Установлено, что введение ДОУМГ вызывает гибель 55,6% животных в контрольной группе. Введение селемага за сутки до применения ДОУМГ повышало выживаемость животных на 11,2%, а за 7 дней – до 88,9%. Применение ДОУМГ животным контрольной группы снижало массу тела крыс, оставшихся живыми на 19,9%, тогда как при введении селемага за 7, 5 и 3 дня до применения токсиканта наблюдалась тенденция к уменьшению потери массы тела крыс опытных групп на 1,2; 2,0 и 3,8%, а при введении препарата за сутки или через один час после введения ДОУМГ – на 8,9% и 9,3% соответственно.

3.4. Влияние препаратов селена на клинико-физиологические показатели и продуктивность крупного рогатого скота

3.4.1. Влияние препаратов селена на гомеостаз и систему ПОЛ-АОЗ у коров в период сухостоя

В опыте использовали клинически здоровых коров, которым на 1-ой неделе сухостойного периода однократно внутримышечно вводили селедант в дозе 10 мкг/кг (1-я группа), второй – 0,5% раствор селенита натрия в дозе 10 мл, третья группа коров была контрольной.

Установлено, что у животных подопытных групп через 30 дней после введения препаратов, в сравнении с контролем (рис. 4), содержание гемоглобина повышалось: при применении селеданта на 14,6%, селенита натрия - на 7,2%, эритроцитов - на 16,6 % и на 10,9 % соответственно. У коров первой группы в крови, по сравнению с животными, получавшими селенит натрия, уровень глюкозы был выше на 5,6%, а витамина А – на 10,9%. В то же время при применении селенита Na у животных в крови, по сравнению с селедантом, было выше содержание витаминов С и Е соответственно на 18,2 и 25,0%.

При введении сухостойным коровам селеданта уровень иммуноглобулинов класса G в сыворотке крови увеличивается на 13,7 %, а селенита Na - на

Рис.4. Содержание эритроцитов, гемоглобина, витаминов А, Е и С, глюкозы в крови сухостойных коров, получавших препараты селена (в % к контролю)

9,5 %, что может свидетельствовать об их меньшей окислительной модификации при интенсификации процесса СРО в этот период. Это подтверждается тем, что при введении коровам селенита Na уровень вторичных продуктов ПОЛ – кетодиенов снижается на 16,4 %, селеданта – на 25,6 %, малонового диальдегида – на 11,6 и 23,3 % соответственно при сохранении общего пула основных эндогенных атиоксидантов, который снижается у животных контрольной группы.

3.4.2. Воспроизводительная способность, молочная

продуктивность коров и качество молозива

Изучение действия препаратов селена на репродуктивную функцию коров и состояние полученных от них телят, проведено на стельных сухостойных коровах, которым за 35-40 и 5-7 дней до отела вводили внутримышечно вводили: 10 мл 0,5% раствор селенита натрия (1-я опытная группа) и селедант в дозе 10 мкг/кг (2-я опытная группа). Коровы контрольной группы препаратов селена не получали.

Установлено, время отделения последа у коров 1-й и 2-й групп было меньше, чем в контроле на 40 минут и 50 минут, а инволюционные процессы в матке завершались быстрее на 4 и 6 дней соответственно (табл. 8).

Таблица 8

Влияние селенсодержащих препаратов на показатели воспроизводительной функции коров

Показатели	Группы (n=12)
контрольная (n=12)	Селенит Na (n=12)	Селедант (n=12)
Время отделения последа, мин.	240 ± 25,2	200 ± 15,6*	190 ± 10,3*
Время инволюции матки, дн.	38,0 ± 4,0	34,0 ± 2,8	32,0 ± 1,5
Мастит, % Эндометрит, % Задержание последа, %	33,3 16,6 8,3	24,9 8,3 8,3	16,6 8,3 -
Оплодотворяемость по 1-му осеменению, %	58,3	65,6	66,7
Коэффициент оплодотворения	1,71 ± 0,191	1,59 ± 0,253	1,52 ± 0,157

