Использование системы тестов для выявления групп с высоким риском развития зависимости от психоактивных веществ (стр. 3 )

Наиболее исследованным из полиморфных локусов гена D2 является Таq1 А (3’- нетранслируемая область). Известно, что наличие А1 аллеля связано с изменением процесса трансляции белка из-за нестабильности мРНК и, как следствие, более низкой плотностью D2 рецепторов в мозге. В исследованиях научного коллектива под руководством академика РАМН не было обнаружено достоверных различий между группами больных алкоголизмом, опийной наркоманией и здоровых субъектов в распределении А1 аллеля DRD2. Однако анализ распределения возможных комбинаций генотипов по двум изучаемым полиморфным локусам D2 (Taq1 A и NcoI) показал, что 43% больных алкоголизмом носителей генотипа N2/N2 имели генотип A1/A2, тогда как в контроле этот показатель составлял 26%. Из Табл.6 видно, что сочетание гетерозиготного генотипа А1/А2 и гомозиготного N2/N2 встречалось чаще в группе больных алкоголизмом с семейной отягощенностью (0,21), чем у больных без семейной отягощенности (0,14) или в контрольной группе (0,09). Сходные данные были получены для больных опийной наркоманией. В этой группе частота встречаемости комбинации A1/A2 – N2/N2 также как в группе больных алкоголизмом с семейной отягощенностью составила 0,21.

Таблица 6

Распределение частот Ncol- и Taq1 А-

генотипов DRD2 у больных алкоголизмом, опийной наркоманией и в контрольной группе

Генотипы	Контроль (n=131)	Больные алкоголизмом (n=233)	Больные алкоголизмом неотягощ. (n=69)	Больные алкоголизмом отягощ. (n=134)	Опийные наркоманы (n=115)
А2/А2 N1/N1	0,14	0,15	0,17	0,16	0,09
А2/А2 N1/N2	0,38	0,31	0,29	0,29	0,30
A2/A2 N2/N2	0,21	0,19	0,21	0,16	0,22
A1/A2 N1/N1	0,0	0,0	0,0	0,0	0,03
A1/A2 N1/N2	0,11	0,11	0,14	0,11	0,12
A1/A2 N2/N2	0,09	0,19	0,14	0,21	0,21
A1/A1 N1/N1	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0
A1/A1 N1/N2	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0
A1/A1 N2/N2	0,05	0,05	0,03	0,06	0,05

2. Исследование полиморфного локуса дофаминтранспортного белка (DAT). Одним из важнейших функциональных белков дофаминовой системы является дофамин-транспортный белок (DАТ), с помощью которого осуществляется обратный захват медиатора пресинаптической терминалью. Ген, кодирующий DАТ человека, расположенный на хромосоме 5 в области р1,37). Изучение 3’-VNTR полиморфизм гена DAT обнаружило, что в группе больных алкоголизмом русской национальности с семейной отягощенностью увеличена частота встречаемости генотипа 9/10 ДАТ (0,41) по сравнению с контрольной группой и группой больных без семейной отягощенности (Chi2=4,3, p=0,05) (Табл.7).

Таблица 7

Частота встречаемости VNTR-генотипов ДАТ

у больных алкоголизмом и контрольных субъектов

Группы	Генотипы
9/10	10/10	9/9	11/9
Контроль (n=131)	0,25	0,68	0,66	0.01
Больные алкоголизмом в целом (n=203)	0,37	0,53	0,69	0,009
Больные с семейной отягощенностью(n=134)	0,41*	0,52	0,64	0,005
Больные без семейной отягощенности (n=69)	0,28	0,65	0,56	0,01

Среди больных опийной наркоманией наблюдалось преобладание гомозигот 10/10 с частотой 0.69, а также гетерозигот 9/10 с частотой 0.24. При сравнительном анализе распределения частот генотипов между выборкой больных и контрольной группой обнаружены достоверные различия (Chi2= 11.42; Р=0.006), прежде всего за счет достоверного увеличения доли гомозиготного генотипа 9/9 (Chi2=7.38; Р=0.008). Возможно, аллель 9 можно рассматривать в качестве аллеля-риска алкоголизма и наркомании.

