Анализ мочи с применением современных методов исследования (стр. 4 )

Особое вниманиенеобходимо уделить следующему:

a). Так как реакция тест-полосок с сахаром мочи является окислительно-восстановительной реакцией, то при наличии в образце некоторых сильно восстанавливающих веществ, может приводить к понижению значений или ложноотрицательным результатам. При высоком содержании витамина С в моче результаты могут оказаться заниженными или ложноотрицательными.

b). Антибиотики влияют на результат теста Ban’а (биохимический ручной анализ), но не на результат «сухой химии».

c). В длительно хранящихся образцах мочи сахар мочи может разлагаться бактериями, что может привести к занижению результатов.

d). Высокая концентрация кетонов в моче может приводить к ложноотрицательным результатам, УВ может как завышать, так и занижать чувствительность тест-полосок к сахару, при наличии в моче больших количеств метаболитов препарата «Левадопа» реакция может ограничиваться, что приводит к занижению результатов. При загрязнении мочи сильными окислителями, например, пероксидами или гипохлоритами, могут наблюдаться ложноположительные результаты.

e). Так как используемая в тест-полосках реакция ферментативная; результат зависит от времени и температуры реакции, поэтому время тестирования и указанная температура должны соблюдаться.

Результат на сахар отличается при ручном биохимическом анализе и автоматическом определении в связи с тем, что

основным биохимическим методом определения сахара в моче является метод Бена, который определяет, не только глюкозу, но и другие сахара (фруктозу, мальтозу, лактозу, галактозу и т. д.), что

может давать позитивную реакцию. В полосках используется специфическая реакция на глюкозу, реагент не взаимодействует с другими сахарами, и точность метода выше.

Результаты теста на сахар в моче у пациентов с диабетом иногда могут быть нормальными. Это связано с тем, что диабет вызывается пониженной секрецией инсулина, при этом повышается уровень сахара в крови и происходит перегрузка сахаром почек. При превышении порогового уровня сахар появляется в моче.

При легких формах диабета глюкоза натощак может быть в норме, повышаясь только после еды. При тяжелой форме заболевания сахар в моче тоже появляется при декомпенсированном диабете. У некоторых пациентов наблюдается ситуация склероза почечных клубочков, при этом фильтрация снижается, почечный порог повышается, и это приводит к уменьшению концентрации сахара в моче или даже негативному результату.

5. Реагентные полоски для определения крови.

Принцип реакции: ферментоподобная пероксидазная активность гема в гемоглобине катализирует разложение пероксида, при этом вырабатывается кислород, и цвет индикатора изменяется. Изменение цвета отражает концентрацию крови в моче.

Особое внимание нужно уделять следующему:

a). Нельзя тестировать мочу женщин во время менструации, так как моча может быть загрязнена следами крови.

b). Положительном результате на кровь не всегда подтверждается микроскопией, т. к. в тест-полосках используется химический принцип реакции диоксигеназы, а при микроскопии подсчитывается количество красных кровяных клеток, которые могут разрушаться при нефропатии, низком УВ мочи или высоком рН. При этом гемоглобин высвобождается в мочу, и результат тест-полосок оказывается положительным при видимом отсутствии эритроцитов. Кроме того, если в моче есть миоглобин или некоторые бактерии, это может вести к ложным положительным результатам из-за влияния некоторых ферментов.

c). Наличие в моче фермента теплового шока, миоглобина или некоторых бактерий может

приводить к ложноположительной реакции. Наличие в моче высокой концентрации витамина С приводит к занижению результатов, следовательно, при тестировании данного параметра лучше использовать тест-полоски с определением концентрации витамина С.

6. Реагентные полоски для определения уробилиногена и билирубина.

В кислой среде соль диазония реагирует с уробилиногеном, продуцируя азобилирубин, т. о. изменяя цвет продукта.