* - P<0,05 по сравнению с контролем

После отела в контрольной группе было зарегистрировано: у 8,3% – задержание последа, у 16,6% - эндометрит и у 33,3% коров - мастит. у животных из группы, которым вводили селенит Na у 8,3% коров был зарегестрирован мастит и эндометрит, а которым применяли селедант заболевание маститом и эндометритом было у 16,6 и 8,3 % животных из группы, а случаев задержания последа не зафиксировано. Оплодотворяемость коров из второй группы составила после 1-го осеменения 66,7%, 2-х осеменений – 91,7%, тогда как в первой группе она составляла 65,6 и 83,3%, а в контроле 58,3 и 83,3% соответственно.

Молочная продуктивность коров 1-й и 2-й подопытных групп за первые 100 дней лактации была выше, чем в контроле соответственно на 3,8 и 7,1%. Применение препаратов селена существенно не влияло на жирность молока, но способствовало улучшению биологических свойств молозива. И, если применение селенита Na не вызывало существенных изменений качества молозива, то введение селеданта улучшило состав молозива. В нем было больше белка на 10,6%, казеина – на 6,2%, золы – на 13,8%.

3.4.3. Жизнеспособность телят при назначении препаратов селена
сухостойным коровам

Установлено, что в течение первой недели жизни у 4-х телят (33,3%), полученных от коров контрольной группы развился диарейный синдром в тяжелой форме, при этом один телёнок пал, несмотря на проведенное лечение. Из 12 телят, матерям которых в сухостойный период применяли селенит натрия, переболели со средней степенью тяжести расстройством желудочно-кишечного тракта 16,6%, селедант - 8,3% заболевания. Через 3-4 дня они все выздоровели. новорожденные телята, полученные от коров контрольной и опытных групп не имели достоверных различий по массе тела.

Содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина в крови телят всех групп в первые дни жизни было в пределах физиологической нормы, но у телят 2-й группы их уровень был на 9,7% выше, чем в контрольной и на 9,9 % - выше, чем у телят 1-й группы. Уровень общего белка в сыворотке крови телят 1-й и 2-й опытных групп в 2-дневном возрасте был выше, чем у телят контрольной группы на 10,8 и 30,1%, γ-глобулинов - на 33,6 и 57,0%, а содержание малонового диальдегида ниже, чем у животных контрольной группы на 19,6 и 35,0% соответственно.

Наиболее выраженное положительное действие на показатели иммунного статуса новорожденных телят оказало применение сухостойным коровам селеданта (табл. 9).

Таблица 9

Влияния селеданта на показатели иммунного статуса телят
в 7-дневном возрасте

Группы	Общие ИГ	ЛАСК, %	ФАЛ, %	ФИ	ФЧ
Селедант	13,2±0,39	13,2±0,78*	42,6±0,72*	7,5±0,17*	2,6±0,09*
Контроль	12,7±0,57	10,4±0,34	36,3±0,97	6,3±0,20	2,0±0,08

*- P < 0,05 по сравнению с контролем.

Так на 7-й день после рождения у них по сравнению с показателями телят контрольной группы был выше уровень общих иммуноглобулинов на 4,0%, лизоцимная активность - на 31,0%, фагоцитарная активность лейкоцитов - на 14,9%, фагоцитарный индекс - на 15,4%, фагоцитарное число - на 25,8%, фагоцитарная емкость - на 30,1%.

Эти результаты согласуются с данными других исследователей ( с соавт, 2005; с соавт., 2006; , 2009 и др.) о положительном влиянии антиоксидантных препаратов, применяемых коровам-матерям на иммунный статус и устойчивость к возникновению диарейного синдрома инфекционной этиологии у новорожденных телят в неонатальный период.

3.4.4. Продуктивность коров и качество молока при применении

препаратов селена в период лактации

Установлено, что применение 10 мл 0,5% селенита натрия (1-я группа) и селеданта в дозе 10 мкг/кг массы (2-я группа) тела способствовало увеличению удоев соответственно на 2,6 и 8,0% за 90 дней опыта.

