Клиническое значение полиморфизма генов цитокинов и гена гемохроматоза у больных хроническим гепатитом С (стр. 2 )

Нами было установлено, что нормальный генотип гена IL-1b -511 CC достоверно чаще выявлялся у больных ХГС, а гетерозиготный генотип – (-511 CT), наоборот, достоверно чаще в контрольной группе. Кроме того, нормальный генотип гена HFE – HFE 63 HH – выявлялся достоверно чаще в контрольной группе, чем у больных ХГС. Распространенность генотипов и аллелей остальных исследованных полиморфизмов не различалась между группами.

Таким образом, можно предполагать, что носительство генотипа гена IL-1b -511 CC, ассоциированного с низкой продукцией провоспалительного цитокина IL-1b, является предрасполагающим фактором к хронизации HCV инфекции, тогда как наличие высокопродуцирующего генотипа – (-511 CT), наоборот, к самопроизвольному выздоровлению. Преобладание среди больных ХГС гетерозигот по HFE H63D полиморфизму, по-видимому, связано с большим удельным весом в исследовании больных с выраженной стадией фиброза.

2. Анализ взаимосвязи между клинико-лабораторными показателями и носительством вариантных аллелей исследованных генов у больных ХГС.

При монофакторном анализе нами не было установлено взаимосвязи между носительством больными ХГС определенных аллельных вариантов исследованных генов и повышением сывороточной активности «печеночных» ферментов. При многофакторном анализе было выявлено, что независимыми предикторами повышения уровня АЛТ, наряду с наличием стадии ЦП и степенью повышения уровня сывороточного железа, были генотип гена HFE – 63 HD и DD, а также генотип гена TGF-b1 +915 GC (табл. 2).

Таблица 2. Взаимосвязь между клинико-лабораторными показателями и аллельными вариантами исследованных генов.

Клинико-лабораторные показатели	Монофакторный анализ	Многофакторный анализ
Повышение уровня АЛТ	‘-‘*	Более тяжелая стадия поражения печени (p<0,001); более высокий уровень сывороточного железа (p=0,014); HFE 63 HD и DD генотипы (p<0,001); TGF-1b +915 GC генотип (p<0,001)
Уровень ГГТ	‘-‘*	Уровень сывороточного железа (p=0,016); стадия поражения печени (p=0,011); уровень АЛТ (p=0,051)
Повышенный уровень сывороточного железа	HFE CY 282 генотип (p=0,1)	Мужской пол (p<0,01); высокий индекс массы тела (p=0,01); HFE 282 CY генотип (p=0,03)
Уровень гликемии	TGF-b1 +915 GC генотип (p<0,01)	Индекс массы тела (p=0,005); TGF-b1 +915 GC генотип (p=0,003)
Индекс массы тела (ИМТ)	IL-1b -511 СТ генотип (p=0,03)	Возраст (p=0,001); стадия поражения печени (p=0,02); IL-1b -511 СТ (p=0,03)
Наличие смешанной криоглобулинемии	IL-10 -1082 GG генотип (p=0,03)	Длительность заболевания (p<0,001), стадия поражения печени (p<0,001); ILGG генотип (p=0,037)

Примечание: * ‘-‘ взаимосвязь не выявлена.

При проведении монофакторного анализа нами была выявлена тенденция (p=0,01) к более высокому уровню ферремии у больных ХГС гетерозигот по мутации гена гемохроматоза C282Y (282 CY генотип; 158,4 мкг/дл) в сравнении с больными, являющимися носителями нормального генотипа (282 CC генотип; 131 мкг/дл) (рис. 1), что согласуется с данными литературы (Bonkovsky H. L., Obando J. V., 1999).

 

Рис. 1. Среднее значение уровня железа у больных ХГС с нормальным (282 СС) и гетерозиготным (282 CY) генотипами по С282Y полиморфизму гена HFE.

Рис. 2. Средний уровень гликемии у больных ХГС с нормальным (+915 GG) и вариантным (+915 GС) генотипами полиморфизма гена TGF-b1.

