Клинико-лабораторная характеристика клеточных элементов периферической крови и функционального состояния эндотелия у женщин с бактериальным вагинозом (стр. 3 )

Средний объем тромбоцитов (МРV) при умеренной эндотоксинемии у женщин с БВ и у здоровых лиц не выходил за пределы референтных значений, но имелась достоверная тенденция к его снижению у пациенток со II степенью дисбиоза влагалища (7,73 ± 0,70 фл) по сравнению с контролем (8,22 ± 0,62 фл). Также было констатировно увеличение данного показателя у женщин с БВ III ст. (8,66 ± 0,56; р=0,007). Показатель анизоцитоза тромбоцитов (PDW) был увеличен (р=0,007) у женщин с БВ III ст. (39,18 ± 1,87 %).

Показатели агрегационной функции тромбоцитов у пациенток с дисбиозом влагалища, как и у здоровых женщин, в целом не выходили за физиологические пределы. Однако, наблюдалось статистически достоверное снижение агрегации тромбоцитов у пациенток с БВ III ст. (64,63 ± 9,99%; р=0,002) по сравнению с группой контроля (70,74 ± 6,51%) и с женщинами, имеющими дисбиоз влагалища I cт. (69,94 ± 6,72%; р=0,014).

Концентрация тромбоксана В2 (TxB2) в плазме крови пациенток возрастала по мере утяжеления дисбиотического процесса (рис. 3), причем во всех исследуемых группах она превышала референтный уровень, составляющий 1-2 пг/мл (согласно инструкции к тест-системе).

Для оценки степени раздражения эндотелия кровеносных сосудов при воздействии эндотоксина у пациенток с БВ определялся плазменный уровень sPECAM-1, sVCAM-1, эндотелина-1 и фактора Виллебранда (vWF) (рис. 4-5). Из представленных данных видно, что у женщин с дисбиозом влагалища и в контрольной группе концентрация sPECAM-1 сохранялась в референтных пределах (42,8-91,0 нг/мл), однако отмечалось ее значительное увеличение (p<<0,0001) у пациенток с БВ III степени по сравнению с остальными группами. Средний уровень sVCAM-1 при БВ также не выходил за референтные пределы ( нг/мл, согласно руководству к тест-системе), но прослеживался его рост по мере утяжеления дисбиоза влагалища.

Рисунок 3 - Концентрация TxB2 (пг/мл) в плазме крови пациенток с различной степенью дисбиоза влагалища.

Рисунок 4 - Уровень sPECAM (нг/мл) в плазме крови пациенток с БВ и здоровых женщин.

Примечание: 0 – контрольная группа; 1,2,3 - степени дисбиоза, ГДИ - границы доверительных интервалов для средних значений, СО – стандартная ошибка средней.

Рисунок 5 - Уровень sVCAM-1 (нг/мл) в плазме крови у пациенток с БВ и здоровых женщин.

Примечание: 0 – контрольная группа; 1, 2, 3 - степени дисбиоза, ГДИ - границы доверительных интервалов для средних значений, СО – стандартная ошибка.

Уровень sVCAM-1 при I степени БВ был повышен по сравнению с контролем на 24 %, при II степени – на 37 %, при III степени – на 42 %; различия между контрольной группой и группами пациенток с БВ статистически значимы (р=0,0099, р=0,0001 и р=0,0018, соответственно). Достоверное нарастание уровня sVCAM-1 при утяжелении БВ также подтверждается ранговым критерием Краскела-Уоллеса (Нк=14,9; p<0,005).

При оценке плазменного уровня эндотелина-1 было выявлено, что у пациенток с БВ и в контрольной группе он не превышал физиологической нормы (1 пг/мл), но вместе с тем наблюдалась тенденция к повышению его уровня у женщин с БВ III ст. по сравнению с контрольной группой (р=0,0005) и с пациентками с БВ I и II ст. (р=0,004 и р=0,00001).