Содержание молочного жира в молоке коров 1-й группы было на 3,1 % а 2-й - на 8,3% больше, чем в молоке коров контрольной группы. Содержание сухих веществ в молоке коров первой опытной группы было 12,08±0,08%, 2-й - 12,27±0,01% при 11,95±0,09% в контрольной группе. Сухой остаток молока (СОМО) коров из 2-й группы был выше на 0,16%, содержание белка - на 0,40%, лактозы - на 0,30% относительно молока контрольных коров. Содержание кальция в молоке коров 2-й группы было выше, чем у животных, не получавших препараты селена, на 8,2 мг%, а фосфора у животных 1-й и 2-й группы - на 4,2 и 5,6%, соответственно.

Жировых шариков в молоке, полученном от коров 2-й группы, было больше на 8,7%, чем в молоке контрольных животных. При этом применение селенита Na не влияло на их количество, а средний диаметр жировых шариков был наибольшим в молоке животных, получавших селедант. Плотность молока коров контрольной группы была ниже, чем плотность молока у коров, получавших селенит Na на 0,60оА и на 1,08оА – селедант. При органолептической оценке молока от коров опытных и контрольной групп существенной разницы не выявлено. Энергетическая ценность 1 кг молока от коров, которым вводили селенит Na была на 13,2 ккал, а селедант - на 31,5 ккал выше, чем молока контрольных коров.

3.4.5. Влияние селемага и селеданта на метаболический статус и
продуктивность первотелок

Изучение действие селемага и селеданта на гомеостаз, репродуктивную функцию проведено на трех группах нетелей. Первая группа была контрольной, животным второй группы за 35-40 и 5-7 дней до отёла вводили внутримышечно селедант в дозе 10 мкг/кг, а животным третьей – по той же схеме селемаг в дозе 5 мл/100 кг массы тела.

Установлено, что изученные показатели метаболического статуса более оптимальны, по сравнению с контролем, у животных, получавших селедант и селемаг. Однако у коров 1-й группы были выше, чем во 2-й группе, содержание каротина на 10,4%, фосфора – на 7,3%, общего белка на 8,4%, γ-глобулинов на 15,7%, глюкозы на 16,7%, но ниже на 7,2% активность каталазы и церулоплазмина. Сравнительная оценка влияния на воспроизводительную функцию селеданта и селемага показала более высокую эффективность селеданта (табл. 10).

Таблица 10

Показатели воспроизводительной функции первотелок при применении
селеданта и селемага

Показатели	Группы
Контроль (n=10)	Селедант (n=10)	Селемаг (n=10)
Задержание последа, гол. (%) Гнойно-катаральный эндометрит, гол. (%)	4(40) 5(50)	0 (0) 2(20)	2(20) 3(30)
Период от отела до оплодотворения, дней	86,6±4,5	72,3±2,1*	74,6±3,8*
Коэффициент оплодотворения	2,12±0,02	1,69±0,01*	1,75±0,04*

* - P<0,05 по сравнению с контролем

Нормальное течение родов наблюдалось у 80,0 % животных, которым применяли селедант. У 20,0 % первотелок послеродовой период был осложнен развитием эндометрита. При применении селемага у 20,0% были зарегистрированы случаи задержания последа, 30,0% животных переболели после родов эндометритом. При этом в контрольной группе у 40,0% первотелок было зарегистрировано задержание последа и у 50,0% - эндометрит. В связи с этим у животных, получавших селедант, сократился промежуток времени от родов до оплодотворения - на 14,3 дня и снизился индекс оплодотворения на 0,43, при применении селемага - на 12,0 дней и 0,37 соответствено. Полученные данные свидетельствуют о более высокой эффективности селеданта, чем селемага, для оптимизации воспроизводительной функции первотелок.

Молочная продуктивность в группе первотелок, получавших селедант, за 3 месяца лактации была выше на 8,1%, чем у первотелок, которым применяли селемаг.