Химико-фармакологическое исследование нативных гуминовых кислот торфов томской области (стр. 4 )

Судя по полученным экспериментальным данным, их внутрижелудочное введение в диапазоне доз 25-100 мг/кг препятствует повреждающему действию тетрахлорметана на функционально-метаболические и морфологические показатели печени крыс: существенно снижается интенсивность процессов липопероксидации и разрушения мембран гепатоцитов, выраженность цитолитического синдрома, улучшается экскреторная функция печени, не развиваются фиброзные изменения в печени экспериментальных животных (табл. 11).

Наиболее выраженные гепатозащитные свойства ГК, превосходящие аналогичное действие препарата сравнения Карсила наблюдаются в дозе 100 мг/кг. Исходя из выраженного снижения концентрации малонового диальдегида в гомогенате печени и в сыворотке крови экспериментальных животных, получавших ГК – их гепатозащитное действие может быть обусловлено выраженными антиоксидантными свойствами (табл. 11).

Исследование антигипоксической активности ГК. Наличие антиоксидантных и хелатирующих свойств у исследуемых ГК указывает на их потенциальные антигипоксические свойства (Лукьянова Л. Д., 1997; Козин В. М., 2005; Кашицкий Э. С., 1999). Это побудило нас оценить их антигипоксическую активность на моделях гистотоксической (тканевой) гипоксии и гипобарической гипоксической гипоксии (гипоксии объема), а также на окислительное фосфорилирование в митохондриях в условиях нормобарической гиперкапнической гипоксии.

Исследование влияния ГК на выживаемость животных при различных гипоксических состояниях. Судя по полученным нами данным, ГК в условиях гипобарической гипоксической гипоксии в дозах 25-100 мг/кг обладают выраженным антигипоксическим действием - на 38-50 % увеличивая продолжительность жизни мышей (табл. 12) и снижая летальность от гипоксии на 24-36 % соответственно.

Таблица 12

Влияние 5-кратного внутрижелудочного введения ГК на продолжительность жизни мышей в условиях гипобарической гипоксической гипоксии, (Χ±Δх)

Группы животных	Количество животных	Время жизни, мин (t-критерий Стьюдента)	Летальность от гипоксии (c2 –критерий)
Контроль	25	11,88±1,13	92 %
ГК (25 мг/кг)	25	13,72±1,24	84 %
ГК (50 мг/кг)	25	16,44±1,19*	76 %
ГК (100 мг/кг)	25	17,80±1,31*,**	64 %

Примечание: * – достоверное различие (р<0,05) по сравнению с контролем; ** – достоверное различие (р<0,05) по сравнению с гуминовыми кислотами 25 мг/кг.

Аналогичные результаты были получены на модели гистотоксической тканевой гипоксии - ГК в диапазоне доз 25-100 мг/кг в условиях гистотоксической гипоксии проявляют антигипоксическое действие, на 72,6 % увеличивая продолжительность жизни мышей (табл. 13).

Таблица 13

Влияние 5-кратного внутрижелудочного введения ГК на продолжительность жизни мышей в условиях гистотоксической гипоксии, (Χ±Δх)

Группы животных	Количество животных	Продолжительность жизни
в минутах	в % от контроля
Контроль (нитропруссид натрия)	25	9,45±2,78	-
ГК (25 мг/кг) + нитропруссид натрия	25	11,83±1,73*	125,20
ГК (50 мг/кг) + нитропруссид натрия	25	14,10±1,87*	148,80
ГК (100 мг/кг) + нитропруссид натрия	25	16,32±1,48*,**	172,60

Примечание: * - достоверное различие (р<0,05) по сравнению с контролем; ** – достоверное различие (р<0,05) по сравнению с гуминовыми кислотами 25 мг/кг.

Исследование влияния ГК на окислительное фосфорилирование в митохондриях в условиях гипоксии. Согласно литературным данным, гипоксическое воздействие сопровождается усилением процессов ПОЛ и разобщением окислительного фосфорилирования в митохондриях (МХ) в результате свободнорадикального повреждения клеток (Зозуля Ю. А., 2000). Исходя из этого, с целью выявления возможных механизмов антигипоксического действия ГК мы провели исследование влияния их профилактического курсового введения (100 мг/кг) на окислительное фосфорилирование в митохондриях головного мозга и печени на фоне гипоксического воздействия в сравнении с антиоксидантом и антигипоксантом дигидрокверцетином в условиях гипоксии средней степени тяжести – на модели нормобарической гиперкапнической гипоксии у мышей (табл. 14-17).

В данных условиях эксперимента гипоксия приводила к возрастанию скоростей поглощения кислорода МХ головного мозга мышей при окислении эндогенных субстратов, а также к снижению величин СД, ДК и АДФ/О, по сравнению с митохондриями интактных животных (табл. 14). Подобная закономерность наблюдалась также и при утилизации МХ головного мозга экзогенных субстратов – сукцината (ЯК) и смеси малат-глутамат (МГ). При этом, наиболее выраженные нарушения, деэнергизация МХ проявлялись при окислении органеллами НАД-зависимых субстратов (малата и глутамата), что также сопровождалось снижением метаболического контроля дыхания органелл. На это указывает повышение скоростей контролируемого окисления субстратов (V4п, V4о) в значительно большей степени, чем фосфорилирующего (V3), снижение величин СД, ДК и существенное снижение эффективности окислительного фосфорилирования - коэффициента АДФ/О.

