Протективные свойства новой гриппозной инактивированной виросомальной вакцины (стр. 1 )

На правах рукописи

 

Никоноров

Игорь Юрьевич

протективные свойства новой гриппозной инактивированной виросомальной вакцины

14.02.02 – эпидемиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург ‑ 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт гриппа» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Ерофеева Мариана Константиновна

Официальные оппоненты:

, доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное казенное военное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени » Министерства обороны Российской Федерации, профессор кафедры общей и военной эпидемиологии

, доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Северо-Западный государственный медицинский университет имени » Министерства здравоохранения Российской Федерации, профессор кафедры инфекционных болезней

Ведущая организация: Федеральное бюджетное государственное учреждение «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучию человека Российской Федерации

Защита диссертации состоится 21 июня 2013г. в 13-00 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций
Д 215.002.12 при Федеральном государственном казенном военном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Военно-медицинская академия имени " Министерства обороны Российской Федерации ( Санкт-Петербург, ).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени » МО РФ

Автореферат разослан « » мая 2013 года

Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук,
профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. До настоящего времени грипп остается одной из самых актуальных проблем здравоохранения многих стран мира (Mubareka S. et al., 2011). Ежегодно во время эпидемий гриппа в Европе, США, России и других странах болеет до 10% населения, а при возникновении пандемий число заболевших возрастает до 50% ( и др., 2007). В США за прошедшие три десятилетия ежегодное количество связанных с гриппом смертельных случаев колебалось от 3349 до 48614. ВОЗ экстраполировала эти данные на ежегодную вероятную заболеваемость гриппом в мире, которая составила до 1 миллиарда случаев, из которых от 3 до 5 миллионов – это тяжелая форма болезни, и до 500 тысяч ‑ летальные исходы заболевания (WHO, 2009).

Грипп характеризуется высокой степенью избыточной смертности людей, страдающих различными хроническими заболеваниями, прежде всего сердечно-сосудистой системы, органов дыхания, мочевыделительной системы, нарушениями обмена веществ, функции иммунной системы, в том числе в процессе лечения иммунодепрессантами, или при комбинации перечисленных патологий (Pierre-Olivier Lang et al., 2012). Опасность заболевания усугубляется тем, что вирус гриппа способен подавлять иммунные реакции организма и тем самым усиливать тяжесть хронических заболеваний. Этого можно избежать, вовремя защитив население или его отдельные группы с помощью специфической профилактики. Гриппозные вакцины, содержащие актуальные штаммы, вовремя и правильно примененные, способны защитить от заболевания гриппом свыше 80% привитых взрослых и детей, и предотвратить до 50% смертей лиц пожилого возраста в период эпидемий (Michiels B et al., 2011). Вакцинация – первична в стратегии профилактики гриппа (, 2007). Это стало очевидно при разработке мер специфической профилактики пандемического гриппа A(H5N1) и в пандемию гриппа A(H1N1) 2009 года. (Department of Health and Human Services, 2010; Food and Drug Administration, 2010).

В России, как и во всем мире, для специфической профилактики гриппа применяются в основном инактивированные вакцины и, в меньшей степени, живая гриппозная вакцина. Основные препараты – инактивированные полимер‑субъединичные вакцины, в состав которых входят поверхностные антигены (гемагглютинин и нейраминидаза) вирусов гриппа A(H1N1), A(H3N2), B и высокомолекулярный иммуноадъювант бромид азоксимера ( и др., 2010). Максимальный профилактический эффект применения данных препаратов достигается при полном соответствии их штаммового состава с циркулирующими в текущий эпидемический сезон вирусами гриппа. Получить профилактический эффект, в случае неполного штаммового совпадения, возможно при применении инактивированных вакцин расщепленного типа, имеющих в своем составе и поверхностные, и внутренние белки вирусов гриппа.

Степень разработанности исследования. До последнего времени в России были представлены вакцины расщепленного типа только зарубежного производства. Применение новых технологичных решений делает такие вакцины актуальными и современными ( и др., 2002; Barry J. M., 2009). В 2005 году в России разработана гриппозная инактивированная расщепленная виросомальная вакцина Ультрикс, в которой поверхностные и внутренние антигены собраны в вирусоподобные частицы, вызывающие оптимальный иммунный ответ (Huckriede A. et al., 2005). Особенность препарата - оригинальные условия разрушения вирионов вирусов гриппа детергентом β-октилгликозидом с последующей самосборкой поверхностных и внутренних антигенов в вирусоподобные частицы, близкие к естественной форме вирусов. Новая вакцина позволит расширить список отечественных препаратов для специфической профилактики гриппа, получить дополнительный объём вакцины в период развития пандемий и избежать этических проблем, связанных с их распределением (Emanuel E. J., et al., 2006).

Цель исследования - обоснование возможности применения новой отечественной расщепленной инактивированной гриппозной виросомальной вакцины Ультрикс в качестве средства специфической профилактики гриппа в системе эпидемиологического надзора.

Задачи исследования:

1.  Оценить переносимость, реактогенность, безопасность и иммуногенную активность вакцины Ультрикс 35 мкг и 45 мкг, в сравнении с вакциной Ваксигрип по клиническим, клинико-лабораторным показателям у взрослых от 18 лет и старше.

2.  Оценить переносимость, реактогенность, безопасность и иммуногенную активность вакцины Ультрикс 45 мкг, в сравнении с вакциной Ваксигрип у детей от 6 до 18 лет.

3.  Оценить переносимость, безопасность, иммуногенность и длительность сохранения специфического иммунитета вакцины Ультрикс 45 мкг в полевых условиях у взрослых от 18 до 60 лет.

Научная новизна. Впервые в условиях контролируемых наблюдений за детьми от 6 до 18 лет и добровольцами в возрасте от 18 до 60 лет и старше проведена оценка безопасности переносимости, иммуногенности и длительности сохранения специфического иммунитета новой отечественной расщепленной инактивированной гриппозной виросомальной вакцины Ультрикс.

Показано, что данная вакцина обладает хорошей переносимостью, безопасна, высоко иммуногенна и не уступает по данным показателям зарубежной коммерческой вакцине Ваксигрип, широко применяемой в практике здравоохранения. Специфический иммунитет после применения вакцины Ультрикс сохраняется на достаточно высоком уровне в течение 6 месяцев.

Практическая значимость работы. Результаты исследований явились основанием для регистрации вакцины Ультрикс в Российской Федерации в качестве средства специфической профилактики гриппа в рамках системы эпидемиологического надзора за гриппом (регистрационное удостоверение № ЛСР-001419/08 от 01.01.2001 с изменением от 01.01.2001 г.).

Положения, выносимые на защиту:

1.  Вакцины Ультрикс 35 мкг при иммунизации людей возрастных групп от 18 лет до 60 лет и Ультрикс 45 мкг при иммунизации людей возрастных групп от 18 лет до 60 лет и старше безопасны для применения, ареактогенны, обладают хорошей переносимостью, иммуногенная активность соответствует требованиям, предъявляемым к инактивированным гриппозным вакцинам.

2.  Вакцина Ультрикс 45 мкг при иммунизации детей от 6 лет до 18 лет безопасна, обладает низкой реактогенностью и хорошей переносимостью, иммуногенная активность соответствует требованиям, предъявляемым к инактивированным гриппозным вакцинам.

3.  Длительность сохранения гуморального иммунитета к вирусам гриппа после применения вакцины Ультрикс 45 мкг составляет не менее 6 месяцев.

Личный вклад автора. Автор проводил отбор добровольцев в соответствии с критериями включения и исключения, брал образцы для лабораторного исследования, осуществлял клинико-эпидемиологический мониторинг у изучаемого контингента взрослых и детей; выполнял часть исследований лабораторной диагностики вирусных инфекций и иммунного статуса, а также проводил анализ и статистическую обработку полученных результатов. Доля участия автора в накоплении, обобщении и анализе материала составляет около 80%. Все исследования выполнялись в соответствии с планом НИР лаборатории испытаний новых средств защиты от вирусных инфекций и Специализированной клиники (отделение экспериментальной терапии) ФБГУ НИИ гриппа МЗ при участии сотрудников лабораторий и отделения института. Все материалы, использованные в диссертационной работе, проанализированы и обобщены лично автором.

Степень достоверности и апробация результатов исследования.

Достоверность полученных результатов обусловлена репрезентативностью и достаточностью выборки пациентов, включенных в исследование, объемом проанализированного материала, адекватностью методов исследования. Методологические подходы, использованные в исследовании, корректны и современны. Лабораторные эксперименты осуществлялись на сертифицированном и проверенном оборудовании.

Результаты диссертационной работы доложены: на заседаниях Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 2008, 2009, 2010 гг., Санкт-Петербург; на семинарах для специалистов практического здравоохранения в комитете по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга, 2009 г.; на 3-й и 4-й городской научно-практической конференции «Грипп и другие воздушно-капельные инфекции: специфическая и неспецифическая профилактика и лечение», 2009, 2010 гг., Санкт-Петербург; на 5-й научно-практической конференции СПбМАПО «Грипп и другие воздушно-капельные инфекции: специфическая и неспецифическая профилактика и лечение», 2011 г., Санкт-Петербург; на III Городской научно-практической конференции «Грипп и другие респираторные инфекции в постпандемический период: алгоритмы профилактики, диагностики и лечения», 2012 г., Санкт-Петербург; на 7-й, 8-й, 10-й и 11-й Российско-Итальянской конференциях «Социально-значимые инфекции», 2009, 2011, 2012 гг., г. Великий Новгород, г. Калининград; на 2-м, 3-м, 4-м, 5-м Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням, 2010, 2011, 2012, 2013 гг., Москва; на конференции «Лиги здоровья нации», 2012 г., Санкт-Петербург.

Внедрение результатов работы. На основании результатов исследований разработана: фармакопейная статья предприятия (ФСП); инструкция по применению, утвержденная Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. Вакцина Ультрикс зарегистрирована в Российской Федерации в качестве средства специфической профилактики в системе эпидемиологического контроля над гриппом (регистрационное удостоверение № ЛСР-001419/08 от 01.01.2001 г. с изменением от 01.01.2001 г.). Результаты клинико-эпидемиологических исследований вакцины Ультрикс используются при чтении курса эпидемиологии и инфекционных болезней в Санкт-Петербургском государственном педиатрическом медицинском университете и на обучающих семинарах, проводимых на базе Национального Центра ВОЗ по гриппу при ФБГУ НИИ гриппа МЗ РФ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 20 научных работ, из них 4 в изданиях, рекомендуемых ВАК Минобрнауки РФ, 2 главы в Руководствах для врачей (в соавторстве).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах текста, включая 30 таблиц и 6 рисунков; состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, общего заключения, выводов, списка литературы, включающего 198 источников, из них 86 отечественных и 112 иностранных авторов, 6 приложений.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Исследования проводили в период с 2007 по 2011 гг. Для проведения исследований были получены следующие разрешения: Министерства Здравоохранения и Социального Развития РФ от 01.01.01г. № 59, от 01.01.01г. № 000 , от 01.01.01г. № 24, от 01.01.01г. № 000, одобренные Комитетом по этике при Федеральном органе контроля качества лекарственных средств и локальным этическим комитетом ФГБУ НИИ гриппа Минздравсоцразвития РФ.

Объекты наблюдения. Общее число наблюдаемых составило 1286 человек (таблица 1). Включения добровольцев в исследование определяли следующие критерии:

‑ для лиц в возрасте от 18 до 60 лет – клиническое здоровье, письменное информированное согласие, требуемый иммунный статус ‑ величина титра антител ≤ 1:20, по данным РТГА к соответствующему антигену вирусов гриппа А(H1N1), A(H3N2) и типа В;

‑ для лиц от 60 лет и старше ‑ стабильные показатели основных функций жизнедеятельности, письменное информированное согласие, способность понимать и выполнять запланированные процедуры исследования, требуемый иммунный статус ‑ величина титра антител ≤ 1:20, по данным РТГА, к соответствующему антигену вирусов гриппа А(H1N1), A(H3N2) и типа В;

‑ для детей в возрасте от 6 до 18 лет ‑ клиническое здоровье, письменное информированное согласие законного представителя ребенка, способность законного представителя ребенка понимать и выполнять запланированные процедуры исследования, требуемый иммунный статус ‑ величина титра антител ≤ 1:40, по данным РТГА, к соответствующему антигену вирусов гриппа А(H1N1), A(H3N2) и типа В.

Таблица 1 ‑ Объекты наблюдения и материалы проведенного исследования

№ п/п	Исследования по оценке реактогенности, безопасности и иммуногенности вакцин	Возрастная группа	Период проведения (день, месяц, год)	Количество дней наблюдения	Методы исследования
Клинико-эпидемио-логические	Лабораторные
Серологические	Гематологические	Биохимические	Вирусологические/ молекулярно-биологические
1	Ультрикс 35 мкг Ультрикс 45 мкг Ваксигрип	18 - 60	05.03.2007-01.06.2007	21	150	300	450	450	-
2	Ультрикс 35 мкг Ультрикс 45 мкг	От 60 лет и старше	22.11.2007-27.12.2008	21	40	80	120	120	-
1лет	04.12.2009-20.12.2010	21	36	72	108	108	-
лет	03.12.2010-20.12.2011	21	42	84	120	120	-
3	Ультрикс 45 мкг (длительность сохранения гуморального иммунитета)	18 – 60 лет	01.11.2007-01.05.2008	180	1018	385	300	300	98
4	Итого	-	-	-	1286	917	1098	1098	98

Критериями исключения для лиц всех возрастных групп служили: аллергические реакции на куриный белок или предшествовавшую гриппозную прививку, бронхиальная астма, хронические заболевания легких, хронический ринит, иммунодефицитное состояние (первичное), иммуносупрессия, острые инфекционные и неинфекционные заболевания, обострение хронических заболеваний, наличие в анамнезе лейкоза, рака или положительной реакции на ВИЧ-инфекцию, гепатита В и С, получавшие препараты иммуноглобулина или переливание крови в течение последних трех месяцев до начала исследования, предшествующие реакции на введение гриппозных вакцин. Дополнительным критерием исключения для лиц возрастной группы от 18 до 60 лет являлись беременность или период лактации; для лиц в возрасте от 60 лет и старше ‑ слабоумие или терапия от слабоумия.

