Анализ мочи с применением современных методов исследования (стр. 3 )

Эпителиальные цилиндры представляют собой слущивающиеся и склеивающиеся друг с другом эпителиальные клетки канальцев. Наличие эпителиальных цилиндров указывает на поражение тубулярного аппарата. Они наблюдаются при нефрозах, в том числе, как правило, в значительном количестве при нефронекрозах. Появление этих цилиндров при нефритах указывает на вовлечение в патологический процесс и канальцевого аппарата. Появление в моче эпителиальных цилиндров всегда указывает на патологический процесс в почках.

Зернистые цилиндры образуются из распавшихся клеток почечного эпителия. Наличие этих цилиндров говорит о дистрофических процессах в канальцах.

Восковидные цилиндры образуются из уплотненных гиалиновых и зернистых цилиндров. Восковидные цилиндры обнаруживаются при тяжелых поражениях паренхимы почек. Чаще встречаются при хронических, но могут быть и при острых поражениях почек.

Эритроцитарные цилиндры образуются из скоплений эритроцитов. Наличие их свидетельствует о почечном происхождении гематурии. Причем эритроцитарные цилиндры наблюдаются не только при воспалительных заболеваниях почек, но и при почечных паренхиматозных кровотечениях.

Лейкоцитарные цилиндры встречаются довольно редко и почти исключительно при пиелонефритах.

Пигментные цилиндры образуются при включении в состав цилиндра пигментов и наблюдаются при миоглобинурии и гемоглобинурии.

Слизь в моче

Слизь выделяется эпителием слизистых оболочек. В норме присутствует в моче в незначительном количестве. При воспалительных процессах содержание слизи в моче повышается. Увеличенное количество слизи в моче может говорить о нарушении правил правильной подготовки к взятию пробы мочи.

Неорганизованный осадок

Неорганизованный осадок мочи состоит из солей, выпавших в осадок в виде кристаллов и аморфных масс. Характер солей зависит от рН мочи и других свойств. Например, при кислой реакции мочи обнаруживаются мочевая кислота, ураты, оксалаты. При щелочной реакции мочи — кальций, фосфаты.

Интерпретация анализа

Особого диагностического значения неорганизованный осадок не имеет. Косвенно можно судить о склонности к мочекаменной болезни.

Бактерии в моче

В норме бактерии в общем анализе мочи отсутствуют.

У здорового человека моча в почках и мочевом пузыре стерильна. При мочеиспускании в неё попадают микробы из нижнего отдела уретры, но их количество не больше 10 000 в 1 мл. Поэтому считается, что бактерии в норме в общем анализе мочи отсутствуют.

Под бактериурией понимается выявление более, чем одной бактерии в поле зрения при микроскопии (качественный метод), что предполагает рост колоний в культуре, превышающий 100 000 бактерий в 1 мл (количественный метод). Понятно, что посев мочи — это золотой стандарт диагностики инфекций мочевыводящей системы. Чувствительность различных индикаторных полосок (нитритный тест) составляет примерно около 70% всех случаев бактериурии, поэтому отрицательный результат при использовании этих полосок не исключает бактериурии.

Бактериурия – не абсолютно достоверное свидетельство воспалительного процесса в мочевыводящей системе. Решающее значение имеет их количественное содержание. Наличие в 1 мл мочи взрослого человека 1х105/При исследовании общего анализа мочи констатируют только сам факт наличия бактериурии. Определить вид бактерий и оценить уровень бактериурии, а также выявить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам можно с помощью бактериологического посева мочи.

Интерпретация анализа

Появление в общем анализе мочи бактерий и лейкоцитов на фоне каких-либо симптомов (например, дизурия или лихорадка) свидетельствует о клинически проявляющейся мочевой инфекции. Данное состояние является показанием для проведения антибактериальной терапии.

Бессимптомная бактериурия

Наличие в моче бактерий (даже в сочетании с лейкоцитами) при отсутствии жалоб расценивается как бессимптомная бактериурия. Подобное состояние часто встречается при органических изменениях мочевых путей; у женщин, ведущих беспорядочную половую жизнь; у пожилых. Бессимптомная бактериурия повышает риск инфекции мочевых путей, особенно при беременности (инфекция развивается в 40% случаев).

Тактический алгоритм при бессимптомной бактериурии

Новорождённые, дошкольники — исключить пузырно-мочеточниковый рефлюкс, провести антимикробное лечение.

Школьникам и пожилым пациентам (старше 60 лет) в отсутствие органических изменений мочевых путей лечение не проводят.

Небеременные женщины — однократный приём антимикробного препарата. Обследование проводят только при хронической инфекции.

Мужчины моложе 60 лет — исключить хронический простатит, половые инфекции, обследовать и провести антимикробное лечение.

Пациентам с постоянным мочевым катетером антибактериальное лечение бессимптомной бактериурии не проводят.

Обязательные показания к лечению: беременность; органические изменения мочевых путей; перед инструментальными исследованиями и операциями на мочевых путях или половых органах; сохраняющаяся бактериурия после хирургических вмешательств на мочевых путях или половых органах или после удаления мочевого катетера; повторная катетеризация мочевого пузыря. Эмпирическая терапия не рекомендуется, желательно определить возбудитель и его чувствительность.

Грибы рода Candida

Грибы рода Candida — нередкие обитатели влагалища, которые могут попадать в мочевой пузырь. Их выявление не обязательно служит показанием к противогрибковой терапии. Основную роль в лечении играет устранение предрасполагающих факторов (иммунодефицит, сахарный диабет, мочевой катетер). Дрожжевые грибы в норме отсутствуют; обнаруживаются при глюкозурии, нерациональной антибактериальной терапии, длительном хранении мочи. При наличии клинических проявлений назначают флуконазол 100 мг внутрь 1 раз в день на 3 суток. 

Количественные методы исследования осадка мочи

Количественные методы определения осадка мочи позволяют с большей точностью определить характер мочевого осадка, что позволяет выявить скрытые формы заболевания. В клинической практике распространение получила проба Нечипоренко — определение форменных элементов (лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров) в 1 мл мочи, взятом в середине акта мочеиспускания из утренней порции. Нормальные значения: лейкоцитов до 2000 в 1 мл, эритроцитов до 1000 в 1 мл, цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более 20 в 1 мл. Перед началом анализа обязательно определяют рН мочи. При наличии щелочной реакции проба может быть недостоверной (происходит частичный распад клеточных элементов). Преимущество метода Нечипоренко перед другими тестами (Аддиса-Каковского, Амбюрже) состоит в том, что берётся малое количество свежевыпущенной мочи, время не регламентировано.

Как правило, исследование мочи по Нечипоренко проводится после обнаружения отклонений в общем анализе мочи. С помощью данного анализа врач выявляет наличие в моче некоторых элементов, указывающих на заболевания почек и мочевыводящих путей (а именно, лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров).

Обсуждение существующих количественных методов проведения общего анализа мочи

Как отмечалось выше, количественные методы в проведении общего анализа мочи касаются выявления биохимических, биологических и неорганических субстанций.

Для оценки содержания биохимических компонентов мочи используются турбодиметрические, колориметрические иммунохимические методы и методы тест - полосок. На полосках в качестве индикатора чаще всего используется различные красители.

Более детально следует остановиться на этих методах в аспекте оценки количества белка в моче, так как в отсутствии биохимической лаборатории при ЛПУ, белок в общеклиническом анализе мочи определяется без учета существующих на сегодняшний день стандартов.