Обнаружено достоверное увеличение другого важного маркера дисфункции эндотелия - фактора Виллебранда - у женщин с БВ I, II и III ст. по сравнению с контрольной группой (р=0,0019; р=0,00001; р=0,0195, соответственно). Также выявлены статистически значимые различия концентрации vWF в зависимости от степени дисбиоза влагалища - в частности, снижение его уровня у женщин с БВ III ст. по сравнению с пациентками с БВ I и II ст. (р=0,002 и р=0,0001).

Для определения возможных причин наблюдавшихся количественных и качественных сдвигов клеток периферической крови при БВ у пациенток оценивались уровни регуляторных факторов, в частности, гуморальных - плазменная концентрация цитокинов различной направленности действия. Анализ показал существенные сдвиги уровня ряда цитокинов у женщин с БВ по сравнению с контрольной группой (табл. 3).

Таблица 3. Концентрация цитокинов в плазме крови пациентов с БВ и здоровых женщин (пг/мл; M ± s).

Показатели	Референт-ный уровень (пг/мл)	Контроль-ная группа (n=68)	Женщины с БВ I ст. (n=25)	Женщины с БВ II ст. (n=28)	Женщины с БВ III ст. (n=30)
TNF-α	< 6	5,96±4,29	23,93±11,75*	33,39±28,09*	15,38±19,63*
IL-1β	< 11	6,38±2,24	3,54±1,96*	1,42±1,14*	2,32±2,09*
IL-2	< 10	1,46±1,64	8,91±4,32*	2,83±2,11*	10,29±10,68*
IL-4	< 10	0,83±0,46	0,86±0,68	1,04±0,51	1,23±0,57*
IL-6	< 10	0,45±0,42	0,76±0,41*	1,12±0,57*	1,45±1,21*
IL-8	< 10	6,29±1,75	6,89±1,77	4,49±1,53*	7,28±2,42*
IL-10	< 20	35,9±14,1	39,3±16,0	26,5±21,5*	23,6±23,9*

Примечание: *- достоверность различий (р<0,05 в тесте Манна-Уитни) по отношению к контрольной группе.

Сдвиги цитокинового баланса проявлялись в тенденции к повышению уровня провоспалительных IL-2, IL-6, TNF-α в плазме крови; наибольшие сдвиги отмечались в отношении TNF-α. Максимальный уровень IL-8 наблюдался у женщин с III ст. дисбиоза влагалища. Иная картина сложилась с IL-1β, концентрация которого у пациенток с БВ статистически значимо снижалась. Уровень IL-4 по мере утяжеления БВ возрастал, а концентрация IL-10 по мере развития дисбиотического процесса, наоборот, уменьшалась.

Отмеченные тенденции находят частичное подтверждение в ходе корреляционного анализа полученных данных (табл. 4). Установлена статистически значимая слабая прямая корреляционная связь между уровнем эндотоксина и концентрацией IL-2 и IL-10, а также обратная связь средней силы между уровнем LBP в крови и концентрацией IL-4.

Таблица 4. Корреляция уровня липополисахарида и связывающих его белков
с плазменной концентрацией различных цитокинов у женщин с БВ.

Корреляционная связь между:	и уровнем эндотоксина (LAL-тест)	и уровнем LBP	и уровнем anti-core IgG
TNF- α	r = 0,138 P = 0,153	r = -0,233 P = 0,022*	r = 0,187 P = 0,116
IL-1β	r = 0,139 P = 0,153	R = 0,232 P = 0,022*	r = 0,187 P = 0,116
IL-2	r = 0,218 P = 0,023*	r = -0,406** P < 0,001	r = 0,015 P = 0,899
IL-4	r = -0,001 P = 0,986	r = 0,046 P = 0,658	r = -0,227 P = 0,058
IL-6	r = 0,122 P = 0,247	r = -0,007 P = 0,944	r = 0,105 P = 0,423
IL-8	r = 0,170 P = 0,078	r = -0,192 P = 0,061	r = -0,137 P = 0,250
IL-10	r = 0,282 P = 0,004*	r = -0,108 P = 0,305	r = -0,061 P = 0,616

Примечания: r - коэффициент корреляции, P – показатель его статистической значимости. * - достоверная корреляционная связь любой степени,
** - достоверная корреляционная связь средней степени.

Уровень LBP и содержание IL-1β также имели слабую прямую взаимозависимость, LBP и TNF-α – слабую обратную взаимосвязь. Кроме того, при повышении уровня антител класса IgG к core-региону LPS проявлялась тенденция к снижению уровня IL-4.

ВЫВОДЫ

1. В плазме крови пациенток с декомпенсированным бактериальным вагинозом (III степень) наблюдается увеличение концентрации липополисахарида грамотрицательных бактерий. Специфический иммунный ответ организма на начальных этапах бактериального вагиноза проявляется нарастанием титра антител к core-региону липополисахарида с последующим их снижением при утяжелении дисбиоза. Концентрация липополисахарид-связывающего белка имеет тенденцию к снижению при прогрессировании дисбиотического процесса.

2. Рост уровня эндотоксина при дисбиозе влагалища сопровождается тенденцией к увеличению среднего объёма эритроцитов, средней концентрации гемоглобина в эритроцитах, а также общего количества лейкоцитов (с их снижением по мере утяжеления дисбиоза). С выраженностью эндотоксинемии связано возрастание лейкоцитарных индексов интоксикации и появление вакуолизированных форм лейкоцитов в крови. Реакция тромбоцитарного звена на эндотоксинемию различной выраженности проявляется значимым возрастанием плазменного уровня тромбоксана B2 и тенденцией к снижению АДФ-зависимой агрегации тромбоцитов. Более выраженный дисбиотический процесс ассоциирован со снижением общего количества тромбоцитов, увеличением их среднего объема и показателя анизоцитоза.

3. Реакция клеток сосудистого эндотелия на эндотоксинемию при бактериальном вагинозе проявляется ростом в плазме крови уровня молекул адгезии sPECAM-1, sVCAM-1 и фазными изменениями маркеров эндотелиальной дисфункции (эндотелин-1, фактор Виллебранда).

4. Изменения цитокинового баланса при вагинальном дисбиозе проявляются существенным повышением уровня IL-2, IL-6, TNF-α, IL-4, снижением IL-1β, IL-10. Плазменный уровень IL-8 снижается при субкомпенсированной стадии и повышается при декомпенсированной стадии бактериального вагиноза.

5. При бактериальном вагинозе I и II степени поступление липополисахарида грамотрицательных микробов в организм не вызывает выраженного иммунопатогенного эффекта и не приводит к значимым изменениям клеточных элементов периферической крови. Дисбиоз влагалища III степени, сопровождающийся ростом уровня липополисахарида в плазме, достоверными изменениями цитокинового статуса, функциональных показателей лейкоцитарного и тромбоцитарного звеньев периферической крови и эндотелия, может рассматриваться как промежуточная стадия на пути к явному патологическому процессу, требующая коррегирующих мероприятий.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При лабораторном обследовании пациенток с бактериальным вагинозом III степени для объективной оценки тяжести токсического воздействия и дифференциации дисбиотической и воспалительной реакции, дополнительно к общепринятым тестам, рекомендуется определять плазменный уровень LPS, количество лейкоцитов в крови, долю вакуолизированных моноцитов и лейкоцитарный индекс интоксикации.

2. При декомпенсированных вариантах течения дисбиоза влагалища для оценки степени и направленности реагирования иммунной системы и, при необходимости, решения вопроса о проведении дезинтоксикационных и иммунокорригирующих мероприятий рекомендуется определение концентрации TNF-α, IL-6, IL-10, а также уровня антител к core-региону LPS в плазме крови.

3. Пациенткам с субкомпенсированным и декомпенсированным течением дисбиоза влагалища рекомендуется мониторинг состояния тромбоцитарного звена периферической крови (по уровню TxB2) и эндотелия (по концентрации sPECAM-1, sVCAM-1) с целью своевременного предупреждения развития нарушений микроциркуляции и тромботических осложнений.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенное исследование показало, что декомпенсированный бактериальный вагиноз сопровождается более выраженной эндотоксинемией и некоторым снижением показателей специфического иммунного ответа по сравнению с компенсированным и субкомпенсированным дисбиозом. Эндотоксин грамотрицательных бактерий у женщин с дисбиотическими процессами во влагалище оказывает наибольшее влияние на тромбоцитарное звено периферической крови и эндотелий, что проявляется тенденцией к снижению общего количества тромбоцитов и их агрегационной способности, а также изменениями (преимущественно ростом) уровня маркеров эндотелиальной дисфункции. В числе причин и/или медиаторов указанных сдвигов можно отметить фазные сдвиги уровня различных цитокинов.

