Фармакологические свойства и токсикологическая характеристика комплексного растительного препарата “Селекартен” (стр. 1 )

На правах рукописи

ПЛЕТНЕВ Владимир Владимирович

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО ПРЕПАРАТА “СЕЛЕКАРТЕН”

14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва – 2013

Работа выполнена в ФГБУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Минздрава РФ

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, профессор АРЗАМАСЦЕВ Евгений Вениаминович

Официальные оппоненты:

КИНЗИРСКИЙ Александр Сергеевич, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, заведующий лабораторией фармакологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт физиологически активных веществ» РАН

МОРОЗОВА Татьяна Евгеньевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой клинической фармакологии и фармакотерапии ФППОВ ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени » Минздрава РФ

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени » Минздрава РФ

Защита диссертации состоится «____» ____________ 2013 г. на заседании Диссертационного совета Д 208.040.13 при ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени » Минздрава РФ ( Москва, ул. М. Трубецкая, д. 8, стр. 2).

С диссертацией можно ознакомиться в ГЦНМБ Первого Московского государственного медицинского университета имени Минздрава РФ ( Москва, Нахимовский проспект, 49).

Автореферат разослан «_____»_______________________ 2013 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д 208.040.13

Доктор медицинских наук АРХИПОВ Владимир Владимирович __________

Общая характеристика РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Характерной чертой конца XX и начала XXI века является существенный рост острых и хронических инфекционных заболеваний бактериальной, грибковой, протозойной и вирусной природы. Возвращаются заболевания, которые были широко распространены в XIX столетии и почти исчезли в XX веке, такие как, туберкулез, малярия, дифтерия и другие. Появились новые вирусные заболевания, типичным примером которых является, ВИЧ-инфекция. Наблюдается рост инфекционных заболеваний различной этиологии, возбудителями которых служат условно-патогенные или оппортунистические микробы, обладающие атипичными биологическими свойствами и множественной устойчивостью к антибиотикам. Возникновение этих заболеваний связано также со снижением иммунореактивности населения. На фоне ослабления функций иммунной системы применение даже высокоэффективных антибиотиков последнего поколения не всегда дает хороший клинический эффект.

Несмотря на сравнительно большой спектр используемых в клинической практике при лечении внутренних и инфекционных заболеваний индукторов интерферонов и препаратов, обладающих иммунотропным действием (амиксин, кагоцел, рибомунил, тактивин, тимактид, миелопид, альфа-глутамил-триптофан, пидотимод, стемокин, интерлейкин-1бета, интерлейкин-2, интерферон альфа, кипферон, интерферон альфа-2, интерферон бета-1а, аффинолейкин и т. д.), поиск лекарственных средств, обладающих одновременно иммунотропным, антимикробным и противовирусным действием, остается актуальной проблемой.

В последние годы пристальное внимание исследователей привлекает изучение роли микроэлементов и витаминов в функционировании иммунной системы. Установлено, что витамины А, С, В12, β-каротин, фолиевая кислота, рибофлавин, а также микроэлементы селен, цинк и железо обладают иммуномодулирующими свойствами и их недостаточность приводит к ослаблению иммунитета и повышению инфекционной заболеваемости [Bhaskaram P., 2002; Chandra R. K., 2002].

Многие из этих веществ обладают антиоксидантными свойствами, что очень важно при лечении ряда таких тяжелых заболеваний человека, как атеросклероз, злокачественные новообразования, аутоиммунные заболевания, а также для профилактики преждевременного старения. К веществам с выраженными иммуномодулирующими и антиоксидантными свойствами относится микроэлемент селен и его производные. Селеносодержащие вещества повышают иммунологическую реактивность, следствием чего является снижение инфекционной заболеваемости [Huang K., Yang A., 2002; Langkamp-Henken B., Bender B. S., Gardner E. M., 2004].

При дефиците селена в организме и сниженной иммунореактивности слабопатогенный вирус Коксаки приобретает высокую вирулентность и приводит к серьезным нарушениям в работе сердечно-сосудистой системы; вирус гриппа вызывает более тяжелые повреждения легочной ткани; у ВИЧ-инфицированных людей начинается быстрое прогрессирование заболевания [Rayman M. P., 2002]. Регулярное потребление пищевых продуктов с высоким содержанием селена замедляет старение организма и снижает риск развития злокачественных новообразований [Langkamp-Henken B., Bender B. S., Gardner E. M., 2004; Wayland M., Gilchrist H. G., Marchant T., 2002; Whanger P. D., 2004].