Принцип билирубиновой реакции: существуют два типа тест-полосок для билирубина, в одних билирубин и диметиламинобензальдегид реагируют в кислой среде (билирубин реагирует с альдегидом, при этом образуются розово-красные продукты реакции). В других используется соль диазония в кислой среде, билирубин вступает в реакцию с солью диазония с образованием амарантового азокрасителя.

Клиническое значение: тестирование на билирубин имеет важное значение для диагностики закупорки желчевыводящитх путей. Уробилиноген более точно отражает функцию печени;

тестирование на билирубин помогает в диагностике желтухи. Тестирование на порфобилиноген может отражать функцию печени с высокой чувствительностью, поскольку желтуха не проявляется на ранней стадии вирусного гепатита, при этом порфобилиноген в моче уже значительно возрастает.

7. Реагентные полоски для определения белка.

Принцип реакции: «белковая ошибка индикатора», анион специфического индикатора связывается с катионом белка, при ионизации цветная область индикатора изменяет цвет.

Клиническое значение: белок в моче является важным клиническим показателем. Реагентная область полоски более чувствительна к альбумину в моче. В норме у здоровых взрослых людей уровень бека в моче очень низкий (30-130 мг), и, как правило, обычными тестами не обнаруживается. При концентрации белка выше 1 000 мг/л, реакция на белок становится положительной (альбуминурия). Как правило, альбуминурия указывает на поражение клубочков почек и повышение их проницаемости.

8. Реагентные полоски для определения нитритов.

Принцип реакции: Нитриты мочи реагируют с аминобензоларсоновой кислотой или сульфаниламидом реагентной полоски в среде аминобензоларсоновой кислоты, образуя соль диазония, которая вступает в реакцию с нафтилэтилендиамингидрохлорной солью или тетрагидробензол-хинолином реагентной зоны полоски с образованием розовых азосоединений.

Клиническое значение: при инфекциях мочевыводящего тракта некоторые бактерии превращают нитраты, поступающие с пищей, в нитриты. Таким образом, положительный результат на нитриты свидетельствует о наличии инфекции в мочевыводящих путях, которая, как правило, вызывается бактерией Еscherichia coli. Если результат положительный, это указывает на количество бактерий в моче свыше в мл.

Глубина окраски на нитриты не пропорциональна уровню бактериурии.

При тестировании на нитриты может быть как ложный негативный так и ложный позитивный результат.

При любом тестировании может случиться ошибка, (например, при загрязнении полоски), и есть некоторая вероятность получить ложный позитивный результат. Если есть сомнения в результатах, следует проверить их методом культурального высева.

Ложный негативный результат может наблюдаться в следующих случаях :

A. высокое содержание аскорбиновой кислоты;

B. высокий УВ мочи;

C. отсутствие нитратов в рационе;

D. удержание мочи в мочевом пузыре менее 4 часов (бактерии не успевают превратить нитраты в нитриты);

E: бактерии не обладают нитрат-ревертазной активностью.

9. Реагентные полоски для определения лейкоцитов.

Основными компонентами на реагентной зоне тест-полоски являются индоловый эфир и соль диазония.

Принцип реакции следующий - эстераза нейтрофилов гидролизует индоловый эфир до диссоциированного гидробензола, который окисляется и реагирует с солью диазония, в результате чего образуются окрашенные продукты.

Клиническое значение: лейкоциты появляются в моче при воспалительных процессах мочевого тракта и их определение в моче является скрининговой методикой.

Особое внимание необходимо уделить следующему:

a). Тест-полоски реагируют только с эстеразой нейтрофилов, но не всех лимфоцитов, а у больных с трансплантацией почки в моче в основном наблюдаются лимфоциты, следовательно, результат тест-полоски может быть ложноотрицательным. В таких случаях должны применяться другие методы тестирования. К тому же при распаде лейкоцитов эстераза выходит в мочу. При этом результат микроскопии будет отрицательным, а результат тест-полосок положительным.

b). загрязнение мочи формальдегидом, а также высокая концентрация билирубина или некоторых лекарств может приводить к ложным положительным результатам. Присутствие большого количества белка (выше 5 г/л) или значительных количеств цефалексина, ципрофлоксацина, гентамицина могут приводить к ложно - отрицательным результатам. Наличие сахара в моче в концентрации выше 3 г/дл, высокий УВ, некоторые антибиотики наподобие цефалексина или цефабтина, большое количество щавелевой кислоты, ахеомицин также занижают результат.

10. Реагентные полоски для определения аскорбиновой кислоты.

Принцип реакции: аскорбиновая кислота восстанавливает окисленную форму 2,6-дихлориндолфенолята в N-фенол-2,6-дихлоро-P-амин фенол. При этом цвет тестовой зоны меняется с розового до бесцветного.

Клиническое значение:

a). помогает оценить качество питания пациента.

b). постоянный повышенный уровень витамина С может быть связан с мочекаменной болезнью.

Особое внимание нужно обратить на следующее:

a). Некоторые компоненты мочи, например, гидроксибензол и сульфгидрил могут влиять на

результаты, завышая их, в то время как цистеин, гипосульфит могут занижать результаты.

b). Если в моче содержатся сильные антиоксиданты (витамин С), результаты некоторых параметров могут оказаться заниженными.

c). Витамин С нестабилен в щелочной моче, поэтому при долгом хранении результат может быть ошибочным.

Из вышесказанного ясно, что методы «сухой химии» - это быстро, точно и надежно, но все это возможно при тщательном контроле действий специалиста и методы могут использоваться только для скрининговых исследований.

Методы оценки осадка мочи

Рутинные методы оценки осадка мочи были представлены выше по ходу обсуждения самой процедуры.

Самые последние достижения в области цифровой обработки изображений и проточной планарной цитометрии были использованы в анализаторе осадка мочи IQ 200. Патентованная система распознавания AAR TM ( Auto Analyte Recognition ) используется для автоматической классификации 12-ти различных форменных элементов мочи: эритроциты, лейкоциты, лейкоцитарные сгустки, гиалиновые цилиндры, патологические цилиндры, squamous клетки эпителия, non-squamous клетки эпителия, бактерии, грибы, кристаллы, мукус, сперматозоиды, артефакты.

Система имеет возможности расширенного спектора определяемых аналитов. Обнаружение клеток с помощью анализатора возможно с линейностью от 1 до 2000 клеток в мкл.

Автоматический анализатор осадка мочи iQ 200 позволяет избежать необходимости в специальном приготовлении образцов (т. е. центрифугирования и подготовки слайдов). Также при работе на станции резко сокращается время необходимое для проведения микроскопического исследования и, при этом, сокращается до минимума ручной труд лаборантов. Значительно повышается качество исследований мочи - за счет стандартизации самого метода, за счет автоматического контроля и за счет дополнительной возможности контроля со стороны оператора.

Существует уже достаточно много аналогов этому анализатору, но существует ряд преимуществ, которые выделяют iQ 200 из общей линейки анализаторов. Невысокая стоимость анализа мочи на станции iQ 200 по сравнению с другими анализаторами использующими принцип проточной цитометрии объясняется малым количеством расходных материалов необходимых для исследования и их невысокой ценой. Для работы необходимы следующие материалы: iQ Lamina, iQ Calibrator Twin Pack, Iris дилюент и клинсер, а также набор iQ Control / Focus.

Анализатор имеет компактный и эргономичный дизайн и легко умещается на рабочем лабораторном столе. Не требует внешнего источника воды или слива.

Принцип детекции в автоматическом анализатере мочи – это проточная планарная цитометрия Flow Image и система автоклассификации объектов на основе технологии AAR TM. Проточная цитометрия (ПЦ) представляет собой технику для быстрого оптического анализа отдельно взятых клеток. Методика заключается в выявлении рассеяния света лазерного луча при прохождении через него клетки в струе жидкости, причём, степень световой дисперсии позволяет получить представление о размерах и структуре клетки. Кроме того, в ходе анализа учитывается уровень флуоресценции химических соединений, входящих в состав клеточной стенки (аутофлуоресценция) или внесённых в образец перед проведением проточной цитометрии.

Методика обладает целым рядом преимуществ перед традиционной цитометрией, в числе которых: 1. Возможность исследования в ходе одного анализа значительно большего числа клеток (более тогда как микроскопия позволяет исследовать только несколько сотен клеток), что позволяет получать статистически достоверные результаты и выявлять редкие типы клеток; 2. Возможность проведения количественных измерений путем дифференцировки интенсивности рассеяния/флуоресценции при различных длинах волн; 3. Возможность одновременного исследования различных характеристик и структурных компонентов одной клетки.

Типичный аппарат для проведения проточной цитометрии позволяет определять до 5-10 различных параметров клетки, таких как размер, содержание белков, ДНК, липидов, антигенные свойства, активность ферментов и т. п. Кроме того, исследование отдельно взятых клеток даёт возможность выявить и оценить степень гетерогенности популяции, что не всегда может быть достигнуто другими методами.

В настоящее время проточная цитометрия применяется для выявления определённых клеток в исследуемых образцах (как бактериальных и грибковых, так и собственных клеток организма человека), определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, а также мониторирования состояния вирусного процесса у ВИЧ-инфицированных пациентов.

Выявление бактериальных, грибковых, а также собственных клеток организма в биологических жидкостях крайне важно для диагностики многих заболеваний. В ходе одного из исследований было показано, что проточная цитометрия обладает в раз более высокой чувствительностью по сравнению с микроскопией и позволяет выявлять бактериальные клетки в количестве 10-100 в 1 мл крови. При более низкой концентрации бактерий в образце возможно проведение предварительной инкубации. Высокую чувствительность методу придает использование моноклональных антител, помеченных флуоресцирующим веществом (наиболее часто изотиоцианат).

Проточная цитометрия позволяет не только выявлять инфицирование микроорганизмами, но и определять спектр их чувствительности, причём, длительность исследования не превышает нескольких часов. Подвергнутые воздействию антибиотиков (in vivo или in vitro) микроорганизмы сравнивают с контрольными образцами того же штамма для установления их жизнеспособности, а также изменений в нуклеиновых кислотах, белках, оболочке клеток и т. п., что позволяет оценить как степень эффекта антибиотика, так и точку приложения его действия.

Ещё одной областью применения проточной цитометрии является мониторирование состояния вирусного процесса у ВИЧ-инфицированных лиц путём определения абсолютного количества CD4+ клеток и их доли в популяции лимфоцитов. Методика может также использоваться для контроля эффективности проводимой терапии.

Таким образом, проточная цитометрия обладает рядом преимуществ по сравнению с традиционными методами микробиологических исследований. Появление в последние годы в свободной продаже специальных наборов для выявления целого ряда микроорганизмов позволило значительно расширить диагностические возможности проточной цитометрии. Тем не менее, вопрос стандартизации метода и адекватной интерпретации его результатов остаётся актуальным до сих пор.

Для работы на анализаторе необходимо 2 мл необработанной мочи в стандартной пробирке. 50 образцов в пяти штативах - максимальная однократная загрузка анализатора. Имеется возможность подстановки новых штативов во время работы, STAT образцы, возможность штрих-кодирования образцов. Производительность анализатора составляет 60 образцов в час.

Комплектация станции: Измерительный модуль, системный компьютер Pentium IV, монитор TFT.

Важным преимуществом этой автоматической станции может быть расширение её возможностей путем подключение к ней автоматического анализатора мочи Aution Max (сухая химия) через специальный «мост» и дополнительный компьютер. Общий штатив образцов для обеих аппаратов и автоматическая координация их работы позволяет ускорить процесс анализа мочи.

AUTION MAX AX-4030 – полностью автоматический анализатор мочи, имеет встроенный подающий механизм с загрузкой 200 тестовых полосок, измерение 10 параметров, скорость исследования 225 образцов в час, функции определения цвета и мутности мочи и распознавания аномальной окраски тестовой полоски, функция STAT.

Полный спектр исследований анализатора АUTION MAX включает в себя функции измерения удельного веса, цвета или температуры и позволяет обнаружить аномальное окрашивание в дополнение к анализу 9 качественных показателей мочи.

Функция определения цвета: Может быть измерена интенсивность окраски и оттенок образца (мочи). Информация об окраске может быть получена в 23 цветовых оттенках.

Функция определения мутности: Информация о мутности образца мочи может быть получена в 3 вариантах: «Прозрачный» («Clear»), «Непрозрачный» («Unclear») и «Мутный» («Very Unclear»).

Функция распознавания аномальной окраски: АUTION МАХ может автоматически определять и давать предупреждение об аномальной окраске тестовой полоски, появивишейся вследствие назначения и применения лекарств и т. д.

Измеряемые параметры: глюкоза, белок, билирубин, уробилиноген, pH, кровь, кетоны, нитриты, лейкоциты (на тест-полоске), а также отдельно измеряется удельная плотность мочи, цвет мочи и турбидность мочи.

Возможно определение дополнительных параметров таких как микроальбумин и креатинин.

Образцы мочи, находящиеся в пробирке, аспирируются встроенным дозатором и количественно точно наносятся на реакционные участки тестовых полосок. Для выполнения анализа требуется минимальный объем образца (2 мл).

АUTION MAX полностью автоматизированный анализатор, который обрабатывает помещенные на его подставку образцы в непрерывном режиме. Благодаря использованию системы, перемещающей подставку для образцов, аппарат может анализировать от 50 до 100 образцов одновременно (в случае исследования Вами срочного образца мочи, доступна функция STAT).

Оптимальный диапазон окружающей температуры для тестовых полосок «AUTION STICKS» от 20 до 25°С. Однако, АUTION MAX имеет функцию температурной компенсации, которая убирает ошибки, вызванные изменением температуры окружающей среды в диапазоне от 10 до 30°С.

АUTION MAX может сохранять в памяти результаты измерений 2700 образцов после классификации по типу измерения. Кроме того, анализатор может быть связан с внешними устройствами и также автоматически устанавливать идентификационные данные пациента путем считывания штрих-кода (дополнительная опция) размещенного на пробирке. На рисунке 6 представлен анализатор осадка мочи iQ 200 , который может быть соединен в общий блок с аналитзатором АUTION MAX (рис. 7).

Рис. 6. Анализатор осадка мочи iQ 200 фирмы IRIS Diagnostics, Inc.

Рис. 7. Автоматический анализатор мочи на тест-полосках АUTION MAX.

Необходимо отметить, что Прибор имеет Регистрационное Удостоверение МЗ РФ, Сертификат Соответствия ГОСТ, справку Роспотребнадзора на соответствие санитарным нормам. Эти требования должны соблюдаться при покупке аналитических измерительных приборов обязательно.

Контроль качества анализа мочи

Контроль качества исследований – это мера, необходимая для объективности оценки диагностических показателей, используемых в постановке диагноза, в слежении за течением заболевания и процессом лечения.

При этом существует два вида контроля: внутрилабораторный контроль и внешняя оценка качества исследований.

Внутрилабораторный контроль (ВЛК)

Внутрилабораторный контроль - это оперативный контроль качества результатов до их передачи для клинического использования (фильтр).

Правила внутрилабораторного контроля качества количественных лабораторных исследований

Настоящие правила определяют меры по выявлению и устранению недопусти­мых случайных и систематических погрешностей количественного анализа биоматериалов, называемые системой внутрилабораторного контроля качества и имеющие целью обеспечить соответствие выполняемых в КДЛ исследований установленным нормам точности.

1. Основные положения.

1.1. Термины и определения, используемые в документе.

Точность измерений - качество измерений, отражающее близость их результатов к истинному значению измеряемой величины. Высокая точность измерений соответствует малым погрешностям всех видов, как систематических, так и случайных.

Погрешность измерения - отклонение результата измерения от истинного значения измеряемой величины.

Систематическая погрешность измерения - составляющая погрешности измерения, остающаяся постоянной или закономерно изменяющаяся при повторных измерениях одной и той же величины.

Правильность измерений - качество измерений, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах.

Случайная погрешность измерения - составляющая погрешности измерения, изменяющаяся случайным образом при повторных измерениях одной и той же величины.

Аналитическая серия - совокупность измерений лабораторного показателя выполненных единовременно в одних и тех же условиях без перенастройки и калибровки аналитической системы.

Примечание: Число определений в аналитической серии не нормируется.

Внутрисерийная воспроизводимость (сходимость измерений) - качество измерений, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одной и той же аналитической серии.

Межсерийная воспроизводимость - качество измерений, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в разных аналитических сериях.

Общая воспроизводимость - качество измерений, отражающее близость друг к другу результатов всех измерений (определяется внутрисерийной и межсерийной воспроизводимостью).

Примечание. Обратным понятию воспроизводимости является понятие вариабельности измерений, являющейся мерой различий их результатов.

Установленное значение - метод-зависимое значение определяемого показателя, указываемое изготовителем контрольного материала в паспорте или инструкции.

1.2. Погрешности измерения.

Воспроизводимость и правильность являются основными показателями качества результата лабораторного исследования, определяющими общую погрешность (точность) результата измерения - разность между результатом измерения определяемого показателя и истинным значением измеряемой величины. Последнее не может быть установлено абсолютно точно, поэтому на практике вместо термина “истинное значение” используется термин “установленное значение”.

В клинической лабораторной диагностике в качестве установленного значения принимают метод-зависимое значение определяемого показателя, приводимое в паспорте (инструкции) к контрольному материалу, разрешенному Минздравом России к использованию в клинико-диагностических лабораториях.

Источниками погрешностей, выявляемых системой внутрилабораторного контроля качества, могут быть внутренние (лабораторные) и внешние факторы. К внешним факторам относятся принцип аналитического метода, качество приборов и реактивов, калибровочных средств. К внутренним - несоблюдение условий, установленных методикой проведения аналитического исследования: времени, температуры, объемов, правил приготовления и хранения реактивов и т. п.

В зависимости от характера влияния на результаты аналитического исследования различают систематические и случайные погрешности, которые выявляются с помощью многократного исследования контрольного материала в аналитических сериях.

Систематическая погрешность характеризует правильность измерений, которая определяется степенью совпадения среднего результата повторных измерений контрольного материала () и установленного значения измеряемой величины. Разность между ними называется величиной систематической погрешности или смещением, сдвигом и может быть выражена в абсолютных или относительных величинах. Систематическая погрешность, выраженная в относительных величинах, или относительная систематическая погрешность рассчитывается в процентах по формуле:

(1)

где - среднее значение измерений контрольного материала, УЗ - установленное значение.

Случайная погрешность отражает разброс измерений и проявляется в различии между собой результатов повторных измерений определяемого показателя в одной и той же пробе. Случайные погрешности обуславливаются влиянием большого числа факторов, которые нельзя выделить, учесть по отдельности и полностью устранить. Математически величина случайной погрешности выражается среднеквадратическим отклонением (S) и коэффициентом вариации (CV), которые рассчитываются следующим образом:

- среднеквадратическое отклонение (S):

, (2)

где - среднее арифметическое значение результатов n измерений (x1, x2, ... , xn):

, (3)

где - сумма результатов измерений x1, x2, ... , xn; n – число измерений;

- коэффициент вариации (CV):

. (4)

2. Внутрилабораторный контроль качества лабораторных исследований с использованием контрольных материалов.

