Антигены возбудителей в смывах из носоглотки определяли при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР), определяя РНК или ДНК вирусов. Этиологию заболеваний ‑ иммунофлюоресцентным методом (ИФ), определяя антигены возбудителей респираторных инфекций в эпителиальных клетках слизистой носа с использованием стандартных препаратов иммуноглобулинов флюоресцирующих сухих (ИГФС) для ранней диагностики известных возбудителей гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций ( по производству диагностических препаратов» при НИИ гриппа).
Выделение вирусов в клеточных культурах и куриных эмбрионах c их идентификацией проводили в лаборатории эволюционной изменчивости вирусов гриппа, руководимой д. б.н. , в соответствии с методическими рекомендациями ( и др., 2006).
Серологические методы исследования выполнялись в лаборатории биотехнологии диагностических препаратов НИИ гриппа (руководитель ‑ д. м.н., профессор ).
Применялись реакция торможения гемагглютинации (РТГА), иммуноферментный анализ (ИФА) с использованием набора антигенов вирусов гриппа А и В, парагриппа, адено-, РС-, коронавирусов, микоплазмы пневмонии. В РТГА использовали диагностикумы вирусов гриппа в эпидсезоны: г. г. ‑ А/Новая Каледония/20/99 (H1N1), А/Висконсин/67/2005 (H3N2), В/Малайзия/2506/2004; гг. ‑ A/Соломоновы острова/3/2006 (H1N1), A/Висконсин/67/2005 (H3N2), B/Малайзия/2506/2004, B/Флорида/04/06; гг. — A/Брисбен/59/2007 (H1N1), A/Брисбен /10/2007 (H3N2), B/Флорида/4/2006, B/Брисбен/60/08; г. ‑ А/Калифорния/07/09 (H1N1)pdm, А/Висконсин/15/09 (H3N2), В/Брисбен/33/08, В/Санкт-Петербург/40/09. Иммуногенность гриппозных вакцин оценивали по критериям, представленным в таблицах 3, 4.
Таблица 3 ‑ Критерии иммуногенности для взрослых, утвержденные 28.09.2003 г. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (МУ 3.3.2.1758
Критерии иммуногенности | Вакцинный штамм вируса гриппа | |
Тип А | Тип В | |
Величина титра антител до вакцинации | ≤1:20 | ≤1:20 |
Вакцина должна вызывать прирост гомологичных антител в крови в 4 и более раз после однократного введения вакцины | 70% и более | 60% и более |
Таблица 4 ‑ Критерии иммуногенности вакцин против гриппа человека по международным требованиям (СРМР ЕМЕА, СРМР/ЕWР/1045/01)
Критерии иммуногенности | Возрастная группа | |
18-60 лет | старше 60 лет | |
Фактор сероконверсии (кратность прироста) (повышение средних геометрических титров антител на 21 день по сравнению с исходным уровнем), выражен в кратности увеличения | Более 2,5 | Более 2,0 |
Уровень сероконверсии (отношение количества добровольцев, у которых титр антител повысился более чем в 4 раза по сравнению с исходным уровнем, и у которых на 21 день титр не менее 1: 40) | Более 40% | Более 30% |
Уровень серопротекции (процент лиц, у которых титр антител более 1:40 на 21 день после вакцинации) | Более 70% | Более 60% |
Исследование и оценка проявлений эпидемического процесса на изучаемых территориях проводились по данным еженедельного мониторинга с анализом интенсивности и структуры эпидемического процесса в понедельной динамике.
Статистическая обработка: при анализе полученных результатов определяли средние величины, стандартное отклонение, доверительные интервалы. Оценку статистической достоверности различий проводили при помощи компьютерной программы GraphPad Prism (версия 5,0) с использованием с использованием теста t-распределения Стьюдента для выборок с нормальным распределением, или непараметрических критериев Манна-Уитни, Уилкоксона. Различия считались достоверными при р<0,05. (, 2007; Гланц, 1998).