1. Исследование полиморфного локуса кометилтрансферазы (COMT)

Анализ распределения частот аллелей у больных опийной наркоманией показал, что в группе больных с семейной отягощенностью алкоголизмом наблюдалось увеличение доли гомозиготных генотипов LL (наличие точечной мутации СОМТ, ведущей к замене Val – Met, что вызывает 4-х кратное снижение его активности) и снижение доли гетерозиготных генотипов (Табл.8). Таким образом, у больных опийной наркоманией наблюдается тенденция к увеличению доли гомозиготных генотипов, несущих L-аллель, то есть вариант гена, кодирующего низкоактивную форму фермента.

Для сравнения в таблице также представлены предварительные данные распределения частот генотипов CОМТ у больных алкоголизмом (54 пациента).

Таблица 8

Частоты встречаемости генотипов CОМТ у больных

опийной наркоманией и алкоголизмом

Группа	Частота встречаемости генотипов (%)
LL	HH	LH
Контроль (133)	20,0	20,8	59,1
Больные наркоманией суммарная группа (n=115)	23,3	21,1	55,6
Больные наркоманией с семейной отягощенностью алкоголизмом (n=36)	27,7*	19,4	52,7
Больные алкоголизмом суммарная группа (n=54)	32,0*	13,2	54,7

Можно видеть, что у больных алкоголизмом сохраняется та же тенденция – увеличение доли гомозиготных генотипов LL.

4. Изучение полиморфизма гена тирозингидроксилазы (ТН). В качестве полиморфного локуса был выбран известный локус HUMTH01 в составе интрона 1 гена ТН. Локус представляет собой многократные повторы короткой последовательности нуклеотидов вида (ТСАТ)n, где n - число повторов. Значения n составляют от 5 до 11, соответственно количеству повторов именуются и аллели (варианты) гена ТГ по этому локусу - А5, А6…и до А11. Ряд аллелей – А5, А10, А11 являются редко встречающимися (минорными). При сравнительном анализе распределения частот генотипов между выборкой больных и контрольной группы обнаружены достоверные различия прежде всего за счет увеличения доли генотипов 6/6, и 9/9 (Х2 = 19.00; Р = 0.001) в группе больных. Особое внимание следует обратить на генотип 6.6, редко встречающийся в контрольной группе (1,4%), но достаточно распространенный в группе опийных наркоманов (11,86%).

В группе больных алкоголизмом обращают на себя внимание носители генотипа 9\10-1. Обнаружено, что в этой группе резко снижено количество больных с малопрогредиентым течением алкоголизма (6,7 % против 49 %, ХИ2=9,83, Р=0,0017) и повышено количество больных со среднепрогредиентным течением (47% против 15%, ХИ2=9,14). В этой группе число больных с высокой степенью семейной отягощенности (более 2-х больных алкоголизмом родственников) составило 60% против 14,5% в группе «ПРОЧИЕ» (ХИ2=17,37, Р=0,0001).

Таким образом, для определения степени риска развития зависмости от ПАВ молекулярно-генетические методы исследования могут быть использованы наряду с клинико-генеалогическими, клиническими, экспериментально-психологическими и нейрофизиолгическими методами исследования. Учитывая полигенную природу алкоголизма и наркомании, предполагающей участие нескольких генов и их возможное авзаимодействие, рекомендуется с большой осторожностью относиться к интерпретации обнаружения того или иного «аллеля риска» и рассматривать данные генодиагностики только в комплексе с результатами клинических, психологических и нейрофизиологических исследований.

Нейрохимические исследования функционирования ДА системы.

Для определения индивидуальных маркеров предрасположенности к злоупотреблению ПАВ необходимо, прежде всего, изучать индивидуальные характеристики функционирования ДА системы как основного звена формирования алкогольной и наркотической зависимости.

Функционирование ДА системы у больных алкоголизмом с отягощенной (1 гр.) и не отягощенной (П гр.) алкоголизмом наследственностью выявили значительные различия.

В группе больных с отягощенной наследственностью отмечен низкий уровень свободного ДА плазмы крови. У больных без наследственного отягощения наблюдается тенденция к его повышению. Низкий уровень ДА в плазме крови больных с отягощенной алкоголизмом наследственностью (1 гр.) обусловлен снижением процесса синтеза ДА, о чем свидетельствует снижение содержания предшественника в звене синтеза ДА-ДОФА, а также усилением процесса катаболизма ДА, что подтверждается повышением уровня основного метаболизма ДА-ДОФУК в плазме крови больных данной группы.

В содержании конъюгированных форм КА отмечено достоверное снижение НА в плазме крови больных обеих исследованных групп (1 и П), тенденция к снижению концентрации конъюгированного ДА, несколько более выраженная у больных с наследственной отягощенностью.

О нарушении матаболизма ДА у обследованных больных алкоголизмом с отягощенной и неотягощенной наследственностью с очевидностью свидетельствует изменение процессов гидроксилирования и дезаминирования ДА, осуществляемых ферментами ДБГ и МАО соответственно. У больных с наследственным отягощением (1 гр.) отмечается значимое снижение активности ДБГ, при этом активность ДБГ больных с неотягощенной наследственностью (П гр.) не изменяется, оставаясь на уровне контрольной группы.

Таким образом, низкий уровень ДА, ДОФА, высокая концентрация ДОФУК в плазме крови характерно только для больных с наследственным отягощением. У больных без наследственного отягощения наблюдается обратная тенденция к повышению свободных форм ДА и НА, высокому уровню ДОФА и низкой концентрации ДОФУК в плазме крови.

Особо следует указать на низкую ферментативную активность фермента ДБГ у больных с наследственно отягощенным алкоголизмом в состоянии ремиссии. При этом у больных алкоголизмом, в семьях которых не было родственников, страдающих этим заболеванием, активность ДБГ оставалась в пределах нормы. Факт низкой активности фермента ДБГ у больных алкоголизмом с наследственной отягощенностью этим заболеванием в период длительной ремиссии (12 месяцев) свидетельствует о том, что нарушения катехоламиновой нейромедиации у них, наиболее вероятно, являются врожденными, генетически детерминированными.

Таким образом, исследования функционирования ДА системы у больных алкоголизмом с семейной отягощенностью этим заболеванием указывают на системные нарушения функций ДА системы, подтверждением чего является выраженный дефицит свободных форм ДА, выполняющих нейромедиаторные функции. Причиной дефицита является нарушение процессов синтеза и катаболизма ДА, о чем свидетельствует низкое содержание ДОФА и высокое ДОФУК в плазме крови больных алкоголизмом с наследственной отягощенностью.

Низкая же активность ДБГ и МАО свидетельствует о ферментативной дисфункции, что в совокупности с нарушенным синтезом и катаболизмом ДА подтверждает постулат о системном нарушении функций ДА системы у больных алкоголизмом с отягощенной этим заболеванием наследственностью.

Вопрос о сотношении деятельности периферических и центральных нейромедиаторных КА процессов до сих пор дискутируется. Однако известно, что длительная алкогольная интоксикация повышает проницаемость гемато-энцефалического барьера. Кроме того, известно, что периферические КА проникают в мозг в области гипоталамуса.

Можно предполагать, что нарушения функционирования ДА системы у больных с отягощенной наследственностью на периферии отражают нарушения ДА нейромедиации в мозге, в первую очередь, в лимбических структурах.

Тот факт, что активность фермента ДБГ остается значительно сниженной у больных с наследственным отягощением в период длительной ремиссии свидетельствует, что нарушения катехоламиновой нейромедиации у этих больных наиболее вероятно являются врожденными, генетически детерминированными.