2.1. Контрольные материалы: виды, требования, рекомендации по выбору, правила использования.

Контрольным называется однородный материал, результаты исследования которого используются для оценки погрешности выполняемого аналитического измерения. Как правило, исследование контрольных материалов выполняется на аналитическом этапе лабораторного исследования и, соответственно, позволяет оценить погрешности, возникающие только на этом этапе. Контрольный материал не может быть использован одновременно в качестве калибровочного.

2.1.1. Виды контрольных материалов.

При внутрилабораторном контроле используются контрольные материалы промышленного изготовления, допущенные в установленном порядке к применению на территории России. Вместе с тем, при невозможности приобрести контрольные материалы промышленного изготовления, в лаборатории могут использоваться контрольные материалы, которые готовятся из неиспользованных остатков образцов пациентов - слитые сыворотки, плазма, моча.

Контрольные материалы промышленного производства выпускаются как с исследованными (установленными, аттестованными), так и неисследованными значениями контролируемых параметров. В инструкции (паспорте) к аттестованным контрольным материалам указываются установленные значения и, как правило, допустимые диапазоны результатов измерения, определенные производителем. Контрольные материалы с исследованным содержанием используются для контроля правильности и воспроизводимости результатов лабораторного анализа, с неисследованным - для контроля воспроизводимости.

Контрольные материалы для контроля качества исследования мочи:

- водные растворы с известным содержанием веществ (глюкозы, мочевины, альбумина);

- цельная моча с установленными значениями широкого спектра биохимических компонентов, гормонов и их метаболитов, белков, токсических веществ и металлов;

- цельная моча для контроля качества методов сухой химии;

- искусственные растворы, имитирующие мочу с различными добавками контролируемых компонентов;

- растворы мочи для контроля исследования отдельных компонентов: токсических веществ, металлов, микроальбуминурии;

- препараты для контроля качества микроскопии осадка мочи.

2.1.2. Рекомендации по выбору и приобретению контрольных материалов.

При выборе контрольных материалов следует обращать внимание на следующие его характеристики:

- срок годности стабилизированной формы материала,

- срок годности материала после вскрытия флакона или растворения лиофилизированного содержимого;

- время растворения (реконструкции) лиофилизированных форм;

- тип матрицы контрольного материала (предпочтительнее использование материалов с матрицей человеческого происхождения, в отсутствие таковых допускается использование контрольных материалов животного происхождения, за исключением некоторых аналитических методов);

Примечание: Специфичность матрицы контрольных материалов касается не только конкретных биологических жидкостей (сыворотки, плазмы, мочи, спинномозговой жидкости), но и конкретных компонентов и методов их исследования. Так, например, при определении альбумина в сыворотке методом с индикатором бромкрезоловым пурпуровым, специфичным для альбумина сыворотки крови человека, следует иметь контрольный материал на основе этой сыворотки, т. к. с матрицей, полученным из крови животных, будут получены неправильные и невоспроизводимые результаты.

- значения определяемых показателей должны находиться в клинически значимом диапазоне. Для осуществления ежесерийного внутрилабораторного контроля рекомендуется использовать два контрольных материала со значениями определяемых показателей в нормальном и патологических диапазонах соответственно. При использовании во внутрилабораторном контроле только одного контрольного материала желательно, чтобы эти значения были близки к “границе принятия решения” (граница нормальных и патологических значений).

- соответствие перечня аналитов в закупаемом контрольном материале аналитам, исследуемым в лаборатории,

- наличие в паспорте контрольного материала установленных метод-зависимых значений, соответствующих методам, используемым в лаборатории;

- достаточность количества закупаемого контрольного материала для возможности его использования в течение длительного времени (от 6 месяцев до 3 лет, в зависимости от срока годности контрольного материала).

2.1.3. Использование контрольных материалов.

Перед использованием контрольного материала необходимо тщательно изучить инструкцию (паспорт) к нему. Несмотря на то, что в инструкции изготовителей обычно содержатся сведения об отсутствии в контрольном материале антигенов вирусных гепатитов и ВИЧ, обращаться с ним следует как с потенциально инфекционным. Перед вскрытием флакона необходимо зарегистрировать серию и номер контрольного материала.

Подготовка контрольного материала к исследованию проводится в соответствии с инструкцией производителя. Особое внимание следует обращать на:

- аккуратное вскрытие флакона, чтобы избежать потерь материала;

- точное пипетирование растворителя - бидистиллированной или деионизированной воды (для анализа кальция, фосфора, железа, хлоридов);

- осторожное перемешивание содержимого после того, как флакон закрыт пробкой - так, чтобы омыть частички материала на пробке (не допуская пенообразования);

- соблюдение времени растворения.

Для уменьшения погрешности пипетирования необходимо при добавлении растворителя использовать одну и ту же стеклянную пипетку (класса А или другую тщательно откалиброванную весовым способом), хорошо отмытую и отвечающую требованиям для анализа кальция, фосфора, железа.

Для экономного использования контрольного материала содержимое флакона после его растворения и перемешивания разливают в пробирки или флаконы с герметичными крышками на объемы, достаточные для поведения контроля исследований в течение одного дня (но не менее 0,5 мл), и замораживают при -20°С и более низких температурах. Материал, из которого изготовлены пробирки или флаконы, не должен при длительном хранении адсорбировать кальций, альбумин и другие компоненты. Допускается только однократное замораживание и оттаивание контрольной сыворотки и только для тех компонентов и методов, для которых оно допустимо. Оттаивание контрольной сыворотки следует проводить при комнатной температуре. Далее работа с ней проводится так же, как с жидкими контрольными материалами. При этом всегда должно соблюдаться правило: контрольные материалы должны исследоваться так же, как обычные пробы пациентов, т. е. в тех же сериях и в тех же условиях.

Результаты исследования компонентов в контрольной сыворотке сравниваются с метод-зависимыми установленными значениями, указанными в инструкции (паспорте) производителя (контроль правильности). При выборе установленного значения учитываются: принцип метода, прибор, а при определении ферментов - температура реакции, буфер, субстрат, активирующие добавки в реактивы (например, наличие или отсутствие пиридоксальфосфата для методов определения аспартат - и аланинаминотрансфераз, N-ацетилцистеина - для креатинкиназы, трансфосфорилирующего буфера для щелочной фосфатазы и др.).

Правила работы с контрольными материалами для гематологических исследований и исследований мочи приводятся в приложениях 2 и 3 приказа МЗ СССР от 01.01.2001 № 545, коагулологических исследований - в методических рекомендациях Минздрава России, утвержденных в 1993 г.

Пример внутрилабораторного контроля качества представлен на рисунке 8.

Рис.8. Ежедневный внутрилабораторный контроль качества аналита.

Внешняя оценка качества

Внешняя оценка качества – это ретроспективная оценка качества результатов после их клинического использования, оценкаэффективности внутрилабораторного контроля. Нормативное регулирование ВЛК проводится Приказом Минздрава России «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации» и Отраслевым стандартом (утвержден приказом Минздрава России )

«Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов».

Контроль за исследованиями в КДЛ должен проводиться на всех стадиях процесса. Различаются только формы контроля. Наиболее тщательному контролю, на первый взгляд, подвергается аналитический процесс(рисунок 9). Однако, по числу наибольших ошибок всегда на первом месте доаналитическая фаза исследования и система аудита предъявляет к этому этапу не менее пристальное внимание.

Рис. 10. Возможности разных форм внешнего контроля на разных стадиях лабораторного исследования.

В настоящее время участие в системе внешнего контроля качества является обязательной в РФ.

Извлечение из письма Росздравнадзора № 01И-787/05 от 01.01.2001

«Об участии лабораторий медицинских организаций в Федеральной системевнешней оценки качества клинических лабораторных исследований (ФСВОК)»: