Фармакогностическое изучение вереска обыкновенного (Calluna vulgaris (L.) Hull.) (стр. 5 )

Некоторые природные соединения содержались лишь в отдельных фракциях главным образом из цветков и листьев. Так, как упоминалось выше, сиринговая кислота обнаружена в этилацетатной фракции, резорцин, ксилофураноза, глюкофураноза, D-ксилоза – в бутанольной, гексановая кислота, фенилэтанол, фенилэтаналь, изоевгенол, гидроксиазулен и алоэ-эмодин – в хлороформной фракциях из цветков; углеводы, пирокатехин, 2-гидроксиуксусная и 3,4,5-тригидроксикоричная кислоты – в бутанольной, а 4-гидрокси-3-метоксифенилуксусная, 2,3,5-триметоксиманделовая, октадекановая, коричная кислоты и п-гидроксибензальдегид – в хлороформной фракциях из листьев.

Микроскопическое изучение. Нами предпринято микроскопическое исследование надземных и подземных органов растения с целью обнаружения микродиагностических признаков и внесения их в проекты ФСП и ТУ. Объектами служили образцы, собранные в августе-сентябре гг. в окрестностях п. Туношна Некрасовского района Ярославской области в фазу цветения. Анатомическое исследование стеблей, корневища, корней, цветков и листьев выполняли по методике на живом и фиксированном (96%-ный спирт этиловый + глицерин + вода 1:1:1) материале.

При рассмотрении поперечного среза листа вереска (рис. 5) видно, что его края завернуты вниз и почти соприкасаются друг с другом, образуя небольшую полость, в которую открываются устьица (7). На поперечном срезе хорошо различима кутикула (1), в виде прозрачной полоски по краю листа, однорядная палисадная ткань с верхней и нижней поверхности (2), рыхлая губчатая ткань (3), с хорошо выделяющимися хлоропластами (4). Лист в поперечном срезе характерной треугольной формы. При рассмотрении препарата листа с поверхности нами отмечено, что клетки эпидермиса верхней стороны слегка извилистые, в очертании округлые, без устьиц. Поверхность листа покрыта простыми волосками, причем по центральной жилке и по краю листа длинными одноклеточными волосками (5), а боковые стенки – короткими, одноклеточными, бородавчатыми волосками (6). На внутренней поверхности листа расположены устьица (7), устьичный аппарат парацитный. В мезофиле листа содержатся многочисленные друзы оксалата кальция (8), разнообразные по размерам.

Кроме того, нами изучены микродиагностические признаки подземных (корни и корневища) и других надземных (стебли и цветки) органов вереска.

Товароведческий анализ. Исследования проводили по методикам ГФ XI издания, в ходе которых определены некоторые числовые показатели побегов вереска обыкновенного, в ча-

Рис. 5. Препарат с поверхности листа вереска обыкновенного.

Условные обозначения приведены в тексте

стности «Зола общая» (не более 5%), «Зола, нерастворимая в кислоте хлористоводородной» (не более 3%), «Влажность» (не более 12%), «Экстрактивные вещества, извлекаемые водой» (не менее 15%), «Экстрактивные вещества, извлекаемые 70%-ным спиртом этиловым» (не менее 16%).

Разработка нормативной документации. Результаты проведенных исследований положены в основу проектов фармакопейной статьи предприятия (ФСП) и технических условий (ТУ) на побеги вереска обыкновенного для фармацевтическая фабрика», которые разработали в соответствии с ОСТ 91500.05.001.00 «Отраслевой стандарт. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» для ФСП, и ГОСТ Р «Технические условия на пищевые продукты. Общие требования к разработке и оформлению», СанПиН 2.3.2.1290-03 «Продовольственное сырье и пищевые продукты. Гигиенические требования к организации производства и оборота биологически активных добавок к пище» для ТУ.

Разработка лекарственных средств. Нами определена острая токсичность настоя побегов вереска, в результате чего изучаемое растение охарактеризовано как низкотоксичное. Кроме того, на основании наблюдений за животными во время проведения эксперимента выявлен седативный эффект. С использованием побегов вереска составлен сбор «Гербанерв», рекомендуемый для лечения нервных заболеваний, и предложена технология приготовления настойки побегов вереска.

Для сбора «Гербанерв», в состав которого наряду с побегами вереска обыкновенного (1 часть), входят корневища с корнями валерианы лекарственной (4 части), трава зверобоя (2 части), корни цикория обыкновенного (1 часть), трава пустырника пятилопастного (2 части), листья земляники лесной (2 части) и соплодия хмеля (1 часть), определены числовые показатели по методикам ГФ XI: «Влажность» (не более 11%), «Зола общая» (не более 9,5%), «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте» (не более 1,6%), «Экстрактивные вещества, извлекаемые водой» (не менее 8,5%), «Экстрактивные вещества, извлекаемые 50% спиртом этиловым» (не менее 10,5%). Как и для побегов вереска, для упомянутой фитокомпозиции определены оптимальные условия экстрагирования фармакологически активных веществ, которые отмечены при троекратной экстракции в течение 15 минут 50% спиртом этиловым. С учетом изложенных данных в сборе «Гербанерв» нами определено содержание суммы гидроксикоричных кислот (1,81%) и флавоноидов (0,29%). Содержание суммы полифенольных окисляемых соединений составило 5,07%.

При получении настойки побегов вереска экстракцию проводили 70%-ным спиртом этиловым (коэффициент поглощения составил 1,6) и настаивали методом мацерации при соотношении сырье-экстрагент 1:5 на протяжении 7 суток, затем отстаивали в течение 3 суток и фильтровали. В полученной таким образом настойке по известным методикам нами определены следующие числовые показатели: сухой остаток (по методике ГФ XI), содержание суммы гидроксикоричных кислот, флавоноидов, полифенольных окисляемых соединений и арбутина (табл. 14).

Таблица 14 – Содержание сухого остатка и некоторых классов фенольных соединений в настойке вереска

Серия	Содержание, %
сухого остатка	суммы гидроксикоричных кислот	суммы флавоноидов	суммы полифенольных окисляемых соединений	арбутина
	26,53	3,378±0,0423	0,923±0,078	3,562±0,1136	1,256±0,0071
	20,62	4,056±0,0508	1,085±0,092	4,323±0,1308	2,863±0,0161

Как видно из данных, приведенных в таблице 14, в настойке, приготовленной в 2001 году (серия ) фармакологически активных веществ несколько меньше, чем в настойке, полученной в 2003 году (серия ), что, вероятно, связано с окислением и разрушением определяемых фенольных соединений.

В народной медицине вереск обыкновенный, в основном, используют в виде настоя. В связи с чем на кафедре фармакологии Ярославской государственной медицинской академии под руководством заведующего кафедрой профессора нами проведено изучение его острой токсичности. Из результатов токсикологических исследований следует, что настой побегов изучаемого растения по величине ДЛ50 являлся практически нетоксичным, т. к. при его внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении летальную дозу выявить не удалось. Кроме того, по ходу исследований нами обнаружен в известной мере седативный эффект, т. к. после введения настоя в течение первого часа развивалось двигательное и рефлекторное угнетение, которое проявлялось снижением оборонительного рефлекса и пугливости животных, снижением интенсивности одергивания головы при раздражении роговицы и др.

Выводы

1.  В листьях, цветках и неодревесневших побегах вереска обыкновенного хроматографией на бумаге обнаружены в свободном состоянии глюкоза и фруктоза, а в гидролизатах – галактоза, глюкоза, ксилоза, рамноза, глюкуроновая и галактуроновая кислоты (во фракции водорастворимых полисахаридов), глюкоза, фруктоза, арабиноза, рамноза, глюкуроновая и галактуроновая кислоты (в комплексе пектиновых веществ).

2.  Впервые проведен качественный и количественный анализ свободных и связанных аминокислот вегетативных и генеративных органов вереска обыкновенного, в результате которого установлено наличие 15 свободных и связанных аминокислот, в том числе 7 незаменимых. Отмечено, что их количество варьировало от 12 до 15 в зависимости от органа растения. Максимальное содержание аминокислот отмечено в цветках, минимальное – в листьях.

