Сравнительное фармакогностическое изучение грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной (стр. 5 )

каприновая, лауриновая, маргариновая, миристиновая, пальмитиновая, линолевая, арахиновая, докозановая, линоленовая и стеариновая кислоты), 10 – углеводов (арабинофураноза, арабинопираноза, арабиновая кислота, метиларабиноза, метилглюкофураноза, ксилофураноза, рибоза, глюкофураноза, ксилоза, сахароза), 1 – аминокислота (пролин), 4 – другие первичные метаболитв. Идентифицированные вещества приведены в таблице 11 в порядке увеличения их масс. Общими для всех трех анализируемых растений являлись 19 веществ, представленных 2 фенольными соединениями (галловая кислота, арбутин), 7 углеводами (арабинофураноза, арабинопираноза, арабиновая кислота, рибоза, глюкофураноза, ксилоза, сахароза), 4 органическими (янтарная, яблочная, лимонная и терефталевая) и 5 жирными кислотами (миристиновая, пальмитиновая, линолевая, линоленовая и стеариновая), 1 аминокислотой (пролин). Вместе с тем, в листьях грушанки и зимолюбки обнаружены 6 общих соединений (орцин, треоновая кислота, метиларабиноза, метилглюкофураноза, ксилофураноза, гваякол-глюкопиранозид), грушанки и толокнянки – 2 (арахиновая кислота и ситостерол), зимолюбки и толокнянки – 4 (бензойная кислота, 3-гидроксипропановая кислота, α-амирин и β-амирин). Только в грушанке выявлены 3 компонента (эйкозан, 2-метирезорцин, цианиданол), в зимолюбке – 3 (1-гидрокси-2-пропанон, глицерин и пеларгоновая кислота), в толокнянке – 7 (гидрохинон, капроновая, 4-идроксибензойная, лауриновая, маргариновая, докозановая кислоты, 3-оксо-урс-12-ен).

Морфолого-анатомический анализ. Определение

числовых показателей. Разработка проектов НД

Морфолого-анатомический анализ. При сравнительном микроскопическом анализе выявляются как определенные сходства, так и различия исследуемых растений. Общими анатомическими признаками для грушанки, зимолюбки и толокнянки являются тип устьичного аппарата (аномоцитный), расположение устьиц только на нижней стороне листа, наличие кутикулы. Однако, количество околоустьичных клеток у толокнянки (6 – 8) больше, чем у грушанки и зимолюбки (4 – 6) и клетки эпидермиса мельче. Отличительной особенностью листа зимолюбки являются наличие хорошо различимого губчатого мезофилла, имеющего характер аэренхимы. Включения оксалата кальция у зимолюбки встречаются часто в форме друз, у грушанки друзы редкие, как правило, одиночные, а у толокнянки оксалат кальция откладывается главным образом в виде кристаллов вдоль жилок. Отличительным признаком микроскопии листа толокнянки является наличие простых волосков, тогда как у грушанки и зимолюбки волоски нами не обнаружены. Результаты морфолого-анатомического анализа сырья грушанки и зимолюбки использованы при составлении проектов ФСП.

Определение числовых показателей. Руководствуясь методиками, приведенными в ГФ XI издания, нами определены такие числовые показатели для сырья грушанки круглолистной и зимолюбки зонтичной, как влажность, содержание золы общей и нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной,

Таблица 11 – Результаты хромато-масс-спектрометрического анализа метанольных извлечений из листьев грушанки, зимолюбки и толокнянки