В настоящее время активно разрабатываются лекарственные средства и биологически активные добавки, содержащие селен – незаменимый микроэлемент, обладающий широким спектром биологической активности и целым рядом фармакологических свойств, в том числе высокой антиоксидантной активностью [Dolph L. Hatfield, Marla J., Berry and Vadim N. Gladyshev, 2006; Gladyshev V. N., 2001; Tappel A., Caldwell K., 1966]. При этом принципиально важным остается создание новых комплексных лекарственных препаратов, усиливающих положительные эффекты селена и снижающих его нежелательное побочное действие, связанное с проявлением токсичности [, 1968].

В связи с этим, актуальным является изучение нового комплексного растительного препарата – селекартен (СК), содержащего селен. В экспериментах на кроликах с острой ишемией сетчатки, вызванной лазерной коагуляцией было показано, что СК обладает антиоксидантным действием, ангио-, нейро - и ретинопротекторным свойствами. Под влиянием СК наблюдается усиление компенсаторных механизмов, направленных на восстановление кровообращения в поврежденных тканях при ишемии и дистрофии сетчатки [, 2008].

Вместе с тем, экспериментальное изучение иммунотропных, антимикробных и противовирусных свойств СК, а также его безопасность подробно не изучались, а выявленные эффекты препарата свидетельствует о перспективности его применения в иммунологии, онкологии, реаниматологии, при лечении ряда внутренних, инфекционных и других заболеваний.

Цели и задачи исследования. Целями настоящей работы являются исследование в эксперименте фармакологических свойств и токсичности препарата селекартен для обоснования его клинического изучения и последующего медицинского применения.

Для достижения этих целей были поставлены следующие задачи:

1. Изучить спектр иммунотропного действия препарата селекартен.

2. Исследовать антимикробные свойства селекартена против ряда возбудителей заболеваний человека – Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus, Escherichia coli.

3. Исследовать противовирусную активность селекартена в отношении вирусов гриппа А и В, герпеса простого, гепатита С, иммунодефицита человека.

4. Провести доклиническое токсикологическое изучение препарата селекартен.

Научная новизна. Впервые изучено иммунотропное действие селекартена. Установлено, что СК повышает устойчивость мышей к смертельной стафилококковой инфекции, стимулирует бактерицидную активность клеток перитонеального экссудата мышей, гуморальный и клеточный иммунные ответы. СК обладает антиоксидантными свойствами и под его влиянием наблюдается подавление зимозаниндуцированной хемилюминесценции лейкоцитов периферической крови и спленоцитов мышей, подавление люминол - и люцигенинзависимых спонтанных и зимозаниндуцированных хемилюминесценций лейкоцитов человека. При совместной инкубации СК с мононуклеарными клетками периферической крови человека наблюдается повышение клеточной гибели, подавление пролиферации лимфоцитов и повышение продукции ФНО-α мононуклеарными клетками.

При изучении антимикробной активности селекартена впервые установлено, что препарат обладает ингибирующим действием на Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus, Escherichia coli.

Впервые также установлено, что селекартен обладает противовирусным действием в отношении вирусов гриппа А/Н5, A/H3 и В. Препарат оказывает защитное действие при экспериментальной гриппозной пневмонии у мышей, вызванной вирусом гриппа А/Н5. Впервые выявлена противовирусная активность СК при действии на вирусы простого герпеса 1-го типа, гепатита С и иммунодефицита человека.

При доклиническом токсикологическом изучении селекартена, установлено, что СК является малотоксичным препаратом и хорошо переносится при длительном назначении, не обладает мутагенностью, не оказывает аллергизирующего действия и иммунотоксичности, проявляет эмбриотоксичность, в связи, с чем беременность следует считать противопоказанием к назначению СК.

Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований обоснована перспективность клинического изучения селекартена в иммунологии, онкологии, реаниматологии, при лечении ряда внутренних и инфекционных заболеваний, в качестве лекарственного средства системного действия, обладающего иммуномодулирующим, антимикробными и противовирусными свойствами. Определены оптимальные дозы для назначения селекартена и доказана возможность его длительного применения в виде внутримышечных инъекций.

Полученные данные свидетельствуют о перспективности применения использованного подхода для создания новых эффективных комплексных растительных препаратов на основе фармакопейных растений с добавлением биологически активных компонентов растительной или другой природы.

Апробация работы.

Основные положения диссертации были представлены и доложены на XIX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, апрель 2012 г.), на межлабораторном семинаре НИИ экспериментальной кардиологии ФГБУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Минздрава РФ (Протокол апробации №3 от 27 сентября 2012 г.), на заседании кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней лечебного факультета ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. » Минздрава России (Протокол апробации №8 от 15 ноября 2012 г.).

Личный вклад автора.

Лично разработан комплексный растительный препарат селекартен, что подтверждается патентом РФ на изобретение № 000 от 01.01.2001 «Иммуномодулирующий препарат». Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследований, проведении анализа и обобщения полученных результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от экспериментальных исследований оригинального комплексного растительного препарата селекартен до обсуждения и формулировки результатов в научных публикациях и докладах.

Полученные данные свидетельствуют о возможности рекомендовать разработанный комплексный растительный препарат селекартен для клинических испытаний и применения использованного подхода для создания новых эффективных комплексных растительных препаратов для медицины.

Научные публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ. Из них 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ, изданы 2 монографии, а также получен 1 патент РФ.

Положения, выносимые на защиту:

Селекартен является оригинальным комплексным растительным препаратом, обладающим иммуномодулирующим действием.

Препарат проявляет антимикробные свойства против ряда возбудителей заболеваний человека – Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus, Escherichia coli.

Селекартен повышает выживаемость животных, при заражении летальной дозой Staphylococcus pyogenes, и оказывает защитное действие при вирусной пневмонии.

Препарат проявляет противовирусную активность в отношении вирусов гриппа А и В, герпеса простого, гепатита С, иммунодефицита человека.

Селекартен является малотоксичным препаратом при однократном парентеральном введении лабораторным животным и хорошо переносится при длительном назначении крысам Wistar и собакам, не оказывает повреждающего действия на основные органы и системы организма подопытных животных, не проявляет местнораздражающего действия.

Селекартен не обладает мутагенностью и ДНК-повреждающим действием. Не оказывает аллергизирующего и иммунотоксического действия.

При назначении беременным крысам селекартен проявляет эмбриотоксичность, в связи с чем беременность является противопоказанием к назначению препарата.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 178 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 5 глав экспериментальных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, научно-практических рекомендаций, списка литературы. Библиография включает 288 литературных источников, из которых 143 отечественных и 145 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 1 рисунком и 75 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 417 мышах-гибридах F1(CBAxC57Bl6), 128 мышах линии BALB/c, 70 белых беспородных мышах, 263 крысах Wistar, 30 пестрых морских свинках и 8 беспородных собаках.

Для проведения исследований использовали комплексный растительный препарат селекартен, полученный на основе спиртового экстракта донника лекарственного – Melilotus officinalis L., семейство бобовые – Fabaceae, трава которого содержит: кумарин, кумаровую кислоту, дикумарол, мелилотин, мелилотовую кислоту, гликозид мелилотозид, производные пурина, жироподобные вещества, эфирное масло, витамин Р, флавоноиды и хлорофилл. Спиртовой экстракт фильтруют в соответствии с НД. Полученный отфильтрованный жидкий экстракт содержит: кумарин, дигидрокумарин, хлорофилл, флавоноиды и минимальные количества, перечисленных выше веществ.

К полученному экстракту добавляют селенит натрия, β-каротин, фосфолипиды сои, перемешивают в течение регламентированного в НД времени. И вновь фильтруют посредством мембранной ультрафильтрации (размер пор 0,2 мкм), разливают в асептических условиях в стеклянные флаконы или ампулы. Проектом ФСП предусмотрена регламентация следующих компонентов в 1 мл препарата: натрия селенита 18,40 мкг (в пересчете на селен 8,402 мкг), фосфолипидов 0,310 мг, β-каротина 5,210 мкг, 0,9 мл хлорофилла и флавоноиды.

В исследованиях испытываемые дозы (концентрации) селекартена расчитывали исходя из того, что в 1 мл препарата содержится 450 мкг активной субстанции.

Исследование иммунотропного действия селекартена.

Влияние СК на гуморальный иммунный ответ оценивали по накоплению АОК в селезенках мышей на 4-е сутки после иммунизации по методу Каннингейма. Показателем клеточного иммунного ответа служила реакция ГЗТ, величину которой определяли индексу ГЗТ.

Исследование влияния СК на устойчивость животных к стафилококковой инфекции проведено на мышах-гибридах F1(CBAxC57Bl6), которых заражали летальной дозой (1010 клеток/мышь) Staphylococcus pyogenes.

При изучении влияния СК на макрофагальную активность клеток перитонеального экссудата мышей-гибридов F1(CBAxC57Bl6) использовали Staphylococcus aureus меченный флюоресцеина изотиоцианатом. Исследование влияния СК на внутриклеточную бактерицидность проведено с помощью проточного цитофлуориметра FACSCalibur (США).

Влияние СК на спонтанную, индуцированную зимозаном (Sigma), а также люминолзависимую и люцигенинзависимую хемилюминесценцию лейкоцитов оценивали на хемилюминометрах «Lum-5773» (Россия) и LUCY 1 (Австрия).

Влияние СК на жизнеспособность мононуклеаров периферической крови изучали с помощью проточного цитофлуориметра FACSCalibur (США).

Влияние СК на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови оценивали по включению радиоактивной метки.

Влияние СК на продукцию ФНО-α мононуклеарами периферической крови оценивали методом твердофазного иммуноферментного анализа.

Изучение антимикробного действия СК.

Исследование антимикробных свойств СК проведено на представителях 4 видов микроорганизмов: Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus и Escherichia coli. Ингибирующее действие СК оценивали на суспензиях указанных микроорганизмов стандартной мутности, в которые добавляли СК в различных концентрациях с последующим инкубированием в термостате, пересевом на чашки Петри с селективными средами и учетом выросших колоний.

Изучение противовирусного действия селекартена.

Влияние СК на вирусы гриппа А и В.

Для проведения данных исследований использовали эпидемические вирусы гриппа человека А/Н1N1, А/Н3N2 и В, а также штаммы вирусов А/Н5N2, А/Н5N3. Противовирусную активность СК учитывали по снижению инфекционного титра вируса в культуре клеток МДСК и снижению уровня подавления оптической плотности в тест-системе на основе ИФА.

Оценка вирулицидного действия CK проведена на интактных вирусах эпидемических штаммов вируса гриппа А, В и А/Н5.

Куриные эмбрионы инфицировали вирусом гриппа А/Н5. После инкубации определяли наличие вируса в РГА.

При изучении противовирусной активности СК на модели гриппозной пневмонии у мышей, подопытных животных заражали вирусом гриппа А/утка/Алтай/1285/91(Н5N3), выделенным от диких птиц, при интраназальном введении. Эффективность противовирусного действия СК оценивали по сравнительной летальности и средней продолжительности жизни мышей, получавших препарат и контрольной группы.

Влияние СК на вирус простого герпеса (ВПГ).

В исследованиях использовали клетки почек зеленой мартышки Vero-E6 с добавлением эмбриональной сыворотки телят – ЭТС и диплоидные фибробласты эмбриональной легочной ткани человека MRC-5.

Тестирование проведено на штамме вируса герпеса простого тип 1 штамм L2, а также на 3 вариантах вируса с лекарственной устойчивостью к ацикловиру, фосфономуравьиной кислоте и к их комбинации.

Оценку противовирусного действия CK проводили по ингибированию развития вирусиндуцированного патологического процесса.

Влияние СК на вирус гепатита С (ВГС).

При проведении исследований были использованы высоко чувствительные к патогенному действию ВГС культуры перевиваемых клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ), а также патогенный штамм ВГС, выделенный из сыворотки крови больной хроническим гепатитом С, который относится к генотипу 1b инфекции. В качестве контролей служили инфицированные и нормальные неинфицированные культуры клеток СПЭВ. Вирулицидное действие СК оценивали по проценту ВГС инфицированных культур клеток, погибших в результате вирусной инфекции, и по остаточной инфекционной активности вируса, сохранившейся в результате воздействия СК.