3.  Методами двумерной БХ, ВЭЖХ и спектрофотометрии проанализирован качественный состав фенольных соединений, представленных флавоноидами, гидроксикоричными кислотами и кумаринами. При этом выявлено не менее 8 гидроксикоричных кислот и 18 веществ флавоноидной природы, среди которых доминировали хлорогеновая кислота и кверцетин.

4.  Впервые предпринят хромато-масс-спектрометрический анализ природных соединений надземных органов вереска и идентифицировано 80 веществ первичного и вторичного обмена, представленных углеводами, жирными, органическими, оксибензойными и оксикоричными кислотами и другими соединениями. Каждое третье идентифицированное вещество обнаружено во всех надземных органах, в их числе такие фармакологически активные как арбутин, гидрохинон, цианиданол, метилрезорцин, b-ситостерол, салициловая и азелаиновая кислоты и другие.

5.  Разработаны спектрофотометрические методики количественного определения суммы флавоноидов, суммы гидроксикоричных кислот и арбутина в побегах вереска, собранных в 40 местах произрастания в различных регионах РФ и ближнего зарубежья, и установлено, что среднее содержание суммы флавоноидов в них составило 0,778%, суммы гидроксикоричных кислот – 4,979%, суммы полифенольных окисляемых веществ – 4,298%, арбутина – 2,897%.

6.  Изучена сезонная динамика накопления фармакологически активных фенольных веществ побегов вереска обыкновенного и определены оптимальные сроки их сбора (в период с начала до середины цветения, т. е. с середины июля до середины августа).

7.  Проведено изучение микродиагностических признаков надземных и подземных органов вереска, по которым их можно идентифицировать.

8.  При товароведческом анализе побегов вереска определены значения отдельных числовых показателей («Влажность», «Зола общая», «Зола, нерастворимая в 10% растворе хлористоводородной кислоты», «Экстрактивные вещества»), положенных в основу проекта ФСП и ТУ «Побеги вереска», внедренных на Ивановской фармацевтической фабрике.

9.  При определении острой токсичности настоя побегов вереска отмечено, что по уровню токсичности он отнесен к низкотоксичным веществам. С использованием побегов растения разработана рецептура сбора «Гербанерв» и технология получения настойки, которые стандартизированы по некоторым числовым показателям.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.  Фармакохимическое изучение видов семейства вересковые / , , … // Сборник науч. работ студентов и молод. ученых ЯГМА. – Ярославль: ДИА-пресс, 2001. – С. 85-86.

2.  Онегин, определение некоторых групп фенольных соединений в траве вереска обыкновенного / , // Сборник науч. работ студентов и молод. ученых ЯГМА. – Ярославль: ДИА-пресс, 2001. – С. 87-88.

3.  Создание компьютерной программы «Минеральные вещества» ряда лекарственных растений /, , и др. // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Матер. межвуз. науч.-практич. конференции, посв. 85-летию высш. образования на Урале. – Пермь, 2001. – С. 96-97.

4.  Особенности анатомического строения подземных органов вереска / , , и др. // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Матер. межвуз. науч.-практич. конференции, посв. 85-летию высш. образования на Урале. – Пермь, 2001. – С. 111-112.

5.  Экологическая оценка техногенного загрязнения г. Ярославля и Ярославской области / , , … // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Матер. межвуз. науч.-практич. конференции, посв. 85-летию высш. образования на Урале. – Пермь, 2001. – С. 175.

6.  Фармакологически активные вещества, фармакологические эффекты и применение отечественных видов вересковых / , , … и др. // Сборник науч. работ студентов и молод. ученых ЯГМА. – Ярославль: Изд-во «Аверс Пресс», 2002. – С. 96-97.

7.  Некоторые итоги доклинического изучения БАД седативного действия бальзам «Фитосед» / , … и др. // X Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». – М., 2003. – С. 551.

8.  Фитохимическое исследование веществ первичного обмена отдельных видов семейства вересковые / , , // X Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». – М., 2003. – С. 677-678.

9.  Куприянова, спектрофотометрического метода количественного определения арбутина / , , // Сборник науч. работ студентов и молод. ученых ЯГМА. – Ярославль: Изд-во «Аверс Пресс», 2003. – С. 94-95.

10.  Количественное определение арбутина в отдельных видах семейства вересковые / , , // Сборник науч. работ студентов и молод. ученых ЯГМА. – Ярославль: Изд-во «Аверс Пресс», 2003. – С. 95-96.

11.  Онегин, методики фотоэлектроколориметрического определения арбутина в лекарственном растительном сырье / , , // Сборник статей 4-го конгресса молод. ученых «Науки о человеке». – Томск, 2003. – С. 214-215.

12.  Онегин, вереска обыкновенного в народной медицине / , // Материалы X съезда медицинских и фармацевтических работников Ярославской области: Сборник науч. трудов. – Ч. II. - Ярославль, 2003. – С. 375-379.

13.  Онегин, объективной и разработка наиболее достоверной методики количественного определения арбутина в траве вереска обыкновенного / , // Современные вопросы фармакогнозии: Межвуз. сборник науч. трудов с международ. участием, посв. 20-летию кафедры фармакогнозии / Под ред. . – Ярославль: Типография ЯГТУ, 2004. – С. 235-248.

14.  Возможности стандартизации фитокомпозиции «Гербанерв» / , , // Сборник науч. работ студентов и молод. ученых ЯГМА. – Ярославль: Изд-во «Аверс Пресс», 2004. – С. 83-84.

15.  Петровский, исследование веществ первичного обмена вереска обыкновенного / , , // Сборник науч. работ студентов и молод. ученых ЯГМА. – Ярославль: Изд-во «Аверс Пресс», 2004. – С. 77.

16.  Онегин, определение арбутина в траве вереска обыкновенного из различных мест произрастания / , , // Сборник науч. работ студентов и молод. ученых, посв. 60-летию Победы. – Ярославль, 2005. – С. 87-88.

17.  Кузьмина, определение фенольных соединений в траве вереска обыкновенного из разных мест произрастания / , // Сборник науч. работ студентов и молод. ученых ЯГМА, посв. 60-летию студенческого научного общества. – Ярославль, 2006. – С. 112-113.

18.  Сравнительный анализ аминокислотного состава надземных органов вереска обыкновенного / , , // Запорожский медицинский журнал. – 2007. - №1. – С. 114-116.

19.  Онегин, определение суммы гидроксикоричных кислот в траве вереска обыкновенного из различных мест произрастания / , // Российский медико-биологический вестник имени академика . – 2007. – №3. – С. 97-103.

20.  Фурса, арбутина в траве вереска обыкновенного / , // Фармация. – 2007. – №6. – С. 12-14.

21.  Онегин, исследование подземных и надземных органов вереска / , , // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения: Сборник матер. науч.-практич. конференции с международ. участием, посв. 25-летию фармац. фак-та ЯГМА / Гл. ред. . – Ярославль: изд-во «Найс», 2007. – С. 258-261.

22.  Фурса, травы вереска по основным фенольным соединениям / , , // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения: Сборник матер. науч.-практич. конференции с международ. участием, посв. 25-летию фармац. фак-та ЯГМА / Гл. ред. . – Ярославль: изд-во «Найс», 2007. – С. 352-354.

23.  Шелюто, изучение флавоноидов вереска / , , // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения: Сборник матер. науч.-практич. конференции с международ. участием, посв. 25-летию фармац. фак-та ЯГМА / Гл. ред. . – Ярославль: изд-во «Найс», 2007. – С. 369-373.

24.  Онегин, -масс-спектрометрический анализ природных соединений травы вереска обыкновенного и арктоуса альпийского / , , // Вестник Пермкой государственной фармацевтической академии. – 2007. - №2. – С. 266-269.

25.  Фурса, -масс-спектрометрический анализ природных соединений надземных органов вереска обыкновенного / , , и др. // Запорожский медицинский журнал. – 2007. - №3. – С. 118-124.

26.  Шелюто, , выделение, физико-химическое изучение и количественное определение флавоноидов в траве вереска обыкновенного / , , // Вестник фармации. – 2007. - №2(36). – С. 15-25.