Материалом для анализа послужили специально разработанные индивидуальные регистрационные карты (ИРК) для наблюдений за лицами, получавшими препараты. В ИРК вносились все данные клинических наблюдений и результаты лабораторных и инструментальных методов исследования, данные по заболеваемости гриппом и ОРВИ на территориях проводения исследований.

Материалы для лабораторного исследования: мазки со слизистой носовых ходов, обработанные по стандартным методикам для выявления антигенов возбудителей респираторного заболевания иммунофлюоресцентным методом (ИФМ) и для определения нуклеиновых кислот (РНК, ДНК) респираторных вирусов с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР); парные сыворотки крови для серологических и иммунологических исследований; периферическая кровь (из вены) для клинического и биохимического анализа крови, определения уровня IgE; моча для клинического анализа.

Изучаемые и применяемые в исследовании вакцинные препараты.

- Ультрикс - вакцина для профилактики гриппа инактивированная расщепленная, виросомальная (раствор для однократного внутримышечного введения). Производитель: «Форт» ООО, Россия (рисунок 1). В исследовании применялись препараты с различным содержанием гемагглютинина в прививочной дозе (0,5 мл):

- Ультрикс 35 мкг - содержание гемагглютинина в препарате 35 мкг/доза - по 10 мкг гемагглютинина (HA) штаммов вирусов гриппа подтипов А(H1N1) и A(H3N2) и 15 мкг НА типа В, форма выпуска: ампулы;

- Ультрикс 45 мкг - содержание гемагглютинина в препарате 45 мкг/доза - по 15 мкг гемагглютинина (HA) штаммов вирусов гриппа подтипов А(H1N1) и A(H3N2) и 15 мкг НА типа В, форма выпуска: ампулы.

- Ваксигрип - вакцина для профилактики гриппа инактивированная расщепленная для однократного внутримышечного или подкожного введения. Содержание гемагглютинина в препарате 45 мкг/доза - по 15 мкг гемагглютинина штаммов вирусов гриппа подтипов А (H1N1) и (H3N2) и типа В. Регистрационное удостоверение № 000/01-2002, форма выпуска: ампулы. Производитель: «Санофи Пастер», Франция (рисунок 2).

Рисунок 1. Электронная микроскопия - вакцина Ультрикс

Рисунок 2. Электронная микроскопия - вакцина Ваксигрип (канд. биол. наук )

В изучаемые сезоны в состав исследуемых вакцин входили следующие штаммы, рекомендованные ВОЗ: гг. ‑ А/Новая/Каледония/20/99 (H1N1), А/Висконсин/67/2005 (H3N2), В/Малайзия/2506/2004; гг. ‑ A/Соломоновы острова/3/2006 (H1N1), A/Висконсин/67/2005 (H3N2), B/Малайзия/2506/2004й: гг. ‑ A/Калифорния/7/2009 (H1N1), A/Перт/16/2009 (H3N2), B/Брисбен/60/2008.

Основные методы исследования. Клинические методы: осмотры наблюдаемых с оценкой и регистрацией в ИРК всех клинических симптомов, данных осмотра врачей - специалистов (терапевта, оториноларинголога), а также результатов лабораторных и инструментальных исследований пациентов. Лабораторные методы перечислены в таблице 2.

Таблица 2 ‑ Лабораторные методы исследования

Наименование исследования	Цель исследования	Материал	Используемый метод
Вирусологические	Определение антигенов	Мазки из носовых ходов	ИФ, ПЦР
Выделение вируса	Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и куриных эмбрионах
Серологические	Определение антител	Сыворотка крови	ИФА, РТГА
Гематологические	Определение показателей крови	Цельная кровь	Клинический анализ
Биохимический	Определение биохимических показателей крови	Сыворотка крови	Биохимический анализ
Иммунологический	IgE	Сыворотка крови	ИФА
Органолептические, физико-химические, биохимические, микроскопические	Определение показателей мочи	моча	Клинический анализ

Безопасность вакцин оценивали до вакцинации и в течение динамического наблюдения по следующим показателям: концентрацию иммуноглобулинов IgЕ в сыворотке крови; общий анализ крови (гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, СОЭ, формула крови); биохимический анализ крови (АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза, билирубин, общий белок, мочевина, креатинин, С-реактивный белок); общий анализ мочи.