Доклинические испытания препарата (стр. 1 )

Доклинические испытания препарата

МИНИСТЕРСТВО МЕДИЦИНСКОЙ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ НИИ ТЕХНОЛОГИИ И БЕЗОПАСНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ.

«УТВЕРЖДАЮ»:

Зам. директора НИИ Технологии и

безопасности лекарственных средств,

доктор медицинских наук

В. Г. ТРЕСКОВ

« 28 » ИЮНЯ 1989 г.

О Т Ч Е Т.

«ИЗУЧЕНИЕ МУТАГЕННОГО И ДНК-ПОВРЕЖДАЮЩЕГО

ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА «ВХ» НА ИНДИКАТОРНЫХ МИКРООРГАНИЗМАХ»

Руководитель темы:

Зав. лабораторией мутагенности,

Доктор биологических наук

Г. Н. ЗОЛОТАРЕВА

Купавна, 1989 г.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е:

В лаборатории мутагенности НИИ технологии и безопасности лекарственных средств проведена оценка мутагенных и ДНК-тропных свойств препарата «ВХ» на микроорганизмах с помощью метода учета генных мутаций на индикаторных штаммах Salmonella typhimurium (тест Эймса) и учета ДНК повреждающего действия на индикаторных штаммах

E coli (Dec – тест) .

Установлено, что препарат «ВХ» не индуцирует генных мутаций в условиях метаболической активации ин витро и не проявляет ДНК-повреждающей активности на индикаторных штаммах микроорганизмов. Зарегистрировано антибактериальное действие препарата «ВХ» в исходной концентрации и при разведении.

Окончательный вывод о наличии или отсутствии мутагенных свойств у исследуемого препарата возможен после проведения системной оценки его на млекопитающих в соответствии с «методическими рекомендациями по проверке мутагенных свойств у новых лекарственных средств», изданными ФК МЗ СССР, 1981 год.

Зав. лабораторией мутагенности НИИ лекарств

доктор биолог. наук Г. Н. ЗОЛОТАРЕВА

« 26 » июня 1989 г.

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

О Т Ч Е Т.

« ИЗУЧЕНИЕ МУТАГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА «ВИВАТОН» В СОМАТИЧЕСКИХ И ЗАРОДЫШЕВЫХ КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ В УСЛОВИЯХ ИН ВИВО».

Исполнитель:

Научный сотрудник лаборатории

Клинической иммунологии

I-го Московского медицинского института

им. И. М. СЕЧЕНОВА,

О. М. БЕСНОВАТ.

Консультант:

Зав. лабораторией мутагенности НИИ

Лекарственных средств

Доктор биолог. наук

Г. Н. ЗОЛОТАРЕВА

Москва, 1989 г.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е.

Проведено изучение потенциальной мутагенной активности препарата «ВИВАТОН» на млекопитающих в условиях ин виво с помощью методов, входящих в стандартную систему испытаний в соответствии с утвержденными Фармакологическим комитетом МЗ СССР «Методическими рекомендациями по проверке мутагенных свойств у новых лекарственных препаратов», 1981 год.

Исследована способность препарата «ВИВАТОН» индуцировать аберрации хромосом в клетках костного мозга мышей, а также доминантные летальные мутации в зародышевых клетках мышей.

Экспериментальные данные, полученные в ходе проведенной оценки генетической активности препарата «Виватон» свидетельствуют об отсутствии мутагенного действия исследованного препарата в соматических и генеративных клетках млекопитающих.

Консультант: зав. лабор. мутагенной Науч. сотрудник лаб. клинической

НИИ технологии и безопасности иммунологии 1-го Московского

лекарственных средств медицинского института им. Сеченова

д. б.н Г. Н. ЗОЛОТАРЕВА О. М. БИСНОВАТ

« 28 » ИЮНЯ 1989 г.

Подпись зав. лабораторией мутагенности НИИ технологии и безопасности лекарственных средств заверяю: Г. Н. ЗОЛОТАРЕВА.

Зав. отделом кадров НИИ лек. средств Н. А. ПОЛУЖКО

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

Результаты изучения способности препарата “ВИВАТОН”

индуцировать доминантные летальные мутации в зародышевых клетках мышей.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е

Проведено изучение потенциальной мутагенной активности препарата “ВИВАТОН” на млекопитающих в условиях ин виво с помощью методов, входящих в стандартную систему испытаний в соответствии с утвержденными Фармакологическим комитетом МЗ СССР “Методическими рекомендациями по проверке мутагенных свойств у новых лекарственных препаратов”,1981 г.

Исследована способность препарата “ВИВАТОН” индуцировать аберрации хромосом в клетках костного мозга мышей, а также доминантные летальные мутации в зародышевых клетках мышей.

Экспериметальные данные, полученные в ходе проведенной оценки генетической активности препарата “ВИВАТОН”, свидетельствуют об отсутствии мутагенного действия исследованного препарата в соматических и генеративных клетках млекопитающих.

Консультант: зав. лаб. мутагенности Научн. сотрудник лаб. Клинической

НИИ технологии и безопасности иммунологии Московского мед.

Лекарственных средств, д. б.н. института им. Сеченова

28 июня 1986 г.

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

МИНИСТЕРСТВО МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ СССР

Всесоюзный научный центр по безопасности биологически активных веществ

/ ВНЦ БАВ/.

О Т Ч Е Т

Об изучении иммунотоксических и аллергизирующих свойств препарата «ВИВАТОН».

Ответственный исполнитель:

Зав. Лабораторией иммунотоксикологии

и аллергии ВНЦ БАВ,

канд. биол. наук Г. П. КУДРИНА

Купавна, 1989 г.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализируя результаты проведенных экспериментов по изучению иммунотоксических и аллергенных свойств образцов препарата “ВИВАТОН” (экстракт растений 1,содержащий 10 % аммиака и экстракт растений 2, в котором аммиак выпарен), можно сделать следующее заключение:

Экстракт растений I:

· Не вызывает каких-либо изменений кожных покровов морских свинок.

· При накожном применении не влияет на реакцию специфического лизиса лейкоцитов.

· Незначительно усиливает реакцию специфической агломерации лейкоцитов при накожном применении (опыт 8,0 + 1,4%, контроль 3,1 + 1,6 %).

· Стимулирует бласттрансформацию клеток тимуса (индекс стимуляции – опыт 317,9,

Контроль 143,0).

· Подавляет бласттрансформацию клеток селезенки (индекс стимуляции – опыт 107,1,контроль 283,5).

Экстракт растений II:

· Проявляет аллергизирующее действие в тесте гиперчувствительности замедленного типа (индекс реакции – опыт 0,25 + 0,03, контроль 0,08+ 0,02).

· Не влияет на реакцию специфического лизиса лейкоцитов.

· Усиливает реакцию специфической агломерации лейкоцитов (опыт 28,8 + 6,6%, контроль 6,0 + 2,0 %).

· Подавляет бласттрансформацию клеток селезенки (индекс стимуляции – опыт 78,6, контроль 283,5).

· Усиливает бласттрансформацию клеток тимуса (индекс стимуляции – опыт 349,6, контроль 143,0).

· Усиливает выработку интерлейкина – I (индекс реакции – опыт 19,3, контроль 7,0).

ЗАВ. ЛАБОРАТОРИЕЙ ИММУНОТОКСИКОЛОГИИ И АЛЛЕРГИИ В Н Ц Б А В,

Канд. биолог. наук Г. П. КУДРИНА

КУДРИНОЙ заверяю

ст. инспектор ОК Р. К. КОРОШКОВИ

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

МОСКОВСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ им. СЕЧЕНОВА.

“УТВЕРЖДАЮ”

Зам. проректора по

научной работе

О. А. ПРОНИН

21.10.1989 г.

А К Т

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПРОВЕРКИ ВЛИЯНИЯ

ПРЕПАРАТА “ВИВАТОН” НА ИММУНОЛОГИЧЕСКУЮ РЕАКТИВНОСТЬ ЖИВОТНЫХ.

На экспериментальной модели иммуного ответа мышей, получивших внутривенно эритроциты барана, изучено влияние препарата на процесс формирования пула антителообразующих клеток в селезенке, выявляемых методом локального гемолиза в геле (реакция Ерне). Проверено влияние препарата на иммунный ответ мышей, получавших как высокую дозу антигена (на предмет выявления возможных иммуннодепрессивных свойств), так и низкую, для выявления возможных иммуностимулирующих свойств.

Отработана оптимальная схема введения препарата: доза, кратность, путь введения отношения к времени иммунизации, проверено его влияние на ход всей кривой иммунного ответа.

В опытах на взрослых мышах, весом 30-40 г линии ВА В, а также гибридах (СВА х С57В1) Г1 исследовали влияние препарата на гуморальный иммунитет. Об уровне иммунореактивности животных судили по численности пула антителообразующих клеток (АОК), формирующегося в селезенке в ответ на внутривенную иммунизацию эритроцитами барана (ЭБ).

Подопытным мышам за сутки до иммунизации 3-5х106 ЭБ вводили препарат “ВИВАТОН” в дозах: 0,1 мл; 0,2; 0,5мл, 1,0 мл, внутривенно или внутрибрюшинно (примерно от 2,5 до 30,0 мл/ кг веса). Контрольным животным вместо “ВИВАТОНА” вводили физиологический раствор.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е

по изучению генетической безопасности препарата “ВИВАТОН”.

Данные по изучению потенциальной генетической активности препарата “ВИВАТОН” изложены в 2-х отчетах: “Изучение мутагенного и ДНК-повреждающего действия препарата “ВХ”на индикаторных микроорганизмах” и “Изучение мутагенного действия препарата “ВИВАТОН” в соматических и зародышевых клетках млекопитающих в условиях ин виво”.

Работа проведена по стандартной схеме испытаний в соответствии с методическими рекомендациями по оценке мутагенности новых лекарственных средств”, изданными ФК МЗ СССР 1981 г. При исследовании потенциальной мутагенной активности применен ряд методов углубленного изучения генетической безопасности лекарственных средств с использованием различных биологических объектов: бактерий, соматических и зародышевых клеток млекопитающих. Испытания на мутагенность дополнены изучением ДНК - повреждающего действия препарата на бактериях.

Экспериментальный материал изложен последовательно, профессионально грамотно, обработан статистически, дополнен необходимыми литературными ссылками. Отчет составлен в соответствии с ГОСТом.

Как следует из представленных данных, препарат “Виватон” не проявил активности ни в одном из использованных тестов, что свидетельствует об отсутствии мутагенной активности его. ДНК – повреждающего действия препарата “Виватон” могут быть свидетельством отсутствия потенциальной канцерогенной активности исследованного препарата.

Заведующий лабораторией мутагенности

НИИ технологии и безопасности

лекарственных средств

Доктор биологических наук

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

Всероссийский научный центр по безопасности Биологически

активных веществ / ВНЦ БАВ/.

ОТЧЕТ ПО ИЗУЧЕНИЮ ПРОТИВОПУХОЛЕВЫХ, АНТИКАНЦЕРОГЕННЫХ АНТИМЕТАСТАТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА “ВИВАТОН”.

ИСПОЛНИТЕЛИ: Зав. лаб. мутагенности, профессор,

Доктор биол. наук Г. Н. ЗОЛОТАРЕВА

Ст. науч. сотрудник, канд. биол. наук И. С. ЛОГИНОВА

Зав. лаб. Противоопухолевых средств,

Доктор мед. наук А. С. КИНЗИРСКИЙ.

К У П А В Н А, 1989 г.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е.

Препарат “ВИВАТОН” в ежедневной дозе 0,5 мл на животные при хроническом пероральном введении обладает значительным антиметастатическим эффектом на модели спонтанного метастазирования карценомы LLC и выявляет противоопухолевую активность.

На модели экспериментального канцарогенеза, вызванного уретаном (рак легкого), препарат «ВИВАТОН» обладает антиканцерогенной активностью, вызывая уменьшение образования аденом в легких мышей.

Полученные экспериментальные данные показывают, что целесообразно изучить препарат «ВИВАТОН» по полной программе на антиметастатическую активность, с учетом непосредственного воздействия препарата на метастазы в условиях оперативного удаления первичной опухоли и в условиях комбинированного воздействия «ВИВАТОНА» с цитостатиками, как на первичную опухоль, так и на метастазы.

Кроме того, необходимо изучить возможные механизмы антиканцерогенного действия препарата «ВИВАТОН».

В частности рассмотреть антипромоторную активность препарата (методом Комана, позволяющим оценить деление межклеточных контактов в альвеолах, легких и гепатоцитах печени под действием изучаемого препарата). Учитывая тот факт, что препарат «ВИВАТОН» является индикатором интерферона, следует рассмотреть механизм его иммуномодулирующего действия.

С О Д Е Р Ж А Н И Е.

I. Острая токсичность и переносимость «Виватона» различными

видами лабораторных животных.

2. Исследование токсичности «Виватона» при внутрижелудочном введении и накожном нанесении крысам в течение 3 мес.

2.1. Условия проведения эксперимента и методы исследования.

2.2. Действие «Виватона» на организм крыс в условиях трехмесячного хронического эксперимента.

2.3. Патоморфологическое исследование крыс после 3-месячного назначения «Виватона» внутрь в дозах 10 и 25 мл/ кг и наружно в дозе 10 мл/ кг.

2.3.1. Макроскопическое исследование.

2.3.2. Микроскопическое исследование.

3. Исследование токсичности «Виватона» при внутрижелудочном и накожном введении кроликам в течение 3-х месяцев.

3.1. Условия проведения эксперимента и методы исследований.

3.2. Действие «Виватона» на организм кроликов в условиях трехмесячного хронического эксперимента.

исследование кроликов после 3-месячного назначения «Виватона».

3.3.1. I группа – контроль.

3.3.2. П группа – «Виватон» 25 мл/кг в желудок.

3.3.3. Ш группа – «Виватон» 10 мл/кг наружно.

4. Разработка мероприятий по терапии острых отравлений при передозировке «Виватона».

5. Изучение эмбриотоксических свойств «Виватона».

Литература • • • •

Р е ф е р а т

«Виватон», острая и хроническая токсичность, исследование на крысах, кроликах, изучение эмбриотоксичности и тератогенности».

Проведено токсикологическое изучение «Виватона», суммарного препарата, полученного экстракцией из лекарственных растений.

При однократном внутрижелудочном введении и при нанесении на кожу различным видам лабораторных животных установлено, что «Виватон» является нетоксичным, практически безвредным веществом / ЛД 50 свыше 100 мл/кг/.

В условиях хронического 3-месячного эксперимента на крысах при введении «Виватона» в желудок в дозе 10 и 25 мл/кг и при накожных аппликациях в дозе 10 мл/кг не выявлено повреждающего действия препарата на основные органы и системы организма под­опытных животных. В условиях этого опыта в испытанной дозе 25 мл/кг препарат после 3-месячного введения в желудок вызывает умеренное повышение свертываемости крови.

При 3-месячном назначении «Виватона» кроликам внутрь в дозе 25 мл/кг и наружно в дозе 5 мл/кг у препарата не выявлено токсических и местнораздражающих свойств.

В диапазоне испытанных доз 10-25 мл/кг при введении в желудок и наружно беременным крысам с I по 19 и с 6 по 16 сутки у «Виватона» не установлено эмбриотоксических и тератогенных свойств.

Таким образом, результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод об отсутствии эмбриотоксических и тератогенных свойств у «ВИВАТОНА»

в дозах 10 и 25 мл\ кг при введении крысам в желудок и наружно с 6 по 16 день беременности, а также в дозе 25 мл\ кг при введении внутрь с 1 по 19 день беременности.

ПОДПИСИ: Кандидат мед. наук Ю. Б. КУЗНЕЦОВА

Кандидат биол. наук В. В БОРТНИКОВА

Кандидат биол. наук Л. В. КРЕНКОВА

«УДОСТОВЕРЯЮ»

Ученый секретарь канд. биол. наук В. Н. КИСЕЛЕВ

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

МИНИСТЕРСТВО МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

Всесоюзный научно-исследовательский институт лекарственных растений ( В И Л Р ).

ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ «ВИВАТОНА».

Лаборатория токсикологии и исследования побочного действия

лекарственных препаратов.

Москва 1990 г.

В В Е Д Е Н И Е.

В лаборатории иммунотоксикологии и аллергии Всесоюзного научного центра по безопасности биологически активных веществ проведена экспериментальная работа по изучению иммунотоксических и аллергизирующих свойств препарата «ВИВАТОН», являющегося экстрактом из суммы лекарственных растений.

На исследовании было представлено два образца препарата «ВИВАТОН»:

Экстракт растений I, в котором в качестве консерванта содержится 10% аммиака и экстракт растений II, в котором аммиак выпарен и присутствуют только его следы.

Экстракт растений I предлагается для наружного применения в качестве антибактериального и противовоспалительного средства.

Экстракт растений II предполагается использовать для приема внутрь.

Для изучения иммунотоксических и аллергизирующих свойств указанных образцов препарата «ВИВАТОН» использованы современные информативные и широко применяемые в иммунологии методы, позволяющие оценить влияние исследуемых препаратов на различные звенья иммунной системы организма и охарактеризовать возможные аллергические реакции на введение препаратов (клеточный и гуморальный иммунный ответ, различные типы аллергических реакций).

Работа проведена в соответствии с требованиями Фармакологического комитета Минздрава СССР по доклиническому изучению безопасности лекарственных средств (9).

З А К Л Ю Ч Е Н И Е.

Анализируя результаты проведенных экспериментов по изучению иммунотоксических и аллергенных свойств образцов препарата “ВИВАТОН” (экстракт растений 1,содержащий 10% аммиака и экстракт растений 2, в котором аммиак выпарен), можно сделать следующее заключение:

Экстракт растений I:

· Не вызывает каких-либо изменений кожных покровов морских свинок.

· При накожном применении не влияет на реакцию специфического лизиса лейкоцитов.

· Незначительно усиливает реакцию специфической аггломерации лейкоцитов при накожном применении (опыт 8,0 + 1,4%, контроль 3,1 + 1,6 %).

· Стимулирует бласттрансформацию клеток тимуса (индекс стимуляции – опыт 317,9,

Контроль 143,0).

· Подавляет бласттрансформацию клеток селезенки (индекс стимуляции – опыт 107,1,контроль 283,5).

Экстракт растений II:

· Проявляет аллергизирующее действие в тесте гиперчувствительности замедленного типа (индекс реакции – опыт 0,25 + 0,03, контроль 0,08+ 0,02).

· Не влияет на реакцию специфического лизиса лейкоцитов.

· Усиливает реакцию специфической аггломерации лейкоцитов (опыт 28,8 + 6,6%, контроль 6,0 + 2,0 %).

· Подавляет бласттрансформацию клеток селезенки (индекс стимуляции – опыт 78,6, контроль 283,5).

· Усиливает бласттрансформацию клеток тимуса (индекс стимуляции – опыт 349,6, контроль 143,0).

· Усиливает выработку интерлейкина – I (индекс реакции – опыт 19,3, контроль 7,0).

ЗАВ. ЛАБОРАТОРИЕЙ ИММУНОТОКСИКОЛОГИИ И АЛЛЕРГИИ В Н Ц Б А В,

Канд. биолог. наук Г. П. КУДРИНА

КУДРИНОЙ заверяю

Ст. инспектор ОК Р. К. КОРОШКОВИ

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

Министерство медицинской промышленности.

Всесоюзный научно-исследовательский институт лекарственных

растений (ВИЛР).

Токсикологическое изучение «ВИВАТОНА».

Лаборатория токсикологии и исследования

побочного действия лекарственных препаратов.

Москва 1990 г.

Коэффициенты массы внутренних органов 4-недельных крысят / масса органов в граммах на 100 г массы тела, подвергавшихся в принатальном периоде развития воздействия «ВИВАТОНА».

Исследуемые органы	Группы подопытных 1 группа - контроль	животных 2 группа – «ВИВАТОН» 25 мл/кг
Сердце	0,48 + 0,03	0,52 + 0,02
Легкие	0,97 + 0,07	1,03 + 0,07
Печень	3,97 + 0,12	4,15 + 0,14
Почки	1,07 + 0,04	1,13 + 0,03
Селезенка	0,41 + 0,03	0,46 + 0,04
Надпочечники	0,045 + 0,002	0,042 + 0,003
Семенники	1,04 + 0,03	1,06 + 0,02