1.Турбидиметрические методы

Турбидиметрические методы основаны на преципитации белка различными агентами: сульфосалициловой кислотой (ССК), трихлоруксусной кислотой (ТХУ), бензетоний хлоридом. Метод с использованием бензетоний хлорида обеспечивает получение стойкой суспензии в щелочной среде. По своей чувствительности он сравним с биуретовым, а результаты определения белка мало зависят от соотношения альбумина и глобулина в пробе. Метод адаптирован к автоматическому анализатору, но из-за низкой чувствительности он не нашел широкого применения в лабораторной практике. ТХУ, применяемая для преципитации белка, обеспечивает меньшую по сравнению с ССК чувствительность, и имеет высокую стоимость реактива, поэтому ее применение в клинических лабораториях ограничено. Метод ССК, разработанный Kingsburi F. B. c соавторами в 1926 г., и до сих пор остается самым распространенным в России, благодаря простоте выполнения анализа, доступности реактива, возможности приготовления реагента в лабораторных условиях и, главное - экономичности. В основе всех турбидиметрических методов лежит измерение изменения светопропускания реакционной смеси, обусловленное рассеянием света (образованием мутности). При этом мутность образуется за счет следующего процесса: молекулы белков мочи в кислой среде денатурируют, переходя из компактной глобулярной формы в рыхлую, нитчатую. При этом у белков резко возрастает способность к образованию конгломератов (реакция преципитации). Отдельные молекулы белка имеют размеры меньше длины волны видимого света, поэтому очень слабо его рассеивают. Эффективность рассеивания резко возрастает, когда размеры образующихся конгломератов молекул белка приближаются к величине 0,6 мкм (длина волны зондирующего света). Чем больше концентрация белка в моче, тем большее количество таких конгломератов образуется. Время окончания реакции зависит от концентрации белка, и эта зависимость сложная. На начальном этапе реакции образуется определенное количество мелких белковых частиц, затем они начинают слипаться в более крупные, при этом происходит два процесса: образования конгломератов и их оседания. В каждый конкретный момент времени мы имеем в реакционной смеси определенное количество центров рассеивания с различными размерами. Изменение (уменьшение) абсорбции после достижения конечной точки процесса образования преципитатов обусловлено их осаждением. Возникающая аналитическая погрешность тем больше, чем выше концентрация белка и чем дальше отстоит фиксированное время измерения от процесса завершения реакции. При низких концентрациях белка скорость осаждения замедлена, и ранняя остановка реакции приводит к заниженным результатам, и как следствие этого, нарушается линейная зависимость между абсорбцией и концентрацией белка. Поскольку скорость осаждения преципитатов различна, воспроизводимость результатов невелика. Устойчивость преципитатов зависит от температуры и от белкового спектра образца: уменьшение доли альбумина увеличивает устойчивость преципитатов во взвешенном состоянии. Как показали исследования, именно различия в структуре белков могут служить основой для достоверной оценки их общей концентрации. ССК определяет в основном альбумин, в присутствии глобулинов заниженным оказывается не только общее содержание белка в пробе, но и концентрация находящегося в ней альбумина. Белковый спектр мочи в норме и патологии обычно содержит альбумин и глобулин (А/Г) в отношении = 0,60-3,0; поэтому при исследовании мочи результаты получаются правильными только при близком соответствии белкового состава мочи белковому составу калибратора. Белковый спектр мочи, представленный одним альбумином, встречается крайне редко – только при нефротическом типе заболевания, поэтому при использовании альбумина в качестве калибратора результаты обычно занижены, и ошибка определения может быть трехкратной. Не вызывает сомнения, что такие погрешности не допустимы. Зависимость ошибки определения от отношения А/Г может привести к тому, что у двух пациентов с совершенно различным содержанием белка в моче, лабораторно будут определяться одни и те же концентрации. Все вышеизложенное указывает на то, что в существующем ныне виде метод ССК не приемлем для оценки не только макропротеинурии, но, что особенно важно – и микропроеинурии. Чтобы уменьшить ошибку до естественной аналитической вариации белок целесообразно определять либо двумя разными методами по одному калибратору, либо проводить расчет концентрации белка по двум калибраторам, один из которых приготовлен на основе человеческой сыворотки с минимальным значением отношения А/Г, другой – водный раствор альбумина. Принцип подхода состоит в том, что разница между выявленными концентрациями зависит от отношения А/Г, зная которое можно вычислить ошибку определения по соответствующей формуле. Применение простейшего математического аппарата позволяет минимизировать аналитическую ошибку, возникающую при определении концентрации белка в образцах с неизвестным отношением А/Г. Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Основные факторы, приводящие к получению некорректных результатов при использовании ССК:

Большое стандартное отношение мочи к реагенту ССК, составляющее 1:3, приводит к влиянию различных компонентов мочи на результат анализа;

Интерференция многих лекарственных препаратов, приводящая к получению «ложноположительных» или «ложноотрицательных» результатов.

Замеряемое поглощение исследуемой пробы является результирующей двух одновременно протекающих процессов: образования и укрупнения конгломератов и их седиментации, результат которого отражает только определенное временное состояние исследуемой пробы, а не истинную концентрацию белка;

Различие белкового состава мочи и калибратора – альбумина;

Мутность, образующаяся из альбумина, в 4 раза выше мутности, образующейся из глобулинов;

Присутствие в моче легких цепей иммуноглобулинов: некоторые пробы остаются полностью растворимыми после преципитации всех остальных форм белков.

Ошибочные результаты анализа приводят к ошибочному диагнозу и неправильному лечению больного. Метод не пригоден даже для качественного определения белка, поэтому в развитых странах он практически не применяется, но в России он все еще самый распространенный метод для определения белка в моче в клинических лабораториях.

2. Колориметрические методы

К группе колориметрических методов определения белка относятся методы Лоури, биуретовый и методы, основанные на связывании белка с органическими красителями.

Методы Лоури и биуретовый метод, ставший уже классическим, обладает высокой чувствительностью: ~ 10 мг/л и широкой линейной областью измерения - до 1 г/л. Но результаты анализа значительно зависят от аминокислотного состава - интенсивность окрашивания различных белков может различаться в 300 и более раз, поэтому метод не нашел широкого применения в практике. Биуретовый метод практически не зависит от аминокислотного состава белков, это реакция на пептидные связи белка: для протекания реакции достаточно наличие дух пептидных связей в молекуле исследуемого вещества, т. е. в реакцию могут вступать низкомолекулярные белки и трипептиды. Метод мало чувствителен к присутствующим в пробе различным соединениям. Линейная зависимость примерно в 10 раз шире, чем у метода Лоури, а чувствительность - в ~ 10 раз ниже. Из-за низкой чувствительности метод не пригоден для определения низких концентраций белка. Чувствительность метода может быть повышена различными модификациями, одна из которых заключается в осаждении белка и его концентрировании. Биуретовый метод с осаждением и концентрированием белка – биурет-ТХУ считается референсным методом для определения белка в моче, но из-за большой трудоемкости анализа для рутинных исследований в клинических лабораториях практически не применяется.

Одними из последних для определения белка в моче являются методы, основанные на связывании белка с органическими красителями. Методы привлекают к себе внимание благодаря простоте и быстроте исполнения, высокой чувствительности. В ряде исследований было замечено, что при связывании белка с красителями спектр поглощения последнего меняется. Эти данные натолкнули на мысль использовать указанные изменения как основу количественного определения белка без его выделения из растворов. Принцип методов основан на взаимодействии белка с органическим красителем, в результате чего образуется окрашенный комплекс, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации белка в пробе. Методы выгодно отличаются от классических по ряду характеристик и при правильном подборе адекватного белка для калибратора - они весьма перспективны для использования в лабораторной практике. Опыт использования красителей выявил у предложенных методик некоторые недостатки, из которых, прежде всего, следует отметить различия в способности разных белков связывать красители, что, впрочем, характерно и для классических методов. Но, если различия в определениях классическими методами легко объяснить, то механизм реакций, лежащих в основе методов связывания красителей, пока еще недостаточно изучен. Важную роль для этих методов играют pН среды, молярная масса белка и другие факторы, обеспечивающие образование комплекса белок-краситель:- ван-дер-ваальсовые силы, электростатическое взаимодействие с аминогруппами, участие в реакции основных аминокислот и т. д. Изучение механизма реакций, лежащих в основе связывания красителей с белками, поможет более точно понять причины различий в способности разных белков к связыванию и тем самым оценить границы применимости методов. Другим существенным недостатком методов является нарушение пропорциональной зависимости между концентрацией некоторых белков и оптической плотностью комплекса белок-краситель. К таким методам относятся методы основанные на связывании белка с кумасси бриллиантовым голубым, с бромфеноловым синим, с пирогаллоловым красным.

Метод связывания белка с пирогаллоловым красным был предложен в 1983 г Fujita Y. с соавторами. В настоящее время это метод занял одно из первых мест среди методов определения белка в моче, постепенно вытесняя все другие. Коммерческие наборы реагентов с использованием ПГК выпускает множество фирм, среди которых Baуer Diagnostics, Beckman, Biodirect, Biocon Diagnostik, Bio-Rad Laboratories, Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH, Sigma и другие. Оригинальный метод основывается на связывании белка с красителем в кислой среде (рН=2,5). Комплекс устойчив к воздействию многих соединений, в том числе лекарственных препаратов, солей, оснований, кислот. Поглощение комплекса глобулин-ПГК-молибдат составляет ~ 70 % от величины поглощения комплекса альбумин-ПГК-молибдат. Для легких цепей иммуноглобулинов эта величина – 52-68 %. Широкое применение в лабораторной практике метод получил после его модификации Watanabe N. с соавторами.. Предложенная модификация позволила расширить линейную область измерения до 2 г/л, которой не обладают методы, использующие другие красители; при этом правильность и воспроизводимость модифицированного метода соответствуют клиническим требованиям. Авторы подобрали состав буферного раствора и оптимизировали концентрации ПГК и молибдата таким образом, что реагент при минимальной абсорбции обеспечивает максимальную чувствительность определения. Влияние оксалатов, присутствующих в моче в концентрации более 3 ммоль/л и понижающих абсорбцию комплекса, устранили введением в реагент соответствующих компонентов. При взаимодействии ПГК с белком пик поглощения красителя сдвигается с 467 нм на 598 нм. Максимальная абсорбция альбуминового комплекса наблюдается при рН 2,5-3,0; глобулинового - при рН 2,25 - 2,50. Оптическая плотность повышается при повышении температуры от 12 до 25°С и остается стабильной при ее изменении от 25 до 37°С. Аналитические характеристики метода: время выхода оптической плотности на постоянные величины для рутинных анализов – 10 мин; воспроизводимость результатов в диапазоне концентраций белка от 0,09 до 4,11 г/л - 1-3 %; правильность определения альбумина - 97-102%, глобулина - 69-72 %; чувствительность метода - 30-40 мг/л; стабильность реагента при хранении в защищенном от света месте - 6 мес. Вещества, присутствующие в моче, дают суммарную ошибку определения менее 2 %. Нормальные величины белка в моче для взрослых – 28-141 мг/сут. Даже с проблемами, создаваемыми различной чувствительностью красителя к различным белкам, данный метод является лучшим среди других методов; прост и удобен для ручного исполнения в клинических лабораториях и для адаптации на автоматических анализаторах. Краситель ПГК не сорбируется на стенках кювет до концентрации белка 5 г/л, поэтому реагент применим и для использования на автоматических анализаторах; метод адаптирован к анализаторам: Hitachi 717; Hitachi 726; Cobas Bio centrifugal и др. При различных заболеваниях белковый состав мочи различен: при нефротическом синдроме в моче содержится в основном альбумин; при миеломе – легкие цепи иммуноглобулинов (белки Bence Jones); тубулярной нефропатии – низкомолекулярные белки. Состав белков при этих заболеваниях отличается различным соотношением альбуминов и глобулинов (А/Г). В этой связи проведено изучение влияния альбуминов и глобулинов в образцах с различным их отношением (А/Г) на результат анализа, а обнаруженные закономерности при этом оценены методами математической логики. Правильные результаты получены лишь в том случае, когда отношение А/Г анализируемого образца соответствовало отношению А/Г калибратора. Влияние белкового спектра на аналитическую погрешность в значительной степени зависит от аминокислотного состава белков: альбумин и глобулины значительно различаются по содержанию некоторых аминокислот - глутамина, серина триптофана, фенилаланина и цистеина. Увеличение доли альбумина при неизменной концентрации общего белка сопровождается возрастанием оптической плотности во всем диапазоне концентраций. Достоверные результаты с реагентом ПГК получаются при условии, что отношение А/Г калибратора и опытных проб > 2; при меньшем отношении ошибка определения резко возрастает. При соблюдении этих условий метод ПГК является лучшим среди методов Лоури, ССК, КБГ. Для устранения различной чувствительности ПГК к альбумину, глобулину и другим белкам и, таким образом, выравнивания результатов при анализе любых белков, не зависимо от их состава, предлагается добавлять к реагенту сульфододецилсульфат (СДС). Взаимодействие ПГК с белками осуществляется через связывание аминогрупп основных аминокислот с сульфогруппами красителя. При добавлении СДС происходит конкуренция между ПГК и СДС за связывание аминокислотных радикалов с сульфогруппами; кроме этого, СДС раскручивает полипептидные цепи и высвобождает дополнительные аминогруппы, которые вступают в реакцию с ПГК. Таким образом, введение в реагент СДС нивелируют чувствительность красителя к различным белкам. Концентрацию СДС подбирали для выравнивания чувствительности ПГК именно к альбумину и глобулину, так как именно они являются основными белками мочи; при этом удовлетворительной оказалась правильность определения и других белков. Изучение влияния состава белка на его определение методами ПГК и ПГК-СДС показало, что в модельных пробах, содержащих альбумин и γ-глобулин с отношением альбумина к глобулину от 0 до 10, открытие белка обоими методами было близким: 79±2,2 и 77±2,1 и практически не зависело от отношения А/Г. В разбавленной миеломной сыворотке крови (А/Г от 0,39 до 2,35), имеющей гетерогенный белковый состав и содержащий альбумин, γ-1, γ-2 глобулины, легкие цепи иммуноглобулинов (моноклональных и /или поликлональных), открытие было различно: для ПГК – 63%; ПГК-СДС – 83%, поэтому авторы рекомендуют именно его для определения белка в моче. Поскольку белковый состав индивидуального образца мочи при рутинных исследованиях установить нереально, чаще всего в качестве белка для калибратора используют альбумин, сознавая при этом, что результаты будут занижены, поскольку глобулины практически всегда присутствуют в моче. Для нивелирования различной чувствительности ПГК к разным типам белков кроме введения в состав реагента СДС, было предложено использовать калибратор, содержащий альбумин и γ - глобулин, в тех же отношениях, которые присутствуют в реальных образцах мочи. Результаты определения белка в моче с использованием различных красителей существенно различаются. Для сближения результатов, полученных с использованием красителей - КБГ и ПГК, была предпринята попытка выбора адекватного и единого калибратора для обоих методов: в качестве калибратора был выбран альбумин; альбумин с глобулином (А/Г) и лиофилизированный мочевой белок (ЛМБ). Эксперименты показали, что отношение средних значений результатов, полученных методами КБГ и ПГК, с использованием в качестве калибратора альбумина и альбумина с глобулином составило 0,69±0,10; правильность полученных результатов была подтверждена анализом контрольного раствора мочи. Использование в качестве калибратора ЛМБ привело к минимальным различиям результатов на контрольном растворе мочи и на реальных образцах мочи, а отношение результатов, полученных данными методами, составило 0,96. Таким образом, проблема рассогласования результатов, полученных различными методами с использованием в качестве калибратора ЛМБ, практически разрешилась; однако это не устранило различную чувствительность красителей к разным белкам. Для практического использования в клинических лабораториях ЛМБ в качестве калибратора он должен быть коммерчески доступен, стабилен и предварительно аттестован референсным методом, таким, как биурет-ТХУ. Но метод биурет-ТХУ не чувствителен, требует значительного расхода белка для точного определения его концентрации. Следовательно, точность оценки концентрации белка референтным методом сомнительна. В дополнение следует отметить, что коммерческий ЛМБ (мочевой калибратор) дорог, имеет небольшую фасовку – 10 мг, поэтому его применение для рутинных анализов не оправдано. Для сравнения результатов, полученных этими методами с использованием для калибратора альбумина или альбумина с глобулином можно применять отношение КБГ/ПГК, равное 0,69±0,10. Различия между методами, определяющими по-разному концентрацию белка, вызваны несколькими факторами: возможностью определять низкомолекулярные белки и пептиды в дополнение к альбуминам и глобулинам; различной чувствительностью реагентов к разным типам белков; различной интерференцией реагентов с пигментами мочи и соединениями, присутствующими в моче. В этой связи каждый метод имеет свой интервал нормальных величин, отличный от других. Метод ПГК по правильности определения белка в моче сравним с методом сухой химии: краситель - пирокатехин фиолетовый-молибдат, анализатор - Cobas Fara. Результаты, полученные этими методами, строго соответствуют друг другу. Различия результатов наблюдались только при концентрации белка в пробе >2,0 г/л, т. е. за линейной областью определения для обоих методов.

Диагностические полоски

Тестовые поля на полосках представляют собой бумагу, пропитанную стандартным количеством необходимых для реакции компонентов, которые предварительно были стабилизированы с помощью высушивания. Компоненты эти могут быть индикаторами, ферментами илидругими добавочными реагентами. При взаимодействии с исследуемой биологической жидкостью реагенты растворяются и вступают в реакцию, которая проявляется окраской различной интенсивности и пропорциональна концентрации исследуемого параметра.

В настоящее время выпускаются 10-параметровые полоски для использования на анализаторах мочи Clinitek-100, Miditron Junior I, II, Aupion mini AM-4290, и полоски серии H для использования на анализаторах мочи H-серии, которые производятся компанией Dirui. Тестируемые параметры: Глюкоза, удельный вес, рH, белок, билирубин, уробилиноген, нитриты, лейкоциты, кровь, кетоны и аскорбиновая кислота (витамин С). Принцип действия полосок одинаков, но для каждого анализатора есть свои нюансы, о которых всегда должен быть осведомлен специалист. Для достоверности результатов следует использовать только те тест-полоски, которые предназначены для данных анализаторов мочи.

Освобождает ли использование тест-полосок от микроскопии?

Если используются 10-параметровые тест-полоски (но не вместо микроскопии), микроскопия не обязательна при определенном сочетании результатов. Французские экспериментаторы доказали, что

использование 10-параметровых тест-полосок для первичного скрининга, может значительно сократить трудовые затраты на традиционную микроскопию (на 62%). Если результаты зон на лейкоциты, кровь, белок, нитриты негативные и рH меньше 7, а моча имеет нормальный вид, то микроскопия не обязательна.

Полоски упакованы в черные пластиковые тубы, что

оберегает полоски от воздействия прямого солнечного света. Полоски также следует уберегать от влаги воздуха.

Стандартизация результатов «сухой химии».

Результат «сухой химии» полуколичественный, для того чтобы подтвердить результат, лаборатория должна провести дополнительные анализы. Главной целью является получение быстрых скрининговых результатов для высвобождения времени на перепроверку патологических образцов. Стабильность результатов лаборатории проверяется с помощью внутрилабораторного контроля качества.

На следующие моменты следует обратить особое внимание:

1. Проблема позитивных результатов. Для того чтобы предотвратить пропуск позитивных образцов присутствия крови в моче при использовании метода «сухой химии» при скрининге, в случае, если оборудование успешно проходит внутрилабораторный контроль качества, не следует уменьшать чувствительность анализатора, чтобы сократить количество образцов для микроскопии.

2. Во время внутрилабораторного контроля из-за использования разного оборудования, разных полосок и разной чувствительности полосок при использовании одного и того же контрольного

материала результаты контроля качества могут различаться. Следовательно, результаты оценки качества всегда должны соответствовать данному виду продукции.

3. Если микроскопия необходима для определения таких параметров, как наличие измененных клеток, камней или песка в моче или для отслеживания результатов терапии, то метод «сухой химии» для

этого не пригоден, и не стоит полагаться только на его результаты.

4. Моча больных с нефропатией или заболеваниями почек не подходит для скрининговой проверки тест-полосками, такие образцы следует тестировать отдельно другими методами, чтобы случайно не

пропустить при скрининге эти образцы.

5. Для клинических выводов, если результат «сухой химии» негативный, не следует избегать микроскопии или других методов для его перепроверки. Если результат «сухой химии» противоречит

результатам микроскопии, трактовку результата следует делать, основываясь на полной клинической картине.

6. При трактовке результатов тестирования нужно учитывать возможное влияние на результаты таких веществ как лекарства, распад клеток, нестабильность ферментов, время хранения образца.

Валидация результатов «сухой химии» необходима, так как для тестирования используются разные системы.

1. Реагентные полоски для определения рH.

Диапазон рH у человека как правило находится в пределах 4.6-7.4.

Принцип реакции: индикаторный метод. В настоящее время для определения рН как правило используются метиловый красный [pН 4.2 (красныйжелтый)], бромкрезоловый зеленый [pН 3.6 (желтыйзеленый)], бромтимоловый синий [pН 6.7 (желтыйсиний)], которые в смеси дают кислотно-щелочной индикатор, позволяющий определять рН в диапазоне 4.5-9.0.

Клиническое значение: в норме моча немного кислая, около 6.0, в зависимости от состава пищи рН может колебаться от 4.5 до 8.0. Оценивать результат рН более сложно, чем результаты по другим параметрам, так как рН мочи может быстро и значительно меняться, к тому же рН здоровых и больных не имеет явных отличий, поэтому отдельно показатель рН не имеет особого значения. Но в совокупности с другими клиническими показателями он может дать важную информацию.

Особое внимание нужно обратить на два главных пункта – свежий образец и проведение процедуры.

a). Бактериальное разложение компонентов мочи при длительном хранении образца может вызывать изменение рН. Как правило, бактерии вырабатывают аммиак, защелачивая при этом образец мочи. Когда бикарбонат и креозот мочи связываются при длительном хранении с окисью углерода из воздуха, это приводит к повышению рН мочи.

b). Иногда бактерии при разложении мочи вырабатывают кислые вещества, что приводит к закислению образца.

c). Во время процедуры тестирования тест-полоска должна погружаться в мочу на определенное время. Это очень важно, так как при слишком длительном погружении у показателя рН мочи появляется тенденция к понижению (закислению).

Дистиллированная вода не может быть отрицательным контролем для тест-полосок, поскольку ионы, присутствующие в ней, отличаются от ионов нормальной мочи.

2. Реагентные полоски для определения удельного веса.

Главными компонентами человеческой мочи являются хлорид натрия и мочевина и, как правило, диапазон удельного веса (УВ) колеблется в пределах 1.015-1.025 г/л.

Принцип реакции: ионообменный метод, полиэлектролит – ко-полимер метил-винилового эфира и малеиновой кислоты является слабокислой (-COOH) ионообменной субстанцией, в моче электролит (M+X-), существующий в виде соли, распадается в моче и высвобождает M+ катион (главной частью является Na + ), с ионным замещением и высвобождением иона H+. H+-ион заставляет рН-индикатор бромтимоловый синий изменять цвет. (Цвет меняется от зеленого, к желтому).

Клиническое значение: УВ отражает способность почек к концентрации мочи. На УВ мочи также влияет возраст, водный режим и потоотделение. Следовательно, для оценки функции почек нужно многократное длительное определение УВ мочи.

Особое внимание:

a). образец мочи должен быть свежим, и не должен содержать щелочи или кислоты (например, хины, пиридина и т. п.), которые влияют на УВ мочи. При рН мочи выше 7, к результату следует добавить 0.005 для нейтрализации влияния щелочной мочи. При использовании анализаторов мочи такая поправка вносится автоматически.

b). Тест-полоски для анализа мочи определяют только концентрацию ионов, и не ионные компоненты мочи (глюкоза, белок) не влияют на результат.

При визуальном считывании результатов тест-полосок, если рН выше 6.5, следует вычесть 0.025 от показания УВ. При автоматическом определении результат пересчитывается автоматически.

3. Реагентные полоски для определения кетонов.

Кетоны мочи – продукт обмена жиров, это общее название ацетоацетата, кетона и β-гидроксибутиловой кислоты. Принцип реакции в щелочных условиях ацетоацетат, кетон и нитроферрицианид натрия реагируют в моче, образуя смесь с амарантом. Чувствительность данного метода: для ацетоацетата 5-10 мг/дл, для кетонов 40-70 мг/дл, β-гидроксибутиловая кислота не определяется. Кетоны и ацетоацетат являются летучими веществами, ацетоацетат разлагается до кетона при нагревании или при загрязнении мочи бактериями, и кетон улетучиваются. Следовательно, образец мочи должен быть свежим, чтобы не получить заниженные или ложноотрицательные результаты.

4.Реагентные полоски для определения глюкозы.

Принцип реакции: ферментная реакция. Главный компонент тест-полосок – глюкозооксидаза, каталаза и рН-индикатор. Во время реакции глюкоза реагирует с глюкозооксидазой, при этом вырабатывается Н2О2, который реагирует с каталазой, в результате чего высвобождается свободный кислород. При этом изменяется цвет индикатора.

В настоящее время во всех тест-полосках используется ферментативный метод, так как он имеет ряд преимуществ: высокую специфичность, чувствительность, короткое время реакции. В различных тест-полосках могут использоваться разные индикаторы.