Анализ и стандартизация нового лекарственного препарата с анксиолитическим действием ГБ-115 (стр. 3 )

формы ГБ-115

Твердая дозированная лекарственная форма ГБ-115 – таблетки дозировкой 1 мг со средней массой 102 мг. Внешний вид – таблетки белого или почти белого цвета плоскоцилиндрической формы. Отклонения от средней массы образцов таблеток ГБ-115 не превышало установленных ГФ XI норм: ± 7,5 %. Время распадаемости не превышало 5 минут, что также соответствовало нормам, установленным ГФ XI (вып. 2. стр. 154).

Определение показателя «Посторонние примеси» в таблетках ГБ-115

Определение показателя «Посторонние примеси» в таблетках ГБ-115 проводили методом ВЭЖХ в условиях, подобранных для субстанции ГБ-115.

На хроматограммах извлечений из плацебо в указанных условиях были обнаружены пики со временами удерживания около 1,5 – 2,5 мин

Анализ модельной смеси таблеток ГБ-115 и свидетелей известных примесей показал, что в выбранных условиях хроматографирования не наблюдается разделения ТХ и пиков извлечения из плацебо (рис. 7). Однако поскольку ни в одном из образцов субстанции этой примеси обнаружено не было, мы сочли возможным ее содержание в таблетках не определять.

Рис. 7. Хроматограмма извлечения из таблеток ГБ-115 (концентрация 1 мг/мл) в смеси с примесями (концентрация каждого соединения 0,01 мг/мл): 1 - пики извлечения из плацебо, 2 – ФГГ, 3 - ГБ-115, 4 – ФГК, 5 - ГБ-111

В указанных условиях был проведен анализ образцов лекарственной формы ГБ-115. Содержание единичной примеси оценивали путем сравнения площадей примесей и раствора РСО ГБ-115 с концентрацией 0,01 мг/мл (1% от концентрации ГБ-115 в испытуемом растворе). В образцах таблеток ГБ-115 было обнаружено до трех примесей, в их числе примесь с относительным временем удерживания 0,8 (ФГГ). Содержание единичной примеси не превышало 0,44%, суммарное содержание примесей составляло не более 0,72%.

Проверку пригодности хроматографической системы проводили также как и при анализе субстанции.

Количественное определение ГБ-115 в таблетках

Разработку методики количественного определения ГБ-115 в таблетках с помощью УФ-СФМ проводили на модельных смесях ГБ-115 и плацебо (извлечения в спирте этиловом 95%) при аналитической длине волны 282 нм, рабочая концентрации 0,05 мг/мл.

Для проверки точности и сходимости методики готовили модельные смеси субстанции ГБ-115 и плацебо с концентрацией ГБ-115 0,05 мг/мл ± 20% (от 0,04 до 0,06 мг/мл) (табл. 7). Содержание плацебо в растворах эквивалентно содержанию в таблетке. Концентрация раствора РСО ГБ-115 – 0,05 мг/мл.

Таблица 7

Результаты количественного определения ГБ-115 в модельных смесях (УФ-спектрофотометрия)

Взято ГБ-115, г (m1)	Найдено ГБ-115, г (m2)	Абсолютная ошибка, г (d= m2–m1)	Относительная ошибка, % Х = (d´100/m1)	Найдено ГБ-115 (в % от m1)	Метрологические характеристики (P=95%, n=9)
0,0399	0,0402	0,0003	0,75	100,75	Хср.= 100,66% S = 0,67 Sxср=0,22 =0,50 = 0,5%
0,0426	0,0432	0,0006	1,4	101,41
0,0452	0,0458	0,0006	1,3	101,3
0.0478	0,0483	0,0005	1	101,05
0,0499	0,0504	0,0005	1	101
0,0523	0,0525	0,0002	0,38	100,4
0,0550	0,0554	0,0004	0,73	100,7
0.0574	0,0570	-0,0004	0,7	99,3
0,0604	0,0604	0	0	100

По разработанной методике были проанализированы серийные образцы таблеток. Содержание ГБ-115 в серийных образцах таблеток составляло от 0,9887 до 1,0142 мг в таблетке. Относительная ошибка не превышала 1,7%.

В качестве альтернативного метода количественного определения ГБ-115 в таблетках нами был выбран метод ВЭЖХ.

Анализ проводили в тех же условиях, что и определение посторонних примесей, за исключением аналитической длины волны, которая составила 282 нм. При этой длине волны поглощения электромагнитного излучения извлечением из плацебо практически не наблюдалось.

На модельных смесях ГБ-115 и плацебо (содержание эквивалентно содержанию в таблетке) с концентрацией ГБ-115 0,1 мг/мл ± 20% (от 0,08 до 0,12 мг/мл) было показано, что относительная ошибка единичного определения не превышает 1,6% (таблица 8).

По разработанной методике были проанализированы серийные образцы ГБ-115, содержание ГБ-115 в лекарственной форме при определении методом ВЭЖХ составляло от 0,9930 до 1,0130 мг в таблетке.

Таблица 8

Результаты количественного определения ГБ-115 в модельных смесях (ВЭЖХ)

Взято ГБ-115, г (m1)	Найдено ГБ-115, г (m2)	Абсолютная ошибка, г (d= m2–m1)	Относительная ошибка, % Х = (d´100/m1)	Найдено ГБ-115 (в % от m1)	Метрологические характеристики (P=95%, n=9)
0,0082	0,00826	+0,00006	0,73	100,73	Хср=99,97% S=0,86 Sxср=0,29 =0,66 = 0,66
0,0085	0,00843	-0,00007	0,82	99,18
0,0090	0,00899	-0,00001	0,11	99,89
0,0096	0,00955	-0,00005	0,52	100,52
0,0099	0,00994	+0,00004	0,40	100,40
0,0105	0,01043	-0,00007	0,67	99,33
0,0111	0,01093	-0,00017	1,53	98,47
0,0118	0,01196	+0,00016	1,36	101,36
0,0121	0,01208	-0,00002	0,17	99,83

Определение показателя «Однородность дозирования» таблеток ГБ-115

Определение однородности дозирования таблеток ГБ-115 было проведено с помощью метода УФ-спектрофотометрии в условиях количественного определения. Отклонения в однородности дозирования ГБ-115 не превышали установленных ГФ XI норм (не более ± 15%).

Определение показателя «Растворение» таблеток ГБ-115

Субстанция ГБ-115 нерастворима в воде и 0,1М растворах хлористоводородной кислоты, в качестве среды растворения использовали 0,5% раствор натрия лаурилсульфата в воде. Анализ проводили на приборе «лопастная мешалка», при 50 оборотах в минуту, объем среды растворения – 500 мл, температура 37±0,5 °С. Количественное определение ГБ-115 проводили методом ВЭЖХ. Из-за низкой дозировки ГБ-115 чувствительность методики количественного определения при длине волны 282 нм была недостаточной, в качестве аналитической была выбрана длина волны 230 нм.

Линейная зависимость площади пика растворов ГБ-115 в 0,5% растворе натрия лаурилсульфата от концентрации наблюдалась в интервале от 0,001 до 0,05 мг/мл (коэффициент корреляции 0,9998), рабочая концентрация 0,01 мг/мл. На модельных смесях ГБ-115 и плацебо с концентрацией ГБ-115 от 0,008 до 0,012 мг/мл показано, что относительная ошибка определения не превышает 1,6%.

При определении показателя «Растворение» серийных образцов таблеток ГБ-115 в указанных условиях за 45 минут из таблеток высвобождалось более 75% ГБ-115 (рис. 8), что соответствует нормам ГФ СССР XI издания.

Рис. 8. Кинетика высвобождения ГБ-115 из таблеток

Установление сроков годности твердой дозированной лекарственной формы ГБ-115

Стабильность таблеток при хранении была изучена методом «ускоренного старения» при 60 ºС в течение срока, эквивалентного 2 годам хранения в естественных условиях. Качество таблеток по всем показателям по истечении срока хранения не изменилось, установлен предварительный срок годности таблеток - 2 года.

В результате проведенных исследований разработаны предварительные нормы качества таблеток ГБ-115 (табл. 9).

Таблица 9

Нормы качества таблеток ГБ-115

Показатели	Метод испытания	Нормы
Описание	Визуально	Таблетки белого или почти белого цвета плоскоцилиндрической формы
Подлинность	УФ-спектрофотометрия	УФ-спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 230 до 300 нм должен соответствовать УФ-спектру поглощения раствора РСО ГБ-115
ВЭЖХ	Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно совпадать со временем удерживания пика ГБ-115 на хроматограмме раствора РСО
Средняя масса	ГФ ХI, вып.2, с.154	От 101,9 мг до 103,4 мг (102 мг ± 7,5%)
Отклонение от средней массы	ГФ ХI, вып.2, с.154	18/20: ± 7,5%; 2/20: ± 15%
Распадаемость	ГФ ХI, вып.2, с.154	Не более 15 мин
Однородность дозирования	УФ-спектрофотометрия	10/10: ±15% или 28/30: ±15%, 0/30: более чем ±25%
Посторонние примеси	ВЭЖХ	Единичной примеси: не более 0,5%; Сумма примесей: не более 1%
Микробиологическая чистота	ГФ ХII, часть 1, с.160	Категория 3А
Растворение	ГФ ХI, вып.2, с.154 и ОФС ,ВЭЖХ	Не менее 75% за 45 минут
Количественное определение	ВЭЖХ	от 0,9930 мг до 1,0130 мг (0,102±7,5%)
Срок годности		2 года

ВЫВОДЫ

1.  Изучены физико-химические свойства и спектральные характеристики фармакопейных образцов субстанции ГБ-115 методами ИК-, УФ - и ПМР-спектроскопии. Показана возможность использования этих методов для контроля качества субстанции ГБ-115.

2.  Изучена хроматографическая подвижность ГБ-115, исходного (ФГК) и промежуточных (ТХ, ФГГ и ГБ-111) продуктов синтеза методами тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показано преимущество более селективного и чувствительного метода ВЭЖХ при определении содержания посторонних примесей в субстанции ГБ-115.

3.  Проведены исследования по разработке способа количественного определения субстанции ГБ-115 с помощью химических и инструментальных методов анализа. Показана возможность применения метода определения общего азота по Къельдалю, а также методов УФ-спектрофотометрии и ВЭЖХ для количественного определения ГБ-115 в субстанции.

4.  Определены основные фармакопейные показатели качества твердой дозированной лекарственной формы (таблеток) ГБ-115. Изучена хроматографическая подвижность препарата с помощью метода ВЭЖХ. Показана возможность применения метода ВЭЖХ для анализа посторонних примесей, количественного определения и определения однородности дозирования таблеток ГБ-115.

5.  Разработана методика определения показателя «Растворение» таблеток ГБ-115 в среде 0,5% раствора натрия лаурилсульфата. Установлено, что за 45 минут из таблеток высвобождалось более 75% ГБ-115.

6.  Изучена стабильность субстанции и таблеток ГБ-115 под действием факторов окружающей среды. Показано, что субстанция ГБ-115 не гигроскопична, относительно устойчива к окислению, но неустойчива к действию солнечного света и к щелочному гидролизу. Таблетки ГБ-115 неустойчивы к условиям повышенной влажности и действию солнечного света.

7.  В результате изучения стабильности при хранении субстанции и таблеток ГБ-115 методом «ускоренного хранения» определены предварительные сроки их годности – 2 года.

8.  Установлены нормы качества субстанции и твердой дозированной лекарственной формы ГБ-115. На основании проведенных исследований составлены проекты фармакопейных статей предприятия на субстанцию и твердую дозированную лекарственную форму ГБ-115.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1.  , , Пятин методик анализа субстанции нового анксиолитика пептидной структуры // Тезисы докладов XVII Российского Национального конгресса «Человек и лекарство» - Москва, 2010 . с. 637

2.  , , Пятин хроматографического поведения препарата ГБ-115// Тез. докл.5-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» Москва, 2010, с. 49-50

3.  , , Дуденкова физико-химических свойств и разработка методик анализа субстанции нового оригинального анксиолитического средства ГБ-115// Химико-фармацевтический журнал, 2011, т. 45, № 10, стр. 53-56

4.  , , , Турчинская методик анализа твердой дозированной лекарственной формы ГБ-115// Химико-фармацевтический журнал, 2011, т. 45, № 12, стр. 27-31

5.  , , Иванов субстанции нового анксиолитика// Журнал Фармация, 2012, №1, с. 6-8