Биохимия (стр. 3 )

В норме содержание свободной соляной кислоты равно 20-40 (Е).

В норме содержание связанной соляной кислоты равно 10-20 (Е).

Ход работы: В колбу для титрования вносят пипеткой 0,5 мл исследуемого ЖС. Добавляют 1 каплю раствора метилового желтого и 2 капли раствора фенолфталеина. При наличии в ЖС свободной соляной кислоты он окрашивается в красный цвет с розовым оттенком, при ее отсутствии появляется сразу желтая окраска. Пробу титруют 0,01Н NaOH до появления оранжевой окраски и отмечают количество щелочи в мл, пошедшее на титрование свободной НСl (1пункт титрования). Далее титрование продолжают до появления лимонно-желтой окраски (2 пункт титрования) и снова отмечают количество щелочи в мл, израсходованное сначала титрования до 2 пункта. Затем титрование продолжают до появления розовой окраски (3 пункт титрования). Отмечают количество щелочи, пошедшее на титрование от начала до 3 пункта титрования.

Формулы для расчета:

Количество свободной HCl:

где а – количество 0,01Н NaOH, пошедшего на титрование до 1 пункта; 0,5 – объем исследуемого желудочного сока.

Количество общей HCl:

где в – среднее арифметическое количество щелочи, пошедшее на титрование до 2 и 3 пунктов.

Количество связанной HCl:

HClсвяз. = HClобщ. - HClсвоб.

Общая кислотность (ОК):

где к – количество 0,01Н NaOH, пошедший на титрование до 3 пункта.

Таблица результатов анализа

№ вар.	Пункт титрования	Индикатор	Окрашивание	Кол-во NaOH, пошедшего на титрование, мл	Кол-во HCl	Общая кислотность
V1	V2	V3	Vср	Своб.	Общ.	Связ.

Вывод:

Дата: Подпись преподавателя:

ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ 4

Тема: Обмен простых белков. Общие пути обмена аминокислот

Задания для подготовки к занятию:

1.  Напишите формулами реакции трансаминирования между следующими парами аминокислот и a-кетокислот:

А) Глу + Пируват ®

Б) Глу + Оксалоацетат ®

2.  Напишите названия продуктов, образующихся в реакциях:

А)

Б)

3.  Напишите полное название ферментов по обратной реакции:

А)

Б)

4.  Назовите вид дезаминирования аминокислот:

А. Ала	1. Прямое окислительное
Б. Гис	2. Прямое неокислительное
В. Тре	3. Непрямое
Г. Глу
Д. Фен

5.  Напишите названия коферментов и соответствующих витаминов, необходимых для осуществления реакций непрямого дезаминирования:

А)

Б)

6. Чем определяется центральная роль глутаминовой кислоты в промежуточном обмене аминокислот?

7.  Назовите конечные продукты азотистого обмена, которые выводятся из организма:

8.  Назовите процессы – источники аммиака в организме:

9.  На каких клетках прежде всего сказывается токсическое действие аммиака? Каковы механизмы токсического действия аммиака?

10.  Перечислите способы обезвреживания аммиака в организме:

в мозге:

в мышцах:

в печени:

в почках:

11.  Напишите суммарное уравнение синтеза мочевины. Сколько моль АТФ требуется для синтеза 1 моль мочевины. Напишите реакции, идущие с затратой энергии (АТФ), укажите ферменты.

12.  Проследите путь азота аминогруппы аланина в мочевину, составив схему:

Ала ® 1 ® 2 ® 3 ® Мочевина

1.

2.

3.

13.  При нарушениях орнитинового цикла в крови повышается содержание:

А. Аланина

Б. Орнитина

В. Глутамата (глутаминовой кислоты)

Г. Глутамина (амида глутаминовой кислоты)

Д. Аммиака

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 11

Тема: Количественное определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови

Цель: Изучить активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови, ее значение для диагностики гепатита.

Принцип метода: Аминотрансферазы или трансаминазы катализируют межмолекулярный перенос аминогруппы с амнокислот на кетокислоты. Коферментом трансаминаз является фосфопиридоксаль, который служит непосредственным переносчиком аминогрупп с аминокислоты на кетокислоту. АлАТ катализирует реакцию переаминирования между аланином и a-кетоглутаровой кислотой:

α-кетоглутарат

Аланин

Глутамат

пируват

По количеству образовавшейся пировиноградной кислоты можно судить об активности фермента. Количество пировиноградной кислоты определяется колориметрическим путем по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином, при которой развивается красно-бурое окрашивание:

Пируват

2,4-ДНФГ

2,4-ДНФ-гидразон пирувата

Повышение активности АлАТ наблюдается при заболеваниях печени, а повышение активности АсАТ – при патологии сердечной мышцы.

Активность АлАТ в норме составляет 28 – 190 нмоль/с×л

Схема постановки опыта

	Контрольная проба	Опытная проба
Реагент 1 (АлАТ, субстрат), мл	0,25	0,25
Дистиллированная вода, мл	0,05	–
Сыворотка, мл	–	0,05
Перемешать и инкубировать 30 мин
Реагент 2 (динитрофенилгидразин), мл	0,25	0,25
Перемешать и оставить при комнатной температуре на 20 мин
NaOH (С = 0,4 моль/л), мл	2,5	2,5

Перемешать и через 10 минут измерить оптическую плотность пробы против контрольной пробы при длине волны 540 нм, кювета с толщиной слоя 5 мм. Активность АлАТ в опытной пробе определить по калибровочному графику в нмоль/с×л.

Результат анализа:

Вывод:

Дата: Подпись преподавателя:

ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ 5

Тема: Обмен сложных белков. Обмен нуклеотидов. Обмен гемопротеидов

Задания для подготовки к занятию:

1.  Выберите положения, правильно характеризующие функции АТФ в организме:

А. Продукт окислительного фосфорилирования

Б. Источник энергии при связывании аа-тРНК с рибосомой

В. Субстрат аденилатциклазы

Г. Регулятор метаболических процессов

Д. Донор фосфата в реакциях, катализируемых протеинкиназами

Е. Источник энергии для транспорта веществ путем облегченной диффузии

2.  Нарисуйте пуриновое кольцо и покажите происхождение в нем отдельных атомов.

3.  Напишите реакции, в ходе которых ИМФ превращается в ГМФ и АМФ, укажите ферменты.

4.  При катаболизме пуриновые основания превращаются в мочевую кислоту, используя цифровые обозначения, расположите перечисленные метаболиты в порядке их превращения в мочевую кислоту:

1. АМФ; 2. мочевая кислота; 3. ксантин; 4. инозин; 5. аденозин; 6. гипоксантин.

5. Расположите перечисленные метаболиты в порядке их участия в синтезе пиримидиновых нуклеотидов:

1. СО2; 2. ОМФ; 3. АТФ; 4. карбамоилфосфат; 5. глутамин; 6. карбамоиласпартат; 7. УМФ; 8. ФРДФ; 9. дигидрооротат; 10. оротат; 11. аспартат.

6. Напишите схему синтеза гема.

7. Напишите схему катаболизма гема до образования конечных продуктов, выделяемых из организма.

1.  Заполните таблицу дифференциальной диагностики различных типов желтух

Название желтухи	Причины возникновения	Биохимические показатели обмена билирубина
кровь	моча	кал
общий билирубин	непрямой билирубин	прямой билирубин	прямой билирубин	уробилин	стеркобилин

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 13

Тема: Определение содержания билирубина в сыворотке крови

Цель: Научиться определять содержание билирубина в сыворотке крови, изучить значение этого показателя для дифференциальной диагностики патологий (желтух).

Принцип метода:

Прямой (связанный, конъюгированный с глюкуроновой кислотой) билирубин непосредственно реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, а общий билирубин – в присутствии кофеинового реагента с образованием окрашенного азосоединения. Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна концентрации билирубина и измеряется фотометрически при длине волны 535 (500-560) нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм.