3.12. Исследование in vitro антагонистической активности и чувствительности к антибиотикам бактерий-пробиотиков L.Plantarum
шт. М-30 и B.Subtilis mm. B-1948
Наиболее значимыми, с точки зрения терапевтической эффективности и технологичности, параметрами штаммов микроорганизмов для производства пробиотиков являются экологическая принадлежность и принадлежность к физиологическим симбионтам, устойчивость к лизоциму, желчи и пищеварительным сокам, к антимикробным препаратам, высокая адгезивность и антагонистическая активность по отношению к патогенным и условно патогенным микроорганизмам.
Во ВНИТИБП разработан комплекс препаратов для птицеводства «Ави-лакт-форте», содержащий препарат «Авилакт-1К» (пробиотик на основе Lactobacillus acidophilus) и «Авистим» (пребиотик на основе культуралыюй жидкости высшего лечебного гриба Fuisarium sambucinum).
В 2006 году начаты исследования по разработке высокоэффективного синбиотического комплекса для птиц на основе препарата «Авилакт-форте» путем введения в его состав симбионтов ЖКТ (Lactobacillus plantarum M-30 и Bacillus sublilis B-1948) и азотобактерии (Azolobacler chroococcum).
С этой целью в рамках доклинических испытаний исследована in vitro антагонистическая активность и чувствительность к антибиотикам бактерий L. plantarum, шт. М-30, и B. subtilis, шт. В-1948.
Антагонистическую активность пробиотиков in vitro исследовали методом отсроченного антагонизма в отношении патогенных и условно патогенных микроорганизмов: S. tuphimurium, S. dublin, S. gallinarum, 3-х штаммов E. coli: IC88, K-99, A-20, а также полевого изолята E. coli выделенного от больной птицы в условиях опытного птицехозяйства.
Об антагонистической активности штаммов судили по величине зоны задержки роста тест-культур. Полученные результаты представлены в таблице 15.
Таблица 15
Результаты определения антагонистической активности бактерий B.subtilis и L.plantarum шт. М-30
Патогенные микроорганизмы | Зона задержки роста, мм (п=3) | |
B. subtilis | L. plantarum | |
S. tuphimurium | 13-15 | 5-7 |
S. dublin | 16-18 | 7-9 |
S. gallinarum | 21-25 | 7-9 |
E. coli: K-88 | 18-22 | 6-8 |
E. coli: K-99 | 18-20 | 7-9 |
E. coli:A-20 | 21-25 | 6-8 |
E. coli: (полевой изолят) | 19-21 | 10-12 |
Величина зоны угнетения определяет чувствительность микроба к: данному антибиотику. Диаметр зоны задержки роста бактерий измеряли линейкой с точностью до 1 мм, оценка результатов представлена в таблице 16.
Таблица 16
Расшифровка результатов опытов
Ключ к расшифровке результатов опыта | |
Диаметр зоны задержки поста, мм | Чувствительность микроорганизма |
25 | высокочувствительный |
15-25 | чувствительны |
11-15 | умеренно чувствительный |
11 | устойчивый |
Результаты определения чувствительности бактерий-пробиотиков к ряду широко применяемых антибиотиков приведены в таблице 17.
Таблица 17
Результаты определения чувствительности бактерий-пробиотиков к ряду широко применяемых антибиотиков
№ п/п | Антибиотик | Диаметр зоны задержки роста (мм)* | |
Вид пробиотика | |||
L. plantarum | B. sublilis | ||
1. | Кламоксил | 50 | 24 |
2 | Левомицетин | 39 | 4 |
3 | Тетрациклин | 37 | 8 |
4 | Цефазолин | 29 | 22 |
5 | Ампициллин | 28 | 4 |
6 | Рифампицин | 27 | 16 |
7 | Гентамицин | 22 | 4 |
8 | Офлоксацин | 12 | 12 |
9 | Ципрофлоксацин | 12 | 12 |
10 | Энрофлоп (5%) | 12 | 9 |
11 | Флавомицин | 11 | 8 |
12 | Линкомицин | 11 | 9 |
Показано, что лактобактерии являются высокочувствительными к кла-моксилу, левомицетину, тетрациклину, цефазолину, ампициллину, рифампи-цину и гентамицину; умеренно чувствительными к офлоксацину, ципролок-сацину, энрофлону, флавомицину и линкомицину.
Наилучшие экономические показатели были получены при использовании пробиотика в сочетании с однократным применением антибиотиков за счет повышения сохранности на 3,0-3,3%, выхода мяса - на 0,7-1,3%. При этом рентабельность производства мяса бройлеров в этих группах составила 57,5 и 58,3%, что на 0,1-0,8 выше.
3.13. Обеспечение качества и безопасности производства биологически активных веществ в биотехнологии
Разработка и изготовление многих биологически активных веществ относится к потенциально опасным технологиям, так как сырьем в некоторых случаях служат микроорганизмы различной степени патогенности и вещества белковой природы, обладающие сенсибилизирующим действием на биосистему.
Для обеспечения безопасности производства БВК необходимо разработать и использовать документацию и методики согласно требованиям GMP и ИСО:
- методика анализа и обеспечения антиконтаминантной защиты техноло-
гических процессов производства БВК с учетом требований GMP;
-сформулировать исходные требования к технологическому оборудованию по обеспечению стерильности при производстве БАК;
- проанализировать и определить стадии БВК с использованием очистных
помещений, согласно норм на микробиологическую чистоту и классов зон в
зависимости от стадии производства.
Важным аспектом деятельности биологического предприятия является охрана окружающей среды, для чего создаются барьерные технологии, позволяющие минимизировать или предотвратить выделение микроорганизмов не только в производственную среду, но и за пределы производства. Эту работу проводят с учетом рекомендаций МС серии 14000 (экологический менеджмент).
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Использование хитозанов и его производных для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных (Св. о гос. регистрации лекарственного средства от 01.01.2001г.).
2. Получен аттестат ФГУ «ВГНКИ» на лекарственное средство для животных «Хитозан» от 01.01.2001г.
3. Разработаны и утверждены Технические условия «ТУ » на хитозан.
4. Разработана и утверждена Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору инструкция по применению «Хитозана» для профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка с/х животных от 01.01.2001г.
5. В результате проведенных исследований получены 3 патента, отчеты о результате изучения эффективности введения в рацион телят хитозана и фитохитозана, акты о применении низкомолекулярного хитозана на телятах и цеолита в сочетании c E. coli VL 313 при выращивании циплят бройлеров (материалы патентов, отетов и актов прилагаются).
5. ВЫВОДЫ
1. Мембранное разделение и использование препаратов низкомолекулярного хитозана стимулирует механизмы гомеостаза у животных, усиливает антителогенез и увеличивает титры циркулирующих в крови антител, а также
активирует факторы, характеризующие гуморальную и неспецифическую защиту организма.
2. Низкомолекулярный хитозан обладает высокой антибактериальной активностью по отношению к штаммам микобактерий. Антимикробные свойства хитозана позволяют рекомендовать его с целью применения для профилактики и лечения туберкулеза в медицине и ветеринарии, в частности, в птицеводческой отрасли.
3. Для повышения сорбционных свойств хитозана проведена его активация и получен сорбент емкостью на 40-60% выше исходного полимера, определены оптимальные условия его растворения, переосаждения, концентрирования и режимы высушивания. Полученные данные свидетельствуют, что скармливание хитозана и фитохитоза телятам обуславливает их увеличение живой масы к 101-суточному возрасту более, чем на 5% по сравнению с контролем.
4. Исследована антиметастатическая активность олигомеров хитозана, которая проявляется при сочетании олигомерной фракции хитозана с компонентами сложного экстракта противоонкологического фитосбора.
5. Показано, что высокомолекулярная фракция хитозана обладает ан-тиоксидантной активностью, пролонгирует действие растительного экстракта в составе препарата, связывает и выводит из живого организма токсины и ионы тяжелых металлов.
6. Хитозан ускоряет регенерацию поврежденных тканей кожии направляет процесс по органотипичному пути при заживлении ран после термического и химического ожогов.
7. Экспериментально установлено, что использование ферментного препарата коллагеназы в 0,03% концентрации улучшает качественные характеристики мясных продуктов и сокращает длительность термообработки.
8. Для нужд животноводства и птицеводства разработаны, успешно испытаны и налажено производство синбиотиков - лечебно-профилактических
кормовых добавок.
9. Показана возможность при выращивании цыплят бройлеров при
замене в кормовой биологической добавке дорогого кристаллического лизина на цеолит + Echerichia coli VL.
10. Доказано, что автолизат хлебопекарных дрожжей может быть использован в составе питательной среды при производстве препарата против кровососущих (личинок комаров Aedes aegipty).
11. Установлено, что яично-дрожжевой гидролизат является эффективным препаратом для применения его в пчеловодстве в качестве лечебно-профилактической подкормки против нематоза.
12. Установлено, что бактерии L. plantarum, шт. М-3,0, B. subtilis, шт. В-1948, обладают достаточной устойчивостью к широкому кругу антибиотиков, что позволяет сочетать антибиотико - и пробиотикотерапию в случае угрожающей ситуации в сельском хозяйстве.
13. Проведенные исследования позволили повысить эффективность фитопрепаратов на основе хитозана полифракционного состава, как надежных многоцелевых препаратов, практически не вызывающих осложнений и нежелательных побочных явлений.
14. Основной задачей производств, выпускающих БАВ является обеспечение качества препарата, безопасности изготовителя, потребителя и окружающей среды.
15. Использование хитозана, препаратов на его основе в качестве добавок к питательным средам позволило разработать и практически осуществить современную технологию производства вакцин (Болезни Марека) и гипериммунных сывороток против гемофиллеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней.