Таблица 14

Функциональное состояние митохондрий головного мозга интактных мышей и

мышей в условиях гипоксии (Χ±Δх, n = 6)

Субстраты:	нгат. О2/мин мг белка	СД	ДК	АДФ/О	Тр, с
V4п	V3	V4о
состояние митохондрий головного мозга интактных мышей
Энд. суб.	30,48 ±1,95	64,00 ±2,85	30,19 ±1,25	2,10 ±0,05	2,12 ±0,05	2,45 ±0,06	52,55 ±2,12
ЯК	65,91 ±2,05	105,46 ±2,22	65,91 ±1,15	1,60 ±0,04	1,60 ±0,03	1,85 ±0,05	42,05 ±3,11
МГ	33,68 ±1,45	85,88 ±2,45	35,02 ±1,75	2,55 ±0,05	2,45 ±0,06	2,65 ±0,05	45,55 ±2,97
МГ +МЛН	26,12 ±1,22	64,00 ±2,00	25,81 ±2,04	2,45 ±0,06	2,48 ±0,07	3,15 ±0,07	52,32 ±3,50
МГ +АОА	22,43 ±1,88	58,31 ±3,05	23,32 ±0,85	2,60 ±0,10	2,50 ±0,08	3,45 ±0,04	60,22 ±2,55
состояние митохондрий головного мозга мышей в условиях гипоксии
Энд. суб.	56,56 ±1,84*	90,50 ±2,85*	53,23 ±1,35*	1,60 ±0,05*	1,70 ±0,04*	1,85 ±0,05*	45,30 ±5,15
ЯК	90,74 ±2,11*	136,11 ±4,11*	93,87 ±1,94*	1,50 ±0,02*	1,45 ±0,04*	1,63 ±0,04*	34,22 ±2,50*
МГ	62,27 ±3,00*	115,20 ±2,00*	65,83 ±2,50*	1,85 ±0,05*	1,75 ±0,06*	2,25 ±0,06*	42,10 ±2,15
МГ +МЛН	40,12 ±2,65*	93,89 ±2,70*	40,82 ±2,21*	2,34 ±0,10	2,30 ±0,08	2,45 ±0,05*	50,00 ±3,45
МГ +АОА	36,57 ±1,85*	92,16 ±2,45*	36,14 ±1,90*	2,52 ±0,06	2,55 ±0,05	3,15 ±0,05*	56,45 ±2,45

В МХ печени мышей гипоксическое воздействие вызывало изменения, сходные с таковыми в ткани головного мозга (табл. 15). Так, при окислении эндогенных субстратов наблюдалось увеличение скоростей дыхания (V4п, V3 V4о) и уменьшение коэффициентов СД, ДК, АДФ/О относительно показателей группы интактных животных (табл. 15). Это прямо указывает о разобщение окислительного фосфорилирования на фоне гипоксии. Окисление сукцината сопровождалось увеличением скоростей поглощения кислорода МХ печени, уменьшением коэффициентов СД и АДФ/О, что также свидетельствует о снижении эффективности окислительного фосфорилирования.

Таблица 15

Функциональное состояние митохондрий печени интактных мышей и

мышей в условиях гипоксии (Χ±Δх, n = 6)

Субстраты:	нгат. О2/мин мг белка	СД	ДК	АДФ/О	Тр, с
V4п	V3	V4о
состояние митохондрий печени интактных мышей
Энд. суб.	38,34 ±0,75	85,12 ±3,25	37,83 ±0,95	2,22 ±0,02	2,25 ±0,05	2,60 ±0,06	48,75 ±2,00
ЯК	71,53 ±1,95	125,17 ±3,00	69,54 ±2,14	1,75 ±0,04	1,80 ±0,04	2,00 ±0,04	38,44 ±4,25
МГ	40,85 ±2,12	102,12 ±4,00	40,85 ±2,45	2,50 ±0,05	2,50 ±0,05	2,50 ±0,04	41,50 ±1,25
МГ +МЛН	31,40 ±2,50	83,21 ±1,55	30,82 ±2,31	2,65 ±0,06	2,70 ±0,03	2,85 ±0,07	46,20 ±2,50
МГ +АОА	29,08 ±2,14	75,60 ±2,50	27,49 ±1,50	2,60 ±0,05	2,75 ±0,04	3,45 ±0,03	54,00 ±2,30
состояние митохондрий печени мышей в условиях гипоксии
Энд. суб.	62,38 ±2,00*	115,40 ±2,11*	61,38 ±2,02*	1,85 ±0,05*	1,88 ±0,06*	2,20 ±0,05*	51,00 ±2,75
ЯК	98,59 ±2,11	152,81 ±3,10*	89,89 ±1,50*	1,55 ±0,06*	1,70 ±0,05	1,85 ±0,06*	36,00 ±3,15
МГ	65,85 ±1,44*	135,00 ±1,66*	64,29 ±1,25*	2,05 ±0,06*	2,10 ±0,05*	2,15 ±0,06*	44,20 ±3,45
МГ +МЛН	37,89 ±1,50	98,50 ±3,45*	37,89 ±1,35	2,60 ±0,05	2,60 ±0,04	3,15 ±0,07*	46,35 ±2,85
МГ +АОА	32,27 ±1,15	82,30 ±3,32	31,41 ±1,40	2,55 ±0,07	2,62 ±0,05	3,50 ±0,04	58,56 ±3,75

Примечание: *p<0,05 по сравнению с контролем; Χ – среднее значение, ΔX – стандартное отклонение.