Перспективы дальнейшей разработки темы

Перспективы дальнейшей разработки темы заключаются в возможности исследования гематологических показателей и маркеров эндотелиальной дисфункции при различных патологических состояниях, сопровождающихся эндотоксинемией (дисбактериоз кишечника, гнойная хирургическая патология и др.), с целью определения «пороговой» концентрации липополисахарида, оказывающей существенное влияние на структурно-функциональное состояние клеток периферической крови и эндотелия и требующей дезинтоксикационных и, при значительной выраженности изменений, иммунокорригирующих мероприятий. Перспективен также анализ влияния гематологических и иммунных изменений, ассоциированных с эндотоксинемией, на клиническое течение заболеваний и степень их курабельности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ:

1 Ахмадуллина, гемограммы при бактериальном вагинозе у женщин репродуктивного возраста / , , // Клиническая лабораторная диагностика. – 2010. – № 10. – С. 19.

2 Гайсина, параметров гемостаза и клинических проявлений бактериального вагиноза у женщин репродуктивного возраста / , , // Клиническая лабораторная диагностика. – 2010. – № 10. – С. 20.

3 Гайсина, и влияние микробных липополисахаридов на систему гемостаза у женщин с бактериальным вагинозом / , , // Медицинский вестник Башкортостана. – 2011. – Т. 6, № 3. - С. 155-158.

4 Гайсина, Ю. Р. Об исследовании сывороточных иммуноглобулинов у женщин репродуктивного возраста при дисбиозе влагалища / , , // Клиническая лабораторная диагностика. – 2011. – № 10. – С. 6.

5 Ахмадуллина, молекулы, эндотелин и фактор Виллебранда как показатели реакции эндотелия на эндотоксическое воздействие при бактериальном вагинозе / , , // Медицинский алфавит. Современная лаборатория. – 2011. - № 22. – С. 22-23.

6 Ахмадуллина, эндотоксинемии и эндотелиальной дисфункции у женщин с бактериальным вагинозом / , , // Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований: материалы Всероссийской научно-практической конференции биохимиков и специалистов по лабораторной диагностике. - Омск, 2011. – С. 36-40.

7 Бондаренко, эффекты липополисахаридов грамотрицательных бактерий при бактериальном вагинозе / , , // Мать и дитя: материалы V регионального научного форума. – Геленджик, 2011. - С. 185-186.

8 . Ahmadullina, Yu. Hemostasis and CBC shifts caused by entotoxicosis at vaginal dysbiosis / Yu. Ahmadullina, Yu. Gaisina, K. Bondarenko, A. Mavzjutov, A. Gilmanov // Clin Chem Lab Med. -2011. -Vol. 49 (May 2011), Special Supplement. –P. S605.

9 Ахмадуллина, Ю. А. О реакции тромбоцитарного звена на эндотоксикоз, ассоциированный с бактериальным вагинозом / , , // Клиническая лабораторная диагностика. – 2012. – № 9. – С. 68.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:

БВ – бактериальный вагиноз

ИФА, ELISA – иммуноферментный анализ (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay)

ЛАЛ – лизат амебоцитов Limulus

ЛИИ – лейкоцитарный индекс интоксикации

ЭТ – эндотоксин

Anti-core LPS IgG - антитела к глубоким детерминантам core-региона липополисахарида

IgG – иммуноглобулины класса G

IL - интерлейкин

LBP – lipopolysaccharide binding protein, липополисахарид-связывающий белок

LPS – lipopolysaccharide, липополисахарид

TNF-α – фактор некроза опухолей–α

TxB2 – тромбоксан B2

vWF - фактор Виллебранда