Исследование противовирусной активности СК в отношении ВИЧ.

Исследования проведены на перевиваемых лимфобластных клетках человека МТ-4. В исследовании использован штамм вируса ВИЧ-1BRU. Степень цитодеструкции оценивали под микроскопом. Методом ИФА проводили определение антигена вируса в культуральной жидкости. При исследовании вирулицидного действия СК на ВИЧ в культуре клеток учет результатов проводили с помощью световой микроскопии.

Токсикологические исследования.

Исследования проведены в соответствии современными требованиями Минздрава России к безопасности новых лекарственных препаратов (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. – М, 2005).

Изучение токсичности СК при однократном введении лабораторным животным.

Определение параметров токсичности СК при однократном парантеральном введении мышам линии BALB/с и крысам Wistar проведено с использованием пробит-анализа по Литчфилду и Уилкоксону.

Изучение токсичности СК в условиях хронических экспериментов на крысах Wistar (3 месяца) и собаках (1 месяц).

На протяжении эксперимента отмечали общее состояние и поведение животных. Оценку функционального состояния сердечно-сосудистой системы у собак (ЭКГ-исследования во II стандартном отведении) проводили с помощью прибора «Биограф» (США). Подсчет форменных элементов крови животных производили на автоматическом счетчике крови «Пикоскель» (Венгрия). Биохимические показатели и активность ферментов определяли на биохимическом полуавтоматическом анализаторе ФП-901 «Labsystems» (Финляндия).

После окончания хронических экспериментов проведена эвтаназия для проведения патоморфологического исследования внутренних органов и тканей животных.

Изучение мутагенности СК.

Применен чашечный метод учета мутаций, предложенный Ames et al (1972, 1984) с использованием индикаторных микроорганизмов ауксотрофных по гистидину Salmonella typhimurium ТА98, ТА100, ТА1537. О наличии мутагенного действия СК судили по индукции обратных мутаций от ауксотрофности по гистидину к прототрофности.

Исследование доминантных летальных мутаций проведено на мышах-гибридах F1(CBAxC57Bl6) после внутримышечного введения СК в дозе 0,7 мл/кг (100-кратная суточная доза для человека).

Исследование цитогенетической активности СК методом учета хромосомных аберраций проводили на клетках костного мозга мышей F1(CBAxC57Bl6), подвергавшихся воздействию препарата в дозах 0,7 мл/кг однократно и 0,07 мл/кг ежедневно, на протяжении 4 дней. Метафазы анализировали на наличие в них хромосомных аберраций по рекомендации ВОЗ.

Изучение влияния СК на систему репарации ДНК в SOS-хромотесте проведено на приборе «Биоскрин» («Лабсистемс», Финдляндия).

Исследование эмбриотоксичности и тератогенности СК.

После внутримышечного введения препарата в дозе 0,21 мл/кг беременным крысам линии Wistar с 1 по 19 день гестации, определяли показатели предимплантационной и постимплатационной гибели. Определяли массу плодов, проводили анализ их внешних аномалий и пороков развития. Изучали развитие костного скелета по Доусону. Исследовали внутренние органы на микроанатомических срезах по Вильсону-Дыбану.

Изучение влияния СК на репродуктивную функцию крыс.

Исследования проведены на половозрелых самках и самцах крыс Wistar после внутримышечного введения СК в дозе 0,21 мл/кг (30-кратная высшая суточная доза для человека).

При этом определяли показатели предимплантационной и постимплатационной гибели, а также индекс плодовитости и индекс беременности. При осмотре плодов регистрировали патологические изменения, на 21 день вычисляли процент выживаемости, отмечали массу тела и кранио-каудальный размер крысят.

Исследование аллергизирующих свойств СК.

При изучении анафилактогенной активности животных сенсибилизировали 5-кратным с интервалом в 1 день внутримышечным введением СК, разведенным 1:10 физиологическим раствором. Разрешающие дозы СК вводили внутрибрюшинно морским свинкам на 14 и 21 дни после последней сенсибилизации.

При изучении реакции гиперчувствительности замедленного типа морским свинкам подопытных групп на выстриженный участок кожи спины наносили СК. Реакцию кожи оценивали визуально по шкале кожных проб

Исследование влияния СК на массу и клеточность подколенного лимфоузла проведено на мышах-гибридах F1(CBAxC57Bl6), которым в подушечки задних лап вводили СК или стерильный физиологический раствор (контроль). Через 7 дней у мышей определяли массу и клеточность подколенных лимфоузлов и вычисляли относительный индекс.

Статистическая обработка данных всех экспериментов проведена на компьютере ASUS A6000 Notebook PC с использованием программы Excel для Windows XP. Все результаты представлены в виде значений средних величин ± стандартных отклонений. Полученные в ходе экспериментов данные распределялись по нормальному закону, поэтому для оценки достоверности различий между контролем и опытом применяли критерий «t» Стьюдента и вычисляли коэффициент достоверности. Различия средних показателей считалось достоверным, если величина коэффициента достоверности соответствовала уровню значимости Р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Исследование иммунотропного действия селекартена.

Проведенные исследования показали, что при различных схемах введения селекартен в диапазоне испытанных доз 10-100 мкг/кг стимулирует гуморальный иммунный ответ, регистрируемый по образованию АОК в селезенке иммунизированных эритроцитами барана мышей. В диапазоне указанных доз селекартен также стимулирует клеточный иммунитет, который наблюдался по усилению развития у мышей реакции гиперчувствительности замедленного типа. Следует отметить, что стимуляция селекартеном гуморального и клеточного иммунитета проявляет отчетливую дозовую зависимость. Результаты экспериментов представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1. Влияние селекартена на показатели гуморального иммунного ответа у мышей.

Группы животных	Доза препарата, мкг/кг	Количество АОК на селезенку	Количество кариоцитов в селезенке, х108	Количество АОК на 106 спленоцитов
1 – контроль	107кл/мышь	6000±1672	1,2±0,26	50±13,5
2 – СК	1	5650±788	1,48±0,53	38,17±5,34
3 – СК	10	13000±1138*	1,28±0,3	101,56±8,9*
4 – СК	100	11000±1068*	1,18±0,43	93,22±8,3*

* – здесь и во всех последующих таблицах обозначает статистически достоверные различия с контролем при Р<0,05.

Таблица 2. Влияние селекартена на показатели клеточного иммунного ответа у мышей.

Группы животных	Доза препарата, мкг/кг	Толщина опытной лапки (мм)	Толщина контрольной лапки (мм)	Индекс ГЗТ
1 – контроль	0	3,3±0,3	2,2±0,23	1,5
2 – СК	1	3,3±0,3	2,2±0,22	1,5
3 – СК	10	3,8±0,3	2,3±0,23	1,68*
4 – СК	100	4,0±0,4	2,0±0,2	2*

При профилактическом подкожном введении за 24 часа до заражения мышей летальной дозой Staphylococcus pyogenes селекартен предотвращает развитие смертельной стафилококковой инфекции у животных. В оптимальной дозе 1 мкг/кг СК повышает выживаемость мышей до 75 % при 84 % гибели в контроле. Результаты эксперимента представлены в таблице 3.

Таблица 3. Показатели устойчивости мышей-гибридов F1(CBAxC57Bl6) к стафилококковой инфекции.

Группы животных	Доза препарата, мкг/кг	Количество погибших мышей	% выживших мышей	Продол-жительность жизни, сутки	Кратность увеличения продолжи-тельности жизни
1 – контроль	-	10	16,0	1,4±1,1	-
2 – СК	1	3	74,9	6,9±0,7	4,9
3 – СК	10	4	66,6	4,8±1,2	3,4
4 – СК	100	6	50	3,2±1,5	2,3

В дозах 1 и 10 мкг/кг селекартен повышает, а в дозе 100 мкг/кг снижает фагоцитарную активность перитонеальных клеток мышей. При исследовании влияния селекартена в опытах in vivo на функциональную активность фагоцитарных клеток селезенки и периферической крови мышей было установлено, что препарат в дозах 10 и 100 мкг/кг подавляет образование перекиси водорода, регистрируемой с помощью индуцируемой люминолзависимой хемилюминесценции.