Результаты исследования и их обсуждение
В данной работе впервые применена отечественная инактивированная расщепленная трехкомпонентная виросомальная гриппозная вакцина Ультрикс с целью определения ее безопасности и иммуногенности у здоровых детей и взрослых добровольцев.
На первом этапе исследования под наблюдением находилось 150 человек, клинически здоровых добровольцев в возрасте от 18 до 60 лет (средний возраст 33,3 ± 0,04 года). Их рандоминизировали в три группы по 50 человек в каждой, и вакцинировали внутримышечно однократно препаратами Ультрикс с антигенной нагрузкой 35 мкг и 45 мкг гемагглютинина и препаратом сравнения Ваксигрип с антигенной нагрузкой 45 мкг гемагглютинина. Отсутствие местных реакций на их введение в течение 7 дней после вакцинации свидетельствовало об ареактогенности изучаемых препаратов. Системные реакции имели слабую степень выраженности. В группе лиц, вакцинированных препаратом Ультрикс 45 мкг, отмечено 12% таких реакций, в группе Ультрикс 35 мкг - 8% и Ваксигрип - 8%, (p>0,05). Установлена безопасность применяемых вакцин. Оценка показателей клинического и биохимического анализов крови, клинического анализа мочи выявила, что у наблюдаемых во всех группах до проведения вакцинации, и, что наиболее важно, при повторных исследованиях на 7-й и 21-й дни не отмечено значимых изменений, данные показатели остались в пределах нормальных значений. Таким образом, не было выявлено побочного действия от применения вакцин в стандартных регламентированных гематологических и биохимических тестах.
Уровень IgЕ при первом обследовании превышал нормальные значения: в группе привитых вакциной Ультрикс 35 мкг (первая группа) ‑ в 28,0% случаев, Ультрикс 45 мкг (вторая группа) ‑ в 14,0% , Ваксигрип (третья группа) ‑ в 16,0% случаев. Об отсутствии аллергизирующего воздействия изучаемых вакцин свидетельствовало содержание IgЕ в сыворотках крови в пределах нормальных значений до и после их применения.
Иммуногенную активность вакцин оценивали при анализе парных сывороток крови в РТГА, взятых до и через 21 день после иммунизации. Выявлены следующие показатели иммуногенности вакцин у привитых вакциной Ультрикс 35 мкг: четырехкратные сероконверсии к вирусу гриппа А(Н1N1) составили 94,0%, кратность прироста антител 18,1, уровень серопротекции 94,0%. К вирусу А(Н3N2) ‑ 86,0% четырехкратных конверсий, кратность прироста 8,6 и уровень серопротекции 90,0%; к вирусу типа В – четырехкратные сероконверсии 90,0%, кратность прироста ‑ 10,4 и уровень серопротекции 78,0% соответственно. У добровольцев, привитых вакциной Ультрикс 45 мкг, уровень сероконверсий к вирусам А(Н1N1), А(Н3N2) и В существенно не отличался от аналогичного показателя у привитых вакциной Ультрикс 35 мкг и составил соответственно 94,0%, 86,0% и 90,0% (рисунок 3).
Рисунок 3. Уровень сероконверсии вакцин Ультрикс 35 мкг, 45 мкг и Ваксигрип у добровольцев 18-60 лет (%)
Фактор сероконверсии составил соответственно 19,4, 9,4 и 6,9. Уровень серопротекции после вакцинации препаратом Ультрикс 45 мкг к этим вирусам был равен 86,0%, 90,0% и 78,0% соответственно. Уровень сероконверсий у привитых препаратом Ваксигрип к вирусам А(Н1N1), А(Н3N2) и В ‑ 98,0%, 94,0% и 88,0% с, уровень серопротекции – 100,0, 94,0% и 86,0%, фактор сероконверсии – 26,7, 9,7 и 14,7 соответственно (таблица 5).
Таблица 5 ‑ Иммуногенная активность гриппозных вакцин Ультрикс 45 мкг и 35 мкг, вакцины сравнения Ваксигрип
Антиген | Уровень сероконверсии Абс./% | СГТ антител | Фактор сероконверсии (1-2 сыв.) | Уровень серопротекции Абс./% (95% ДИ) | |
1-й день | 21-й день | ||||
Ультрикс-35 мкг n=50 | |||||
А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) | 47/94,0 | 18,7 | 338,2* | 18,1 | 94,0 |
А/Висконсин/67/2005 (H3N2) | 43/86,0 | 11,5 | 98,7* | 8,6 | 90,0 |
В/Малайзия/2506/2004 | 45/90,0 | 7,7 | 80,0* | 10,4 | 78,0 |
Ультрикс-45 мкг n=50 | |||||
А/Новая Каледония/20/99 | 47/94,0 | 11,3 | 220,1* | 19,4 | 86,0 |
А/Висконсин/67/2005 (H3N2) | 45/90,0 | 15,8 | 149,3* | 9,4 | 90,0 |
В/Малайзия/2506/2004 | 43/86,0 | 8,2 | 56,6* | 6,9 | 78,0 |
Ваксигрип n=50 | |||||
А/Новая Каледония/20/99 (H1N1) | 49/98,0 | 13,7 | 367,6* | 26,7 | 100,0 |
А/Висконсин/67/2005 (H3N2) | 47/94,0 | 13,9 | 135,5* | 9,7 | 94,0 |
В/Малайзия/2506/2004 | 44/88,0 | 8,2 | 121,2* | 14,7 | 86,0 |
Примечание: n – число добровольцев; * p<0,05 – различия достоверны по сравнению с исходными данными.
Таким образом, было показано, что препараты Ультрикс 35 мкг и Ультрикс 45 мкг по критериям иммуногенности не уступают препарату сравнения вакцине Ваксигрип и полностью соответствуют требованиям, предъявляемым к инактивированным гриппозным сезонным вакцинам Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (МУ 3.3.2.1758-03) и международным требованиям.
Для дальнейшего исследования авторами вакцинного препарата Ультрикс был выбран вариант с антигенной нагрузкой 45 мкг, аналогичной препарату сравнения Ваксигрип. Такая доза, как считается, позволяет повысить уровень защиты привитых, хотя имеются данные, что доза антигена до 10 мкг уже обеспечивает уровень защиты у 75% привитых(Palache A. M.et al., 1993).
В настоящее время значимость иммунизации пожилых людей признана во всех странах, где проводится противогриппозная вакцинация, но данные по ее эффективности противоречивы и требуют дальнейшего изучения (Fülöp T. Jr. et al, 1999; Lang P. O. et al., 2012). Качественно проведенная вакцинация позволяет существенно сократить бремя болезни и избежать осложнений у пожилых людей (Hoshi S. et al., 2007; Baguelin M. et al., 2012).
Вторым этапом исследования являлась оценка возможности использования вакцины Ультрикс 45 мкг для специфической профилактики гриппа у пожилых людей в возрасте 60 лет и старше. В этой части работы общая численность наблюдаемых составила 40 человек рандомизированных на 2 группы по 20 человек в каждой: 1-я группа вакцинирована препаратом Ультрикс 45 мкг, 2-я группа получила препарат сравнения Ваксигрип. Средний возраст наблюдаемых составил года 67,7+3.1 лет. По данным предварительного обследования, исходные титры антител к вирусам A(H1N1), A (H3N2) и B у наблюдаемых составили ≤ 1∕20. Оценка реактогенных свойств вакцины показала отсутствие местных и общих реакций у добровольцев в первые 20 минут после вакцинации. В последующие 7 дней в группе привитых вакциной Ультрикс 45 мкг общее количество местных реакций наблюдали в 5 случаях (25%,), а среди добровольцев, привитых вакциной Ваксигрип в 3 случаях (15%). Количество слабых системных реакций отмечено у одинакового числа наблюдаемых в обеих группах – 3 человека (15%). При оценке безопасности препаратов отмечено, что средние показатели общего анализа крови и общего анализа мочи, средние значения биохимических показателей крови у получивших вакцину Ультрикс 45 мкг и в группе сравнения на разных сроках обследования претерпевали незначительные изменения, оставаясь в пределах нормы. Исходный уровень общего IgE у наблюдаемых обеих групп до вакцинации и на 7-й день после вакцинации оставался в пределах нормальных показателей, подтверждая отсутствие аллергизирующего воздействия изучаемых вакцин.
