Особенности состояния кроветворения у больных раком молочной железы разных возрастных групп (стр. 3 )

Рис. 1 Цитохимические показатели лимфоцитов

периферической крови у больных РМЖ до лечения

Примечания: больные 1-ой группы (1, 5, 9)

больные 2-ой группы (2, 6, 10)

здоровые люди (3, 7, 11)

Таким образом, цитохимические показатели лимфоцитов практически у всех больных независимо от возраста до лечения оказались измененными, что свидетельствовало о нарушении обменных процессов в клетках и соответственно их функциональной недостаточности. Наряду с подсчетом МДК и изучением цитохимических параметров лимфоцитов периферической крови до лечения у больных РМЖ различных возрастных групп, были проведены морфоцитометрические исследования этих клеток с использованием компьютерных программ и автоматического отечественного анализатора АСПЕК. После проведения корреляционного анализа, оценивающего степень взаимосвязи между признаками, оказались наиболее информативными такие показатели как площадь клетки (Scell) в квадратных микронах (кв. мкм), площадь ядра (Snuk) в квадратных микронах (кв. мкм), цитоплазмо-ядерное соотношение (ECN) в условных единицах, которое вычислялось по алгоритму: ECN = Scell – Snuk/ Snuk, и в дальнейшем анализировались только эти показатели. Так, общая площадь клетки по средним величинам оказалась почти в 1,5 раза меньше нормы, площадь ядра - почти в 2 раза. Что касается цитоплазменно-ядерного соотношения, то оно в 2 раза превышало нормальные величины (Таблица 5).

Таблица 5

Данные морфометрии лимфоцитов в норме и у больных РМЖ до лечения

Показатели	Контроль (N=23, 2300 клеток)	Больные (N=29, 2665 клеток)	t	p
Scell	M m σ разброс	52.57 1.56 22.42 22.34-177.16	35,3 0.31 16,07 10.06-117.33	10,28	<0.05
ECN	M m σ разброс	0.28 0.015 0.21 0.015-2.0	0,54 0.01 0,2 0.02-3.17	26	<0.05
Snuk	M m σ разброс	40.22 0.84 12.05 18.5-72.09	23,27 0.2 10,42 4.78-76.54	19,48	<0.05

При распределении лимфоцитов у больных РМЖ использовалась классификация, предложенная (1994), в основе которой заложены следующие характеристики клетки: размер, плотность ядра и ядерно-цитоплазматическое соотношение. В основу распределения лимфоцитов при РМЖ с учётом возраста положены геометрические характеристики клетки: площадь клетки (Scell, кв. мкм), периметр клетки (Pcell, мкм), площадь цитоплазмы (Scyt, кв. мкм), цитоплазмо-ядерное отношение (ECN, усл. ед), площадь ядра (Snuk, кв. мкм) и периметр ядра

(Pnuk, мкм). Основная масса лимфоцитов при РМЖ независимо от возраста относилась к малым клеткам, что подтверждено статистическим анализом распределения на плоскости главных компонент полученных результатов. Отбор параметров в информативную для распределения лимфоцитов различных классов комбинацию проводился с учётом меры информативности. Наиболее информативной оказалась площадь ядра (мера информативности 0,85). Визуальный анализ частоты вариант в четырех классах гистограмм распределения лимфоцитов у больных РМЖ, показал, что и у больных 1-ой и 2-ой групп преобладают лимфоциты I и II класса гистограммы распределения. (Таблица 6).

Таблица 6

Количество вариантов в четырех классах гистограмм распределений лимфоцитов у больных РМЖ до лечения.

Параметр
1-ая группа	2-ая группа
I	II	III	IV	I	II	III	IV
P1 Scell	549	305	83	12	749	244	33	2
P2 Pcell	445	429	73	2	645	355	28	1
P5 Scyt	765	148	31	5	921	104	3	1
P6 ECN	864	84	1	0	972	49	7	1
P7 Snuc	546	332	71	1	734	255	35	4
P8 Pnuc	337	416	184	12	381	538	99	10

Анализ распределения выборки лимфоцитов у больных раком молочной железы разных возрастных групп позволил выделить модальные классы лимфоцитов и определить средние значения их морфометрических характеристик. Модальные классы у больных отличались по площади ядра, пороговое значение дискриминантной функции (Т-score) находилось на отметке – 18,0 кв. мкм. Как видно из Рис. 2 и 3, в модальный класс лимфоцитов больных 1-ой группы попали клетки с площадью ядра от 8,0 до

18,76 кв. мкм, а модальный класс лимфоцитов у 2-ой - составили клетки с площадью ядра от 17,0 до 28,0 кв. мкм. Средняя площадь ядра у больных 1-ой группы составляла 13,29 кв. мкм, у 2-ой – 20,85 кв. мкм.

