Доклинические испытания препарата (стр. 3 )

НИИЭМ им. Гамалеи

О Т Ч Е Т

об интерферониндуцирующей активности “ВИВАТОНА”.

ВИВАТОН” фильтровали через миллипоры, диаметром 45 микрон. В результатае фильтрования через миллипоры профильтровалось только низкомолекулярная фракция препарата, высокополимерный компонент, непрошедший через миллипоры, не был исследован.

В работе использовали две дозы “ВИВАТОНА”:

1. Цельный препарат 2.Дестикратно разведенный.

Способы введения:

1.Через рот (пероральный, p/оs)

2. внутрибрюшинный, (в/бр)

Использовали мышей линии СВА, наиболее чувствительных к инжукции ИФН животных.

Органы (селезенка, печень, тимус, лимфоузлы, костный мозг и кровь) брали через 5, 24, 48, и 72 часа после введения препарата.

Суспензии клеток этих органов готовили мягким даунсированием в среде 199 + 10% сыворотки крупного рогатого скота. Костный мозг выдували из бедренных костей животных шприцем. Полученные суспензии 2-ды отмывали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин. в той же среде. Осадок клеток ресуспендировали в среде культивирования иммуноцитов:RPM2-1640+15% фетальный телячьей сыворотки +1мм

Hepes-буфера+1мм глутамина+ антибиотики(100ед. гентамицина+0,1%глюкозы.)

Концентрация клеток составляла 1х 10(6) в 0,1 мл.

Клетки культивировали в платах 96-луночных по 0,1 мл на лунку.

Культивирование проводили в термостате с 5% СО(2) при37С.

Каждый день отбирали пробы супернатанта из трех одинаковых лунок.

Титры интерферона (ИФН) опреляли в пробах культуральной жидкости путем титрования на чувствительной к мышиному интерферону (ИФН) линии клеток L-929.

В качестве тест-вируса использовали вирус анцефаломиокардита мышей (ЕМС)-наиболее чувствительная система титрования ИФН. За титр ИФН принимали последнее разведение пробы, обеспечивающее 50% защиту клеток от разрушения вирусом при полной деструкции клеток в контроле вируса. Результаты, приведенные в таблице, дают основания полагать, что в ответ на введение фильтрующейся фракции “ВИВАТОНА” синтезом ИФН отвечают только клетки костного мозга. Титр ИФН не превышает 16 единиц.

Синтез ИФН осуществляется с одинаковым успехом при пероральном и внутрибрюшинном введении животным.

Клетки костного мозга отвечают довольно длительной продукцией ИФН в ответ на однократное введение “ВИВАТОНА”. Выделенные через 5,24, 48 и 72 часа после введения “ВИВАТОНА” клетки костного мозга способны синтезировать ИФН в культуре клеток ин витро.

Обращает на себя внимание, что клетки костного мозга синтезируют ИФН одинаково успешно при введении концентрированного препарата и разведенного в 10 раз,

Что свидетельствует о том, что дозу «ВИВАТОНА» можно сократить по крайней мере в 10 раз.

Очень низкие титры ИФН синтезируют клетки, выделенные из печени (гепатоциты), переферической крови, тимуса (тимоциты). Титр ИФН в этих культурах не превышает

2-4 ед/мл.

Клетки, выделенные из селезенки, синтезируют ИФН на поздних сроках, при выделении их через 72 часа после введения «ВИВАТОНА» животным. Клетки, выделенные из лимфоузлов, не синтезируют ИФН вообще.

В сыворотке крови титры ИФН не превышают 16 ед/мл.

Т А Б Л И Ц А.