Иммуногенная активность вакцин оценена в исследовании парных сывороток крови наблюдаемых в РТГА. У привитых вакциной Ультрикс 45 мкг четырехкратные сероконверсии к вирусу гриппа А(Н1N1) выявлены в 80,0%, установленная кратность прироста антител составила 9,5. Уровень серопротекции составил 70,0%. К вирусу А(Н3N2) эти показатели имели значения 85,0%, 12,1 и 90,0% , к вирусу типа В – 65,0%, 28,3 и 50,0% соответственно. У привитых вакциной Ваксигрип, выявлены высокие показатели иммуногенной активности, однако они существенно не отличались от показателей иммуногенности вакцин Ультрикс 45 мкг. Уровень сероконверсий к вирусам А(Н1N1), А(Н3N2) и В составил 95,0%, 90,0% и 80,0%, уровень серопротекции – 95,0%, 90,0% и 80,0%, фактор сероконверсии – 21,9, 12,6 и 7,5 (таблица 6).
Результаты исследования продемонстрировали, что иммуногенность вакцины Ультрикс с антигенной нагрузкой 45 мкг гемагглютинина в возрастной группе старше 60 лет соответствует международным критериям по 2 показателям ‑ фактору сероконверсии и уровню сероконверсии, а по уровню серопротекции по отношению к вирусу гриппа В находятся на пороге рекомендуемого. Следует отметить, что применение вакцин с избыточным содержанием гемагглютинина, например 180 мкг (60 мкг каждого антигена), для применения у лиц старше 65 лет, не имеет преимущества перед вакцинами со стандартным содержанием гемагглютинина, что доказано при использовании инактивированной вакцины Fluzone high-dose (CDC MMWR, 2010).
Полученные результаты позволили рекомендовать к регистрации в РФ вакцину гриппозную инактивированную расщепленную, раствор для внутримышечного введения Ультрикс, с содержанием геммаглютинина 45 мкг (15мкг серотипа A(H1N1), 15мкг серотипа A(H3N2) и 15 мкг серотипа В). Вакцина была зарегистрирована 11.03.2008 г. № ЛСР-001419/08.
Таблица 6 ‑ Иммуногенная активность гриппозных вакцин Ультрикс 45 мкг и Ваксигрип у добровольцев возрастной группы старше 60 лет
Антиген | Уровень сероконверсии Абс./% (95% ДИ) | СГТ антител | Фактор сероконверсии (95% ДИ) | Уровень серопротекции Абс./% (95% ДИ) | |
1-й день | 21-й день | ||||
Ультрикс 45 мкг n=20 | |||||
А/Cоломоновы о-ва/03/06 (H1N1) | 16/80,0 | 6,4 | 60,6* | 9,5 | 14/70,0 |
А/Висконсин/67/05 (H3N2) | 17/85,0 | 10,0 | 121,1* | 12,1 | 18/90,0 |
В/Малайзия/2504/04 | 13/65,0 | 7,12 | 34,8* | 4,9 | 10/50,0 |
Ваксигрип n=20 | |||||
А/Cоломоновы о-ва/03/06 (H1N1) | 19/95,0 | 7,6 | 165,6* | 21,1 | 19/95,0 |
А/Висконсин/67/05 (H3N2) | 18/90,0 | 10,3 | 125,3* | 12,1 | 18/90,0 |
В/Малайзия/2504/04 | 16/80,0 | 9,0 | 44,3* | 4,29 | 16/80,0 |
Примечание: n – число добровольцев; * р<0,05 по отношению к 1-му дню исследования
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 |