№ п/п	Вещество	Анализируемое растение
Грушанка	Зимолюбка	Толокнянка
Время удерживания, мин.	Содержание, %	Время удерживания, мин.	Содержание, %	Время удерживания, мин.	Содержание, %
1	2	3	4	5	6	7	8
1	1-Гидрокси-2-пропанон	-	-	5,423	0,519	-	-
2	Бензойная кислота	-	-	5,635	0,071	5,624	0,113
3	Глицерин	-	-	5,836	1,734	-	-
4	Янтарная кислота	6,079	0,979	6,079	0,197	6,068	0,244
5	3-Гидроксипропановая кислота	-	-	6,227	0,078	6,222	0,081
6	Гидрохинон	-	-	-	-	6,666	3,307
7	Пеларгоновая кислота	-	-	6,370	0,114	-	-
8	Каприновая кислота	-	-	-	-	6,957	0,087
9	Орцин (5-метилрезорцин)	7,026	11,799	7,026	5,981	-	-
10	Яблочная кислота	7,179	0,786	7,179	0,241	7,179	0,471
11	Пролин	7,396	0,326	7,396	0,136	7,396	0,133
12	Треоновая кислота (2,3,4-тригидроксибутановая кислота)	7,586	0,416	7,586	0,088	-	-
13	4-Гидроксибензойная кислота	-	-	-	-	7,904	0,319
14	Лауриновая кислота	-	-	-	-	7,983	0,453
15	Арабинофураноза	8,131	0,932	8,131	0,271	8,136	0,362
16	Арабинопираноза	8,358	1,419	8,358	0,626	8,358	0,286
17	Арабиновая кислота	8,485	2,394	8,480	2,163	8,464	0,531
18	Метиларабиноза	8,655	0,433	8,655	0,357	-	-
19	Терефталевая кислота	8,676	1,394	8,676	0,341	8,676	1,183
20	Метилглюкофураноза	8,729	1,534	8,729	0,402	-	-
21	Ксилофураноза	8,781	0,652	8,781	0,370	-	-
22	Миристиновая кислота	8,866	0,689	8,866	0,252	8,866	0,631
23	Рибоза	8,924	0,863	8,924	0,393	8,924	0,261
24	Глюкофураноза	8,956	4,389	8,956	1,503	8,972	1,315
25	Лимонная кислота	9,067	2,140	9,067	0,587	9,067	0,480
26	Ксилоза	9,205	1,839	9,205	0,484	9,210	0,286
27	Галловая кислота	9,379	7,486	9,379	1,536	9,379	9,089
28	Пальмитиновая кислота	9,659	9,212	9,660	3,930	9,665	4,628
29	Маргариновая кислота	-	-	-	-	10,035	0,104
30	Линолевая кислота	10,299	4,432	10,299	3,685	10,299	3,876
31	Линоленовая кислота	10,331	4,267	10,331	18,601	10,331	3,852
32	Стеариновая кислота	10,389	1,187	10,389	0,588	10,389	0,759
33	Арахиновая кислота	11,061	0,371	-	-	11,061	0,142
34	Эйкозан	11,251	4,626	-	-	-	-
35	Арбутин	11,479	5,547	11,415	10,401	11,637	10,743
36	Гваякол-глюкопиранозид	11,727	7,720	11,643	8,949	-	-
37	Докозановая кислота	-	-	-	-	11,754	0,265
38	Сахароза	11,986	13,659	11,986	18,593	11,986	0,862
39	2-Метилрезорцин	12,055	3,016	-	-	-	-
40	Цианиданол	12,991	2,633	-	-	-	-
41	Ситостерол	17,048	2,861	-	-	17,069	0,873
42	3-Оксо-урс-12-ен	-	-	-	-	17,645	2,486
43	β-Амирин	-	-	17,825	18,312	17,836	38,450
44	α-Амирин	-	-	17,989	1,803	17,941	13,327

содержание экстрактивных веществ, которые включены в проекты ФСП.

Разработка проектов НД. Результаты проведенных нами исследований использованы при разработке проектов ФСП «Листья зимолюбки зонтичной» и «Листья грушанки круглолистной». Кроме того, нами предложен проект изменения к ФС ГФ XI «Листья толокнянки» в разделе «Количественное определение». НД разрабатывали в соответствии с ОСТ 91500.05.001-00 «Отраслевой стандарт. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».

В ы в о д ы

1.  С помощью метода масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой в листьях грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной определено содержание 5 макро - (Ca, Mg, Na, P, Si), 53 микро - и ультрамикроэлемента (Ag, As, B, Ba, Bi, Br, Ce, Cd, Co, Cs, Cr, Cu, Dy, Er, Eu, Fe, Ga, Gd, Ge, Hf, Hg, Ho, I, La, Li, Lu, Mn, Mo, Nb, Nd, Ni, Pb, Pr, Rb, Sb, Se, Sm, Sn, Sr, Ta, Tb, Te, Th, Ti, Tl, Tm, U, V, W, Y, Yb, Zn, Zr), среди которых больше всего содержалось Ca, Mg, Si, Fe, Mn, Ba, Sr, и выявлено, что проанализированные образцы является экологически безопасными.

2.  Проведен сравнительный анализ аминокислотного состава листьев изучаемых растений, в результате которого обнаружено 19 аминокислот, из которых 8 являлись незаменимыми (Val, Ile, Leu, Met, Lys, OH-Lys, Thr, Phe) и 11 заменимыми (Ala, Gly, Ser, Tyr, Cys, Asp, Glu, Arg, His, Pro и OH-Pro), и отмечено, что их больше всего содержалось в листьях грушанки.