			Срок выделения клеток после введения «ВИВАТОНА»
			5 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.
	Условия Эксперимента	Происхождение клеток	Динамика синтеза ИФН (ед/мл) через (часы) 2424
	1.	Клетки костного мозга	8	0	ни	4	16	4-8	4	16	8	2	8-16	16
	2.		4	4	4-8	4	16	8	4	4	4	2	8	2
3.		2	0	ни	4	4	4	ни	ни	2	2	0	0
	4.		16	16	8		0	8	4	ни	ни	2	2-4	0
	1.	Спленоциты	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	2.		ни	ни	ни	0	0	0	0	0	0	4	8	16
	3.		ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	0	0	0
	4.		ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	0	4	8
	1.	Тимоциты	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	2.		0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	3.		0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	4.		2	2-4	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	1.	Гепатоциты	4	0	0	ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	Ни	ни
	2.		0	0	0	ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	Ни	ни
	3.		0	0	0	ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	Ни	ни
	4.		0	0	0	ни	ни	ни	ни	ни	ни	ни	Ни	ни
	1.	Клетки из лимфоузлов	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	2.		0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	3.		0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	4.		0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	1.	Клетки цельной периферической крови	4	0	0	4	0	0	0	0	0	0	0	0
	2.		0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	3.		0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	4.		4	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	1.	Сыворотка крови		8-16			16			8-16			16
	2.			16			16			8-16			16
	3.			16			16			16			16
	4.			4-8			16			16			16

Примечание: 1- р/о, цельный;

2- р/о, 1/10;

3- в/ бр, цельный;

4-в/бр, 1/10;

ни – не исследовали;

Клетки цельной крови разводили 1/10 средой культивирования.

Вед. науч. сотруд. НИИЭМ им. Гамалеи

Доктор биологич. наук

Э. Б. ТАЗУЛАХОВА

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

“УТВЕРЖДАЮ” “УТВЕРЖДАЮ”

Директор Н П П “МЕНАТЕП – ТРАСТ” Директор института “ВИВАТОН-1”

Д. М. ШАФРАНОВ А. М. ДЕРЯБИН

1992 г. 1992 г.

О Т Ч Е Т

По договоруот 10.12.91 года.

Тема работ: “Оценка влияния иммуномодулятора”ВИВАТОН” в экспериментальном исследовании на туберкулезное воспаление и имунную систему”.

(2 этап работ: 20.02.92 – 20.04.92).

Москва 1992 г.

ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

По предварительному анализу данных эксперимента, выполненного на белых мышах, зараженных внутривенно микобактериями туберкулеза штамма Воу.8

в дозе 0,1 мл/мышь, “ВИВАТОН”, примененный в течение месяца с семи дней после заражения, оказывает влияние на:

· массу органов, в том числе и органов иммунной системы, вызывая существенное уменьшение(печень, селезенка);

· содержание В-лимфоцитов в селезенке и лимфатических узлах (увеличивает, снимает угнетающий эффект АВП на этот показатель в лимфатических узлах);

· химилюминисценцию лейкоцитов периферической крови (стимулирует, что отождествляется с повышением фагоцитарных функций).

Наибольший эффект на указанные показатели оказал “ВИВАТОН” , разведенный от исходного в соотношении 1:10, один и в сочетании с антибактериальными препаратами.

19.04.92 г.

РУКОВОДИТЕЛЬ ЦЕНТА по доклиническому

изучению новых лекарственных препаратов

Московского НИИ туберкулеза МЗ России,

К. м.н. Г. Б. СОКОЛОВА

Ответственный исполнитель Р. П. СЕЛИЦКАЯ

Исполнители: М. П. ГРАЧЕВА, Ю. Ю.ПОНОМАРЕВА

В. М. АЛПАТОВА, Т. С. МАЛЮГИНА.

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

“УТВЕРЖДАЮ” “УТВЕРЖДАЮ”

Директор Н П П “МЕНАТЕП-ТРАСТ” Директор института “ВИВАТОН-1”

Д. М. ШАФРАНОВ А. М. ДЕРЯБИН

“ 17 ” ИЮНЯ 1992 г. “ 25 ” ИЮНЯ 1992 г.

О Т Ч Е Т

ПО ДОГОВОРУ № 76 от 10г.

Тема работ: “ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ИММУНОМОДУЛЯТОРА “ВИВАТОН” В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ИССЛЕДОВАНИИ НА ТУБЕРКУЛЕЗНОЕ ВОСПАЛЕНИЕ И ИММУННУЮ СИСТЕМУ”.

(3-й этап работ: 20.04.92 – 20.06.92 г.)

М о с к в а 1992 г.

На основании выполненных экспериментальных исследований на беспородных и линейных мышах (устойчивых – F1 гибрид СВА/С57/В16, чувствительных – Black по отношении к туберкулезной инфекции ) с диссеминированной формой туберкулезного процесса (заражения Воу 8 и H37 Rv) можно сделать следующие выводы:

1. «ВИВАТОН» один и в сочетании с антибактериальными препаратами оказывает значительное влияние на воспаление (уменьшается масса внутренних органов и индекс поражения). Особенно выражено это влияние у чувствительных к туберкулезу животных.

2. «ВИВАТОН» один и в сочетании с антибактериальными препаратами увеличивает содержание В-лимфоидных элементов в селезенке и существенно снижает его в лимфатических узлах..

3. «ВИВАТОН» один и в сочетании с антибактериальными препаратами повышает процент Т-лимфоидных элементов в селезенке и лимфатических узлах у чувствительных к туберкулезу мышей и значительно снижает его у устойчивых животных.

4. «ВИВАТОН» в сочетании с антибактериальными препаратами у чувствительных к туберкулезу мышей снижает уровень окислительно-восстановительных процессов (НСТ-тест), у устойчивых же повышает. Хемилюминесцентные исследования также свидетельствуют об активации окислительно-восстановительных реакций у беспородных и устойчивых к туберкулезу животных.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е.

«ВИВАТОН» обладает мощными иммуномодулирующими свойствами, но направленность иммунокоррекции зависит от генетической характеристики чувствительности к микробактериальной инфекции. Скрининговым методом такой характеристики может быть оценка окислительно-восстановительных процессов клеточных элементов периферической крови.

Руководитель. Центра по доминическому

Изучению новых лекарственных препаратов

К. м.н. Г. Б. СОКОЛОВА

Ответственный исполнитель

К. м.н. Р. П. СЕЛИЦКАЯ

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

“СОГЛАСОВАНО” “УТВЕРЖДАЮ”

Директор фирмы “ВИВАТОН” Генеральный директор

Народного концерна “Бутек” ТОО “Реакон”

А. Г Беспалов

24 июня 1992 г. 23 июня 1992 г.

О Т Ч Е Т

по договору/Р – 6 “Изучение антиканцерогенных свойств “ВИВАТОНА” и возможностей его применения для профилактики и лечения ранних стадий рака”.

Этап 1: “Индукция опухолей молочной железы, шейки матки и желудочно-кишечного тракта у животных с помощью химических канцерогенов метилнитрозомочевины и этилнитрозогуанидина. Хроническое воздействие “ВИВАТОНА” Промежуточный отчет”.

Сроки: 01.03.92 гг.

Санкт- Петербург 1992 г.

Эксперименты всех серий продолжаются около 4-х месяцев.

Как видно на данном сроке проявилась тенденция к торможению развития опухолей молочной железы и шейки матки и влагалища под влиянием “ВИВАТОНА”.

Рук. ТК, старший науч. Сотр. НИИ онкологии

Им. Проф. , Минздрава РФ,

Канд. Мед. наук .

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА

“СОГЛАСОВАНО” “УТВЕРЖДАЮ”

Директор фирмы “ВИВАТОН” Генеральный директор

Народного концерна “Бутек” ТОО “Реакон”

30 сентября 1992 г. 30 сентября 1992 г.

О Т Ч Е Т

по договору/Р-6 “Изучение антиканцерогенных свойств “ВИВАТОНА” и возможностей его применения для профилактики и лечения ранней стадии рака”.

Этап 2: Продолжение хронического воздействия “ВИВАТОНА”.

Предварительная оценка влияния “ВИВАТОНА” на развитие опухолей.

Сроки: 01.07г.

Санкт - Петербург 1992 г.

Предварительные выводы:

1. “ВИВАТОН” при хроническом пероральном введении в ежедневной дозе 0,5 мд на животное оказывает существенный онкопрофилактический эффект на развитие опухолей молочной железы, индуцированных N- метил N- нитрозомочевиной у крыс. На данной модели опухолевого роста «ВИВАТОН» также проявляет противоопухолевый эффект в отношении новообразований молочной железы ранних стадий.

2. «ВИВАТОН» при хроническом пероральном введении в ежедневной дозе 0,2 мл на животное не проявляет онкопрофилактических и противоопухолевых эффектов на развитие новообразований шейки матки и влагалища, индуцированных N-МЕТИЛ N-нитрозомочевиной и бензоилпероксидом у мышей.

Ст. научн. сотрудник

НИИ онкологии

Им. проф.

Минздрава РФ,

Кандидат мед. наук