Заключение

Среди общей популяции населения существует категория лиц с врожденной предрасположенностью к злоупотреблению психоактивными веществами (ПАВ) и к формированию наркоманий и алкоголизма. Эта группа, несомненно, требует специального внимания и специфических, интенсивных профилактических мероприятий, в том числе, возможно, и превентивного медикаментозного вмешательства. Известно, что зависимость от ПАВ является заболеванием мозга, проявляющимся комплексом поведенческих нарушений, являющихся результатом взаимодействия генетических, биологических, психосоциальных факторов. Результаты многочисленных исследований позволяют сделать заключение, что в основе развития синдрома зависимости лежит влияние ПАВ на нейрохимические и другие процессы мозга. Формирование зависимости, прежде всего, связано со структурными и функциональными изменениями в целом ряде образований ЦНС. Воздействие психоактивных веществ приводит к дисфункции нейрохимических, нейрофизиологических и других систем мозга.

Наличие среди подростков группы лиц с высоким биологическим риском зависимости от алкоголя ставит вопрос о необходимости идентификации этой группы с целью проведения специальных профилактических и реабилитационных мероприятий. Для реализации этой важной задачи необходимы объективные методы для выделения лиц, склонных к развитию наркологических заболеваний, а также для выявления индивидуальных характеристик основных функций катехоламиновой, главным образом дофаминовой нейромедиаторной системы, ибо известно, что постоянным признаком генетической предрасположенности, являются нарушение синтеза, рецепции медиаторов, в частности дофамина, что приводит к функциональным изменениям в развитии когнитивной функции подростка. Поэтому изучение особенностей функционирования катехоламиновой системы, а также процессов нрушения корковой деятельности на этапе формирования высшей когнитивной сферы, используя электрофизиологические методы исследования, чрезвычайно важно и актуально.

Проведение соответствующих профилактических мероприятий среди этой категории лиц может значительно снизить заболеваемость наркоманиями и алкоголизмом, так как именно они составляют основной контингент лиц в наркологических стационарах и реабилитационных центрах.

Для осуществления таких мероприятий необходимы два основных условия: - наличие медико-генетических консультаций и - наличие комплекса маркеров, позволяющих выявить врожденную предрасположенность к злоупотреблению ПАВ.

Основными принципами организации медико-генетических консультаций являются: штатное их обеспечение, а именно наличие врача-генетика и врача-нарколога с опытом клинических генетических исследований, а также наличия помещений для выявления биологических маркеров предрасположенности – электрофизиологического, психофизиологического, биохимического и молекулярно-генетического.

Необходимо подчеркнуть, что не может существовать единственного маркера для диагностики предрасположенности к злоупотреблению ПАВ – это всегда комплекс маркеров, причем состав его может варьировать у различных субъектов.

Работы по поиску маркеров предрасположенности к наркоманиям и алкоголизму продолжаются, и поэтому, возможно, что в будущем появятся некоторые новые показатели.

На сегодняшний день предлагаются следующие маркеры для диагностики индивидуальной предрасположенности к злоупотреблению ПАВ:

1. Наличие 2-х или более кровных родственников, страдающих алкоголизмом или наркоманиями.

2. Раннее курение и злоупотребление алкоголем.

3. Синдром минимальной мозговой дисфункции в детстве.

4. Эмоциональная нестабильность, повышенная возбудимость, склонность к депрессиям.

5. Трудный пубертат с преобладанием психического инфантилизма.

6. Дефицит внимания, снижение уровня формирования способности к избирательной концентрации и устойчивости внимания.

7. Чувство неудовлетворенности, постоянный поиск новизны.

8. Редукция компонентов поздних волн вызванного электрического ответа коры мозга.

9. Низкая концентрация в моче и крови ДА, чему, как правило, сопутствует низкий уровень ДОФА и высокое содержание ДОФУК.

10. Низкая активность дофаминбетагидроксилазы.

11. Сочетание генотипа А1/А2 и N2/N2 гена, кодирующего Д2 рецепторы.

12. Генотип 9/10 гена дофаминтранспортного белка (ДАТ).

13. Генотип LL гена, кодирующего фермент катехолортометилтрансферазу (КОМТ).

14. Генотип 9/10-1 гена фермента тирозингидроксилазы (ТГ).

Наличие более шести из этих признаков (среди которых должно быть не менее 2-4 биологических) дает основание отнести обследуемого субъекта к группе высокого биологического риска в отношении наркологических заболеваний.