Рис. 2 Распределение клеток модального класса больных РМЖ

1-ой группы по площади ядра до лечения

Проведенный ретроспективный анализ показал, что площадь ядра клетки можно рассматривать как фактор, ассоциирующийся с течением и исходом заболевания. Доказательством послужил тот факт, что все пациенты РМЖ, имевшие лимфоциты с площадью ядра 27 и более кв. мкм умерли, независимо от возраста. Компьютерные морфометрические исследования лимфоцитов позволили объектевизировать количественные признаки лимфоидных клеток, показать, что размеры ядра клетки занимают в информативной комбинации признаков ведущее место. Нами были получены данные, подтверждающие возрастные отличия лимфоцитов у больных раком молочной железы. В период развернутых клинических проявлений лимфоциты, независимо от возраста, в основном, представлены мелкими клетками (в 93% случаев).

Свои исследования мы закончили изучением влияния проведённой комплексной терапии на морфологические и цитохимические характеристики клеток кроветворения с учётом возраста.

Рис. 3 Распределение клеток модального класса у больных РМЖ

2-ой группы по площади ядра до лечения

Оказалось, что после полихимиотерапии имелись общие закономерности со стороны показателей кроветворения, выражающиеся в увеличении морфологически дефектных клеток в трёх основных клеточных линиях, сохранении высокого уровня неэффективного эритропоэза, а также о количественной и качественной неполноценности гранулоцито - и лимфоцитопоэза, что подтверждалось нарушением обменных процессов в клетках периферической крови и костного мозга (Таблицы 2, 3 и 4).

Изменение активности таких ферментов как миелопероксидаза, кислая и щелочная фосфатаза, неспецифическая эстераза отражали снижение фагоцитарной и бактерицидной функций нейтрофилов и активности клеточного обмена иммунокомпетентных клеток - лимфоцитов. Количественные изменения содержания полисахаридов указывали на неиспользование клеткой, в полной мере, энергетического материала. Подобные состояния гемопоэза обусловлены как непосредственным воздействием опухоли, так и токсичностью противоопухолевой терапии. Они указывают на возможность развития тяжёлых миелодепрессивных и иммунодепрессивных синдромов и могут явиться плацдармом для возникновения новых клеточных мутаций и развития клональных заболеваний. Эти данные оказались существенными, так как в процессе лечения противоопухолевыми средствами наиболее глубокое угнетение гемопоэза наблюдалось у больных с предшествовавшими до лечения выраженными морфоцитохимическими изменениями в клетках кроветворения. Следовательно, в таких случаях в программу лечения необходимо включать гематозащитные средства как до, так и в периоде проведения цитостатической терапии.

Анализ полученных данных позволил выявить особенности и определить факторы риска, ассоциирующиеся с неблагоприятным течением и исхода заболевания. К ним были отнесены: возраст 60 и более лет; анемия 80 г/л и более; лимфоцитопения; увеличение морфологически дефектных клеток эритроидного и гранулоцитарного ряда; снижение активности миелоперо-

ксидазы в гранулоцитах периферической крови и костного мозга до 90% и СЦК - 1,60; стойкое повышение ШИК - положительных эритрокариоцитов и лимфоцитов – до 16% и более, СЦК – более 0,16; площадь ядра лимфоци -

тов 27 кв. мкм. и более.

Выявленные закономерности в кроветворении, полагаем, можно отнести и к другим формам злокачественных опухолей.

Таким образом, на основании полученных данных определены возрастные особенности морфофункциональных характеристик клеток периферической крови и костного мозга при раке молочной железы до и после комплексного лечения. Выявленные морфологические и цитохимические критерии могут быть использованы в качестве дополнительных дифференциально-диагностических тестов для осуществления обоснованного подбора лекарственных средств сопроводительной терапии, направленной на предотвращение и профилактику осложнений противоопухолевой терапии и своевременное выявление тяжёлых гематологических осложнений, в том числе развитие клональных заболеваний, а также в мониторинге оценки проводимого лечения.

Выводы:

1.  У больных раком молочной железы установлены морфологические нарушения в 3 - х клеточных линиях гемопоэза (эритроидной, гранулоцитарной, лимфоидной) в виде увеличения пула дефектных клеток в два и более раза превышающие физиологическую норму как до, так и после лечения. Этот факт указывает на наличие дизгемопоэза, раннюю гибель клеток и ассоциируется с неблагоприятным исходом заболевания.

2.  Выявлены изменения цитохимических характеристик клеток периферической крови и костного мозга у больных старшей возрастной группы:

- снижение активности миелопероксидазы в нейтрофильных гранулоцитах более чем в два раза свидетельствует о нарушении фагоцитарной и бактерицидной активности нейтрофилов;

- снижение активности кислой фосфатазы в лимфоцитах в два раза в сравнении с физиологической нормой указывает на истощение лизосомального фермента и функциональную неполноценность этих клеток.

Высокие значения содержания полисахаридов в эритрокариоцитах как до, так и после лечения, независимо от возраста, отражают степень неэффективного эритропоэза.

3.  С помощью компьютерной морфоцитометрии лимфоцитов периферической крови разработана лимфоцитограмма с учётом возраста пациентов и выделены модальные классы клеток в качестве дополнительного теста оценки тяжести течения заболевания.

4.  Показано, что проведение комплексной терапии у больных раком молочной железы значительно ухудшает количественные и качественные показатели гемопоэза, что может стать плацдармом для развития тяжёлых гематологических осложнений, в том числе новых клеточных мутаций и клональных заболеваний.

5.  Определена прогностическая значимость выявленных нарушений со стороны клеток периферической крови и костного мозга при раке молочной железы. К факторам, ассоциирующимся с неблагоприятным течением заболевания отнесены: анемия (уровень Нв 80 г/л и менее), лимфоцитопения (менее 16%), высокие значения частоты морфологических дефектов, содер - жания гликогена в клетках, увеличение площади ядра лимфоцита (27 кв. мкм и более), снижение активности миелопероксидазы в гранулоцитах (90% и менее, СЦК - 1,60 и ниже) и кислой фофатазы в лимфоцитах (50% и менее, СЦК - 0,50 и ниже).

6.  Рекомендовано дополнительное наблюдение онкологических больных гематологом в ближайшие и отдалённые сроки после лечения с монито-рингом изучения морфологического и функционального состояния клеток гемопоэза для обоснованного подбора средств сопроводительной терапии в целях осуществления лечения и профилактики побочных осложнений.

Практические рекомендации

Предложен комплекс морфологических и цитохимических исследований клеток периферической крови и костного мозга для мониторинга изменений в состоянии кроветворения у больных РМЖ при проведении комплексного лечения. Полученная информация позволит обеспечить своевременное выявление групп риска развития гематологических осложнений, осуществить наиболее оптимальный выбор лечебной тактики и оценить эффективность проводимого лечения.

Разработана методология оценки распределения лимфоцитов (в мазках из лейкоконцентрата периферической крови) по морфоцитометрическим параметрам и выделены модальные классы лимфоцитов в качестве дополнительного теста определения тяжести течения заболевания.

Комплексная оценка результатов морфофункционального состояния клеток гемопоэза может быть включена в программу обследования онкологических больных.

Список опубликованных работ

1. Мукова признаки дизгемопоэза у больных раком молочной железы.//Тезисы доклада научной конференции «Состояние онкологической помощи в ЮФО по итогам 2008 года».- 2008.- Нальчик.- С. 79-81.

2. Мукова характеристика клеток гемопоэза при апластической анемии./, , //Журнал. Гематология и трансфузиология.- 2008.- том 53.- № 2.- С.21-25.

3.  Мукова морфометрия эритроцитов периферической крови в мониторинге терапии В-12 дефицитной анемии./

, // Материалы докладов IV Всероссийской научно - практической конференции «Общество, государство и медицина для пожилых».- Москва.- 2008. – С.157.

4.  Мукова характеристика лимфоцитов при апластической анемии./ , , //Журнал. Гематология и трансфузиология. – 2009. - №2. – С.19-22.

5.  Мукова характеристика эритроцитов периферической крови у лиц пожилого, старческого возраста и долгожителей./ , , //Журнал. Клиническая лабораторная диагностика. – 2010.- №1.- С.38-42.

6.  Мукова при злокачественных заболеваниях./ , , // Материалы Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных.- Нальчик.- 2011.-т. 2. С.309-311.

7.  Мукова состояния кроветворения у больных раком молочной железы разных возрастных групп./ , , // Известия КБГУ.- Нальчик. – 20т. 1.- №1. – С.49-57.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

КФ - кислая фосфатаза

ЛП - липиды

МДК - морфологически-дефектные клетки

МП - миелопероксидаза

НГЖ - негемоглобиновое железо

НЭ - α-нафтил-ацетат-эстераза (неспецифическая эстераза)

РМЖ - рак молочной железы

ПР - прогестерона рецептор

СБЛ - сидеробласты

СЦК - средний цитохимический коэффициент

ПС - полисахариды

ТТГ - телегамматерапия

ЩФ - щелочная фосфатаза

ЭР - эстрогена рецептор

_____________________________________

Подписано в печать 15.02.2012г

Заказ № 000 Тираж 100 шт.

Отпечатано в типографии «АллА-принт»

Г. Москва, Лубянский пр-д., стр.5

Тел.: 8 (4

www. *****

____________________________________