3.  Экспериментально подобраны и адаптированы применительно к листьям каждого исследуемого растения спектрофотометрические методики количественного определения отдельных групп фенольных соединений (арбутина, суммы флавоноидов, суммы гидроксикоричных кислот) путем определения оптимальных условий их проведения. Проведена метрологическая характеристика методик.

4.  По адаптированным методикам проанализированы различные образцы листьев (более 15 для каждого исследуемого вида) и в них определено содержание арбутина, суммы флавоноидов и гидроксикоричных кислот, дубильных веществ, в результате чего обнаружено, что больше всего арбутина содержалось в листьях зимолюбки, а дубильных веществ – в толокнянке.

5.  При изучении динамики накопления фенольных соединений в течение вегетационного периода в листьях грушанки круглолистной и зимолюбки зонтичной выявлены оптимальные сроки их заготовки в Ярославской области, приходящиеся на конец лета – начало осени (август-сентябрь).

6.  При сравнительном хромато-масс-спектрометрическом анализе природных соединений листьев грушанки, зимолюбки и толокнянки идентифицированы 44 вещества, представленные фенольными соединениями, тритерпеноидами, органическими и жирными кислотами, углеводами и другими соединениями.

7.  При морфолого-анатомическом анализе исследуемых листьев отмечено, что по внешним признакам весьма сходны зимолюбка и толокнянка, в то время как по микродиагностическим признакам – грушанка и зимолюбка.

8.  Установлены отдельные числовые показатели для листьев грушанки круглолистной и зимолюбки зонтичной (влажность, содержание золы общей и нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной, содержание экстрактивных веществ).

9.  На основе проведенных исследований разработаны проекты фармакопейных статей предприятия «Листья зимолюбки зонтичной» и «Листья грушанки круглолистной», а также предложен проект изменения к ФС ГФ XI «Листья толокнянки» в разделе «Количественное определение».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.  , , [и др.] Сравнительный анализ элементного состава листьев толокнянки европейского и азиатского происхождения // Фармация и здоровье: материалы международной научно-практической конференции. – Пермь, 2005. – С. 126.

2.  , , [и др.] Фитохимическое изучение некоторых видов семейства вересковых, произрастающих в европейской и азиатской частях России // Фармация и здоровье: материалы международной научно-практической конференции. – Пермь, 2005. – С. 136 – 137.

3.  , , [и др.] Химический и фармакологический скрининг некоторых видов семейства вересковых // Лекарства – человеку. Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств: мат-лы науч.-практ. конф. с междун. участием – Харьков, 2006. – С. 40 – 41.

4.  , , Горохова анализ элементного состава листьев грушанки, зимолюбки и толокнянки // Сборник научных работ студентов и молодых ученых ЯГМА. – Ярославль, 2006. – С. 114 – 115.

5.  , , Джурко изучение листьев грушанки круглолистной // Актуальные проблемы фармации: межрегиональный сборник научных трудов – Рязань, 2006. – С. 157 – 159.

6.  , , Фурса -спектрометрическое определение макро-, микро-, и ультрамикроэлементов в листьях грушанки круглолистной // Актуальные вопросы современной фармации и фармацевтического образования: сб. науч. трудов юбилейной конф., посв. 25-летию фармацевтического факультета Башкирского государственного медицинского университета. – Уфа, 2006. – С. 147 – 148.

7.  , , [и др.] Изучение элементного состава сырья отдельных лекарственных растений, произрастающих в естественных условиях Ярославской области и выращиваемых в питомнике // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. – Пятигорск, 2007. – Вып. 62. – С. 38 – 39.

8.  , , [и др.] Фитохимическое изучение листьев зимолюбки зонтичной, перспективного растения традиционной медицины // Традиционная медицина-2007: сборник научных трудов конгресса, посвященного 30-летию со дня открытия Центрального НИИ рефлексотерапии.– М., 2007. – С. 70 – 71.

9.  , Коротаева макро-, микро - и ультрамикроэлементов в листьях грушанки и зимолюбки масс-спектрометрией с индуктивно связанной плазмой // Сборник научных работ студентов и молодых ученых ЯГМА. – Ярославль, 2007. – С. 113 – 114.

10.  , , Фурса определение арбутина в листьях зимолюбки зонтичной // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. – 2007. - №2. – С. 260 – 263.

11.  , , Фурса определение арбутина в листьях грушанки круглолистной // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения: сб. мат-лов науч.-практ. конф. с междун. участием, посв. 25-летию фармацевтического факультета ЯГМА. – Ярославль, 2007. – С. 208 – 211.

12.  , Мазепiна Л. С., Круглов -спектрометричне визначення макро-, мікро - та ультрамікроелементів у траві зимолюбки зонтичної // Фармацевтичний журнал (Украина). – 2007. - №6. – С. 95 – 97.

13.  , , [и др.] Некоторые итоги определения экологической чистоты ряда видов лекарственного растительного сырья // Влияние природных и антропогенных факторов на социоэкосистемы: межрегион. сб. науч. тр. – Рязань, 2007. – Вып. IV. – С. 248 – 254.

14.  Мазепина суммы флавоноидов в листьях зимолюбки зонтичной // Актуальные проблемы образования и общества: мат-лы научно-практ. конф. с междун. участием. – Ярославль, 2008. – Т. 1. – С. 173 – 174.

15.  Мазепина оптимальных условий количественного определения суммы флавоноидов в листьях грушанки круглолистной // Сборник научных работ студентов и молодых учёных ЯГМА. – Ярославль, 2008. – С. 145 – 146.

16.  , , Фурса определение арбутина в листьях толокнянки обыкновенной с использованием колоночной хроматографии // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научых трудов. – Пятигорск, 2008. – Вып. 63. – С. 61 – 63.

17.  , , Круглов состав листьев толокнянки обыкновенной // Фармация. – 2008. - №2. – С. 17 – 18.

18.  , Е, [и др.] Масс-спектрометрическое определение макро-, микро - и ультрамикроэлементов в листьях 3 видов вересковых и 2 видов грушанковых // Вестник фармации (Беларусь). – 2008. - №2 (40). – С. 66 – 70.

19.  , , Таланов определение отдельных групп фенольных соединений в листьях грушанки круглолистной // Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании: мат-лы междун. науч.-практ. конференции. – Белгород, 2008. – С. 280 – 283.

20.  , Мазепина динамика накопления фенольных соединений в сырье грушанки круглолистной // Актуальные вопросы медицинской науки: сб. науч. работ студентов и молодых учёных всероссийской конф. с междун. участием. – Ярославль, 2009. – С. 279 – 280.

21.  , , Фурса определение суммы флавоноидов в листьях толокнянки // Вестник фармации (Беларусь). – 2009. - №2 (44). – С. 26 – 30.

22.  , , [и др.] Содержание фенольных соединений в листьях зимолюбки зонтичной // Изыскание и создание природных лекарственных средств: межвуз. сб. науч. трудов с междун. участием, посв. 25-летию кафедры фармакогнозии и ботаники ЯГМА. – Ярославль, 2009. – С. 197 – 2009.

23.  , , [и др.] Количественное определение некоторых групп фенольных соединений в листьях толокнянки обыкновенной // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. – Пятигорск, 2009. – Вып. 64. – С. 79 – 81.

24.  , , [и др.] Хромато-масс-спектрометрический анализ листьев толокнянки // Актуальные вопросы медицинской науки: сб. науч. работ студентов и молодых учёных всеросс. конф. с междун. уч-ем. – Ярославль, 2009. – С. 283.

25.  , , [и др.] Масс-спектрометрический анализ элементного состава лекарственного растительного сырья различных морфологических групп // Изыскание и создание природных лекарственных средств: межвуз. сб. науч. трудов с междун. участием, посв. 25-летию кафедры фармакогнозии и ботаники ЯГМА. – Ярославль, 2009. – С. 271 – 274.

26.  , , [и др.] Изучение аминокислотного состава различных морфологических групп растительного сырья // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. – Пятигорск, 2009. – Вып. 64. – С. 112 – 113.

27.  , , [и др.] Определение арбутина в листьях грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной // Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа: мат-лы Российской науч.-практ. конф. с междун. уч-ем. – Пермь, 2009. – С. 168 – 171.

28.  , , Фурса листьев грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной методом хромато-масс-спектрометрии // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научых трудов. – Пятигорск, 2010. – Вып. 65. – С. 85 – 87.

29.  , , Фурса применения грушанки – традиционного урологического средства // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. – 2010. - №7. – С. 224 – 226.

30.  , , [и др.] Анализ аминокислотного состава отдельных видов семейств бурачниковых, валериановых, вересковых, гвоздичных, грушанковых и яснотковых // Фармация№4. – С. 22 – 24.