При многофакторном анализе гетерозиготное носительство мутации гена гемохроматоза C282Y было независимым предиктором повышенного уровня сывороточного железа (p=0,03) наряду с такими параметрами как повышенный индекс массы тела (ИМТ; p=0,01) и мужской пол (p<0,01) (табл. 2).

В нашем исследовании впервые было установлено, что гетерозиготы по полиморфизму гена TGF-b1 +915 G/C имели достоверно более высокий уровень глюкозы (медиана – 116,9 мг/дл), чем больные с наиболее распространенным генотипом по данному полиморфизму (медиана – 101,7 мг/дл). При многофакторном анализе с включением в статистическую модель всех полиморфизмов, пола, возраста, стадии поражения, длительности заболевания и ИМТ, независимыми предикторами повышенного уровня глюкозы являлись полиморфизм гена TGF-b1 (p=0,003) и повышенный ИМТ (p=0,005) (табл. 2).

Анализ ассоциации между ИМТ и носительством определенных полиморфных маркеров выявил достоверные отличия для полиморфизма гена IL-

1b -511 С/Т. У больных ХГС с -511 CT генотипом среднее значение ИМТ (26,2 кг/м2) было достоверно выше, чем у больных с -511 СС генотипом (24,3 кг/м2; p=0,02) (рис. 3).

Рис. 3. Среднее значение индекса массы тела у больных ХГС с –511 СС и –511 CT генотипами полиморфизма гена IL-1b.

Рис. 4 Частота смешанной криоглобулинемии у больных ХГС с генотипом гена ILGG в сравнении с больными ХГС с -1082 GA и -1082 AA генотипами

При проведении многофакторного анализа полиморфизм гена IL-1b -511 C/T по-прежнему был независимым предиктором более высокого ИМТ (табл. 2).

Нами также впервые было установлено, что носительство высокопродуцирующего генотипа гена ILGG ассоциировано с развитием СКГ (рис. 4), которая при наличии у больных ХГС данного генотипа, выявлялась в 1,6 раза чаще (p=0,03) в сравнении с больными, имеющими другие генотипы данного полиморфизма (генотипы -1082 GA и -1082 AA). Выявленная взаимосвязь оставалась достоверной при проведении многофакторного анализа (p=0,037; табл. 2) по результатам которого, независимыми клиническими факторами, ассоциированными с развитием СКГ, были длительность заболевания (p<0,001) и более тяжелая стадия поражения печени (p<0,001).

Таким образом, нами было показано, что генетический полиморфизм является одним из факторов, определяющих особенности клинико-лабораторной картины ХГС. При многофакторном анализе выявлены ассоциации между увеличенной активностью АЛТ и носительством вариантных аллелей гена HFE – генотип 63 HD и 63 DD, и гена TGF-b1 – генотип +915 GC. Также установлена связь между повышенным индексом массы тела и носительством генотипа гена IL-1b -511 CT; повышенным уровнем гликемии и генотипом гена TGF-b1 +915 GC; повышенным уровнем ферремии и носительством мутантного генотипа гена HFE – 282 CY. Кроме того, выявлено, что наряду с длительностью заболевания (p<0,001) и более тяжелой стадией фиброза печени (p<0,001), независимым фактором риска развития СКГ являлся высокопродуцирующий генотип гена ILGG.

3. Анализ взаимосвязи между прогрессированием фиброза печени и носительством вариантных аллелей исследованных генов у больных ХГС.

Для определения взаимосвязи между генетическим полиморфизмом и прогрессированием фиброза печени нами были сформированы 2 группы больных ХГС. У 37 больных, составивших I группу, было отмечено медленно прогрессирующее течение заболевания (больные с 1 стадией фиброза при длительности заболевания не менее 10 лет). У 83 – прогрессирующее течение заболевания (больные со 2-4 стадиями фиброза независимо от давности инфицирования). Средний темп прогрессирования фиброза печени составил 0,06 ед. фиброза в год у больных I группы и 0,22 ед. фиброза в год у больных II группы (различия в темпе прогрессирования фиброза между группами статистически высоко достоверны - p<0,01).

Больные с прогрессирующим типом поражения печени были старше, инфицированы в более позднем возрасте и имели более высокий уровень аланиновой аминотрансферазы, чем больные с медленным прогрессированием фиброза, т. е. группы отличались по известным факторам риска быстрого развития ЦП (рис. 5).

Рис. 5. Клинико-лабораторная характеристика больных ХГС с разным темпом прогрессирования фиброза печени.

В тоже время, при проведении генетического анализа нами было установлено, что генотип гена IL-1b -511 СС, ассоциированный с низкой продукцией провоспалительного цитокина IL-1b, в 1,3 раза чаще выявлялся у больных с медленным прогрессированием фиброза (p=0,067) (табл. 3).

Таблица 3. Частота генотипов и аллелей полиморфных маркеров исследованных генов в у больных с медленным и быстрым темпом прогрессирования фиброза.

Полиморфизм	Генотип/ аллель	Медленно прогрессирующее течение ХГС n (%)	Прогрессирующее течение ХГС n (%)	p
IL-1b -511 C/T	Генотип СС	24 (64,9)	40 (48,2)	0,067
Генотип СТ	11 (29,7)	35 (42,2)	0,137
Генотип ТТ	2 (5,4)	8 (9,6)	нд
Аллель Т	15 (20,3)	51 (30,7)	0,062
TNF -238 G/A	Генотип GG	36 (97,3)	81 (97,6)	нд
Генотип GA	1 (2,7)	2 (2,4)	нд
Генотип AA	0	0	нд
Аллель A	1 (1,3)	2 (1,3)	нд
IL-10 -1082 G/A	Генотип GG	17 (46,0)	33 (39,8)	нд
Генотип GA	11 (29,7)	32 (38,6)	нд
Генотип AA	9 (24,3)	18 (21,7)	нд
Аллель A	29 (39,2)	68 (41,0)	нд
IL-6 -174 G/C	Генотип GG	20 (54,1)	18 (21,7)	<0,01
Генотип GC	14 (37,8)	50 (60,2)	0,02
Генотип CC	3 (8,1)	15 (18,1)	0,126
Аллель C	20 (27,0)	80 (48,2)	<0,01
TGF-b1 +915 G/C	Генотип GG	35 (94,6)	68 (81,9)	0,05
Генотип GC	2 (5,4)	14 (16,9)	нд
Генотип CC	0 (0)	1 (1,2)	нд
Аллель C	2 (2,7)	16 (9,6)	0,05
HFE H63D	Генотип HH	29 (78,4)	50 (60,2)	0,04
Генотип HD	8 (21,6)	27 (32,5)	0,16
Генотип DD	0 (0)	6 (7,2)	нд
Аллель D	8 (10,8)	39 (23,5)	0,01
HFE C282Y	Генотип CC	33 (91,9)	79 (95,4)	нд
Генотип CY	3 (8,1)	4 (4,8)	нд
Генотип YY	(0)	0	нд
Аллель Y	3 (4,1)	4 (2,4)	нд

Примечание: нд – статистически недостоверно.

Гетерозиготный (-511 СТ) и гомозиготный (-511 ТТ) генотипы, наоборот, в 1,4 и 1,8 раз чаще выявлялись у больных с прогрессирующим типом поражения печени, но различия не были достоверными. Можно предполагать, что носительство аллеля -511 Т, взаимосвязанного с повышенным уровнем IL-1b в сыворотке крови, ассоциировано с более быстрым прогрессированием поражения печени у больных ХГС.

Генотип гена IL-6 -174 GG в 2,5 раза чаще выявлялся у больных с благоприятным течением ХГС (p<0,01). Гетерозиготный генотип -174 GC, наоборот, достоверно чаще встречался у больных ХГС с прогрессирующим типом поражения печени (p=0,02). Генотип -174 GC, как и гетерозиготный генотип, чаще встречался у больных с неблагоприятным течением ХГС, однако, различия не достигали статистической значимости (p=0,126), по-видимому, вследствие малого количества больных в I группе. Таким образом, нами впервые было установлено, что носительство больными ХГС аллеля гена IL-6 -174 С, ассоциировано c прогрессированием фиброза печени.

Генотипы полиморфизма гена TGF-b1, несущие вариантный аллель (+915 C), чаще выявлялись у больных ХГС с прогрессирующим вариантом поражения печени (p=0,05). Таким образом, по нашим данным, соответствующим представленным в литературе (Gewaltig J., Mangasser-Stephan K., 2002; Wang H., Mengsteab S., 2005), носительство этого аллеля ассоциировано с неблагоприятным течением заболевания.

Аналогичные данные были получены в отношении гетеро - и гомозиготного носительства вариантного аллеля гена гемохроматоза H63D. Пациенты, имеющие HFE 63D аллель гена гемохроматоза, достоверно чаще встречались среди больных ХГС с прогрессирующим типом течения заболевания (p=0,01). Таким образом, носительство аллеля 63D, взаимосвязанного с повышенным всасыванием железа в кишечнике, ассоциировано с быстрым прогрессированием фиброза печени, что соответствует данным литературы (Bonkovsky HL, Troy N., 2002; Tung B. Y., Emond M. J., 2003).

В отношении остальных исследованных полиморфизмов нами не было выявлено статистически значимых различий между сравниваемыми группами больных (табл. 3).

Таким образом, на основании данных, полученных при монофакторном анализе, нами были определены «профибротические» генотипы (аллели), достоверно, либо на уровне тенденции ассоциированные с прогрессирующим течением ХГС, – генотипы, имеющие аллель гена IL-1b -511 T (-511 CT и -511 TT); генотипы, имеющие аллель гена IL-6 -174 C (-174 GC и -174 СС); генотипы, имеющие аллель гена TGF-b1 +915 C (+915 GC и +915 СС); генотипы, имеющие аллель гена HFE 63 D (63 HD и DD). Наоборот, с благоприятным течением заболевания были ассоциированы «протективные» генотипы – генотип гена IL-1b -511 СС и генотип гена IL-6 -174 GG.

При проведении многофакторного анализа нами было установлено, что вместе с такими клиническими факторами риска прогрессирующего течения ХГС как поздний возраст инфицирования (p<0,01), большая длительность заболевания (p=0,01), более высокий индекс массы тела (p<0,01), с неблагоприятным течением был ассоциирован полиморфизм гена IL-6 -174 G/C (для генотипа гена IL-6 -174 GC p=0,05; для генотипа гена IL-6 -174 CC p<0,01). Остальные исследованные полиморфные маркеры, ассоциированные с темпом прогрессирования фиброза при монофакторном анализе, не являлись независимыми предикторами прогноза ХГС при проведении многофакторного анализа. Отсутствие независимого влияния большинства из исследованных полиморфных маркеров на темп прогрессирования фиброза печени не отрицает их значение в фиброгенезе, а лишь показывает наличие ассоциации этих факторов с клиническими параметрами, уже включенными в многофакторную модель.

Нами было установлено, что из исследованных полиморфных маркеров два были ассоциированы с благоприятным течением ХГС и восемь с неблагоприятным. Учитывая многофакторный патогенез ХГС, можно предполагать, что выявленные «профибротические» генотипы будут иметь суммарный однонаправленный негативный эффект на течение заболевания, а «протективные», напротив, защищать от быстрого прогрессирования фиброза.

4. Использование полиморфных маркеров исследованных генов для определения прогноза ХГС.

Установленная нами ассоциация между течением ХГС и носительством определенных полиморфных маркеров исследованных генов позволила нам предпринять исследование по использованию ее для определения прогноза заболевания. Генетический профиль больного ХГС может содержать как «протективные», так и «профибротические» генотипы, вследствие чего прогноз заболевания будет определяться их комбинацией, в которой могут доминировать «протективные» или «профибротические» генотипы. С целью упрощения суммирования «профибротических» и «протективных» генотипов у каждого больного нами произведено кодирование с присвоением генотипам с 1 профибротическим аллелем «-1» балла, с двумя профибротическими аллелями «-2» баллов и т. д. «Протективным» генотипам присваивался «+1» балл при наличии одного протективного генотипа и «+2» балла в случае носительства двух протективных генотипов, и затем производилось суммирование генетического профиля у каждого больного (табл.4).

Таблица 4.

Балльная оценка генетического профиля у больных с медленным и быстрым прогрессированием фиброза