6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ
ДИССЕРТАЦИИ
1. , Шинкарев СМ., , Чулков А. К., , Шмидт свойства хитозана и их применение при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных и птиц. //Сборник научных трудов ГОУ Прикаспийского зонального. научно-исследовательского ветеринарного института «Основные проблемы ветеринарной медицины и стратегия борьбы с заболеваниями с/х животных в современных условиях», МахачкалаС.251-254.
2., , Крыжановская Е. В., Чулков антитела как критерий напряженности иммунитета птиц к болезни Марека /Мат. Ш межд. ветеринарного конгресса по птицеводству, - Москва,. - С. 121-125.
3. , , Чулков бивалентная вакцина против болезни Марека // /Мат. Ш межд. ветеринарного конгресса по птицеводству, - Москва,. - С. 125-129..
4., , Крыжановская Е. В., Чулков и очистка вируса аденовирусной инфекции крупного рогатого скота //Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. - С. 129-131.
5. , , Чулков стимулирует усиление вирулентных свойств вируса болезни
Марека // /Мат. Ш межд. ветеринарного конгресса по птицеводству, - Москва, -
С.131-134.
6. , , Чулкова свойства неинфекционных препаратов вируса герпеса индейки // /Мат. Ш межд. ветеринарного конгресса по птицеводству, - Москва, - С.135-136.
7. , , Чулков компонентов тест-системы ИФА для определения уровня антител к возбудителю аденовирусной инфекции крупного рогатого скота //Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково.-2007.-С. 132-137.
8. , , Чулков тест-системы ИФА для изучения иммунологической активности вакцин против пастереллеза животных //Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. - С.234-238.
9., , Крыжановская Е. В., , Малик ние гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастерелле-
за на свиньях-продуцентах //Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. - С.250-253.
10. , , Крыжановская применения хитозана на фоне вакцинации телят против пастереллеза //Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. - С.266-270.
11., , Шинкарев СМ., , Крыжановская антимикробного эффекта хитозана в отношении возбудителей туберкулеза // Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. - С.270-275.
12. , , Самуй-ленко А. Я., Крыжановская in vitro антагонистической активности и чувствительности к антибиотикам бактерий-пробиотиков // Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С.284-289.
13., , Крыжановская биологические добавки для выращивания бройлерных цыплят // Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. - С.292-295.
14. , , Крыжановская испытания автолиза хлебопекарных дрож-
жей в составе питательной среды при производстве препарата «Ларвиоль-паста» // Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. - С.295-297.
15, , Крыжановская -дрожжевой гидролизат - эффективная лечебно-профилактическая подкормка для пчел» // Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. —С.314-316.
16. , , Крыжановская лечебно-профилактических кормовых белковых добавок-синбиотиков для сельского хозяйства // Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. - С.373-376.
17. , , Крыжановская иммуномодулирующих свойств сукцината хитозана // Ветеринария и кормление, №5. - М.:, 2007. - С. 12-13.
18. , , Крыжановская активность хитозана // Ветеринария и кормление, №5. - М.:, 2007. - С. 10-12.
19. , , Шинкарев СМ., А, , . Антимикробный эффект кислоторастворимого хитозана // Ветеринария и кормление, №5. - М.:, 2007. - С.
20. , , Чулков обеспечения безопасного производства иммунобиотехнологических ветеринарных препаратов //Тезисы доклада Ш Международного ветеринарного конгресса по птицеводству. М.2007. - С.59-60.
21. , ,.Шинкарев СМ, , Хабаров и адъювантные свойства хитозана. /Журн. «Ветеринария и кормление» № 4. – 2008. – С. 34-35.
22. Крыжановская активные вещества в ветеринарии //Достижения науки и техники агропромышленного комплекса, №8. –М.-2008.-С.30-31.
23. В, , Шинкарев СМ., , . Изучение антимикробного действия низкомолекулярных фракций хитозана на микобактерии. /Журн. «Ветеринария и кормление» № 6. – 2008. – С.31-33.
24. , , Школьников
Е. Э., , . Способ увеличения выхода культуры клеток из перепелиных эмбрионов.
25. , , Крыжановская Е. В.. «Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза и пастереллеза свиней». Заявка на патент № от 1.09.2006г. Н.Д. Заявка на патент № от 1.09.2006 г.
26. ,. Ф, ,.Гринь СА, ,., , . «Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококоза и пастереллеза свиней». Заявка на патент № от 01.01.2001г.
27. , , Рубан влияния хитозана на микроорганизмы //Ветеринария и кормление, №4. – М.:2008. –С.34-35. /Журн. «Достижения науки и техники в АПК» № 11. – 2008. – С. 45-46.
28. , , Гринь антимикробного действия хитозана //Сельскохозяйственная биология, №6. -2008.
29. , , Фролова ранозаживающих свойств хитозана //Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук, -№6. – 2008. –С.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 |
