Доклинические испытания препарата (стр. 2 )

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

НИИ ВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ АМН СССР.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е

по исследованию противогриппозной активности препарата “ВИВАТОН”.

В экспериментах исследовали противогриппозное действие препарата “ВИВАТОН” после выпаривания аммиака при различных способах аппликации: интраназально (и/н), внутрибрюшинно (в/б), ректально, перорально, внутривенно (в/в), а также препарата “ВИВАТОН” в присутствии аммиака при втирании в кожу. В качестве модельных животных использовали мышей линии BALB/c с массой 18-20 гр. Определяли титры вируса в легких, а также процент выживших животных после заражения патогенным для мышей штаммом вируса гриппа A/PR/8/34 в дозе 5 LД(50), вызывающей 100% гибель в контрольной группе мышей. Препаратат использовали в дозе 20 мкл.

Для определения титров вируса в легких инфицированных мышей извлеченные легкие замораживали, растирали в ступке, готовили суспензию из расчета 0,5 мл на каждые 100 мл века легкого и делали 10-кратные разведения. По 0,1 мл каждого из разведений вводили в аллантоисную полость 4-х, 9-ти дневных куриных эмбрионов (КЭ). Через 48 часов определяли наличие вируса по реакции гемагглютинации в каждом КЭ. За титр вируса принимали величину, обратную крайнему разведению суспензии, при заражении которой в 2 КЭ развился вирус, а в двух других – нет.

Результаты экспериментов представлены в таблице 1, 2, 3.

Как видно из таблиц, «ВИВАТОН» обладал выраженным защитным действием против вируса гриппа при пероральном введении однократно в течение (3-х –12-ти дней после заражения вирусом) (табл.1), а также при внутривенном введении препарата (однократно за одни сутки или двукратно за трое суток и одни сутки до заражения вирусом) (табл.2,3). Некоторое увеличение выживаемости наблюдалось также в группе мышей, которым спаивали «ВИВАТОН» в разведении 1:10, начиная за 2 дня до заражения и заканчивая через 12 дней после заражения вирусом совместно с голодной диетой в течение 3-х суток после заражения вирусом (табл.2).

При изучении влияния «ВИВАТОНА» на эффективность размножения вируса в легких инфицированных животных выявили значительное падение титров вируса в легких инфицированных животных (на 2-3 порядка по сравнению с контролем) в случае в/в введения препарата, а также при спаивании «ВИВАТОНА» совместно с 3-х суточной голодной диетой.

При внутрибрюшинном, интраназальном и ректальном введении препарата «ВИВАТОНА» не было обнаружено выраженного защитного эффекта.

Ст. научный сотрудник

Лаборатории патогенеза вирусных

инфекций, канд. биол. наук Л. А. МАЖУЛЬ

Зав. лабор. патогенеза

вирусных инфекций, доктор

биол. наук

О. Н. АГЕЕВА

Подпись Мажуль и Агеевой верна.

Заверяю.

Ученый секретарь института,

канд. биол. наук

Н. П. КРЮКОВА

ТА Б Л И Ц А № 1.

№ п\п	П Р Е П А Р А Т Ы	КОЛ-ВО МЫШЕЙ	ВЫЖИВАЕМОСТЬ
1.	«ВИВАТОН» внутрибрюшинно 3 дня после заражения	10	10 %
2.	«ВИВАТОН» интерназально 3 дня после заражения	10	0
3.	«ВИВАТОН» ректально 3 дня после заражения	10	0
4.	«ВИВАТОН» перорально 3 дня после заражения	5	60%
5.	«ВИВАТОН» перорально 12 дней после заражения	5	80 %
6.	Контроль (PR/8/34 5LD(50))	10	0

Т А Б Л И Ц А № 2.

№ п\п	П Р Е П А Р А Т Ы	Кол-во мышей	Выживаемость ( %)	Т в легких
1.	Виватон поилка (за 2 суток и дальше)	10	0%	6,5
2.	Виватон поилка ( 3 суток голод) и дальше	10	24%	4,7
3.	Виватон в/в (1 :2) однократно за 1 сутки	10	50 %	4,7
4.	Виватон в/в (1: 2) одновременно с вирусом)	10	0%	5,5
5.	Контроль (PR/8/34 5 LД (50)	10	0%	7,1

Т А Б Л И Ц А №3

№ п\п	П Р Е П А Р А Т Ы	Кол-во мышей	Выживаемость	Т в легких
1.	ВИВАТОН втирание (за 5 сут. и дальше)	10	0%	8,0
2.	ВИВАТОН В/В (1:5) (однократно за 1 сутки до заражения)	10	40 %	6,75
3.	ВИВАТОН В/В (1:2) (двукратно за 3 и 1 сутки до заражения)	10	50%	6,25
4.	ВИВАТОН В/В (1:2) (однократно за 1 сутки до заражения)	10	10%	6,25
5.	Контроль (PR/8/34 5L(50)	10	0%	9,2

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

НИИ ВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ АМН СССР.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е.

По исследованию антимикробной активности препарата “ВИВАТОН”.

В эксперименте “ВИВАТОН” изучали в лекарственной форме, используемой для наружного применения и представляющей собой жидкость темно-коричневого цвета. Проведены исследования в опытах in vitro и in vivo.

В опытах in vitro исследования антимикробной активности препарата проводили методом двукратных серийных разведений в соответствующей каждому микроорганизму жидкой питательной среде. В качестве тест-микроорганизмов использовали: Staphylococcus aureus 209-P, Escherichia, coli 344, Proteus vulgaris 3137, Pseudomonas aeruginosa 44 B1V, Мicrosporum lanosum, Candida albicans 1755.

Посевы инкубировали при температуре 37-38 С для выращивания бактерий и при температуре 28-30 С для выращивания грибов. Антимикробную активность (в разведении) определяли по последнему разведению, в котором визуально не наблюдали роста микроорганизмов.

Установлено (таблица 1), что активность “ВИВАТОНА” проявляется в отношении ряда грамположительных и грамотрицательных бактерий (стафилококк, кишечная палочка, синегнойные бактерии, протей), мицелиальных грибов и дрожжеподобных грибов рода Candida.

В опытах in vivo изучение химиотерапевтического действия «ВИВАТОНА» проведено на модели свежеинформацированной кожно-мышечной раны белых крыс. Рану создавали у белых крыс весом 90-100 г на депилированном участке кожи спины. Под легким эфирным наркозом вырезали кожный лоскут прямоугольной формы (30х10 мм), после чего в рану втирали 0,3 мл взвеси в физиологическом растворе с готовым агаром суточной культуры Staphylococcus aureus содержащей 2х10 3 микробных клеток в 1 мл. Лечение начинали через 72 часа после заражения и проводили ежедневно 1 раз в сутки в течение всего опыта (до полного заживления раны) путем смачивания раневой поверхности растворами препаратов. Результаты учитывали до средней суммарной площади поражения (в мм) и сроком заживления (в сутках). Длительность опыта – 21 день. В качестве препарата сравнения использовали спиртовой раствор хлорофиллипта, который перед применением разводили согласно инструкции стерильной дистиллированной водой в соотношении 1:30. Контрольных животных оставляли без лечения.

Результаты исследования представлены в таблице 2.

Исследования показали, что «ВИВАТОН» при аппликации на экспериментальную рану оказывает лечебный эффект, статистически достоверный в сравнении с инфицированными животными, как не леченными (контроль без лечения), так при лечении их специальным растительным препаратом (раствор хлорофиллипта).

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о целесообразности проверки эффективности препарата «ВИВАТОН» в клинических условия при лечении ран.

Таблица 1.

Антимикробный спектр препарата «ВИВАТОН» в опытах.

Микроорганизм	Активность в разведении
Staphylococcus aureus 209-P	1:4, част. 1:8
Escherichia coli 844	1:2, част. 1:4
Proteus vulgaris M-3137	1:4
Pseudomonas aeruginosa 44 B1V	1:2
Microsporum lanosum	1:16
Candida albicans 1755	1:2 – 1:8

Исследование химиотерапевтического действия препарата “ВИВАТОН” на модели инфицированной раны белых крыс.

Лечение	Число животных в группе	Сроки заживления раны (сутки)	Конт.	P Конт.	хлор	P Хлор
Виватон	11	7,0+0,3(17,7+16,3)	3,95	0,005	2,03	0,02
	10	10,2+0,3(10,9+17,5)	3,4	0,05	-	-
Контр. (без лечения)	11	13,3+0,5(20,4+18,2)

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА