Тема: Основы клинико-биохимической аналитики: объекты и методы исследования; оценка и интерпретация результатов; единицы СИ; нормы (референтные ве­личины); контроль качества исследований (стр. 23 )

2. Коагуляционной способности крови

Нарушения свертывающей способности крови наблюдают при многих патологических состояниях. Снижение свертывающей способности клинически проявляется длительными кровотечениями и геморрагиче­скими диатезами.

Выделяют:

-  первичные (наследственные нарушения) - гемофилия;

-  вторичные

•  при воспалительных, аллергических и аутоимунных нарушениях зачастую имеются местные нарушения гемокоа-гуляции, обусловленные воздействием медиаторов воспаления, к которым в некоторой степени относится и гепарин;

•  при инфекционных (бактериальных и вирусных инфекциях), особенно септического характера, за счет действия токсинов-блокаторов коагуляционной системы, гемолитические яды;

•  при отравлениях веществами, блокирующими свертывание (натрия фторид, гепарин и др.);

•  при минерально-витаминной не достаточности и особенно в отношении кальция и витамина К;

•  при заболеваниях печени со снижением синтетической функции);

•  при заболеваниях костного мозга, заключающихся в понижении образования тромбоцитов.

Повышение свертывающей способности характеризуется самопроизвольным образованием в сосуде тромба, приводящего к прекращению тока крови в этом участке и атрофией, некрозами региональных тканей. Выделяют:

первичные (наследственные нарушения), заключающиеся в основном в недостатке фибринолитической систе­мы;

вторичные - при обширных травмах и ожогах, за счет избытка образования тканевого тромбопластина, внутри-сосудистых изменениях (нарушении гладкости эндотелия - рожа, артериосклероз, а так же нарушении трофики сосудов

- при сахарном диабете - гликолизирование эндотелия), при завышении доз солей кальция, магния.

Методы исследования системы гемостаза, которые наиболее доступны для ветеринарной медицины, можно разделить на биохимические и приборные. Кратко рассмотрим некоторые из них:

1.Время свертывания венозной крови по Ли-Уайту. Метод основан на определении времени образования сгу­стка в 1,0 мл нативной венозной крови больного, взятой в стеклянную пробирку. Норма 5 — 8 мин. Метод относится к ориентировочным и является общекоагуляционным, т. е. характеризует состояние системы свертывания крови в целом (при участии в процессе свертывания всех систем и факторов).

2.Время рекальцификации плазмы (BP). Метод также относится к общекоагуляционным ориентировочным и характеризует время свертывания плазмы больного (полученной из крови, стабилизированной раствором цитрата на­трия) при добавлении к ней раствора хлористого кальция. Норма 120-150 с.

3.Определение содержания фибриногена по Рутбергу. Метод основан на рекальцификации 1,0 мл цитратной плазмы и взвешивании образовавшегося сгустка фибрина (после отжатая из него жидкой фазы). Вес такого сгустка в норме 9 — 18 мг, что соответствует концентрации фибриногена 2 — 4 г/л.

4. Протромбиновое время — это время свертывания цитратной плазмы после внесения в нее стандартного раствора тканевого тромбопластина и хлористого кальция. В наиболее распространенной трактовке характеризует активность факторов протромбинового комплекса. Поэтому тест наиболее часто применяется для контроля терапии непрямыми антикоагулянтами (антивитамины К).

При применении высокоактивного стандартного тромбопластина результат выражают в секундах (норма 12 — 15 с). В связи с несоответствием этому стандарту большинство отечественных тромбопластинов результат выражают относительно (в процентах или единицах) протромбинового времени плазмы донора. Норма 80 — 100% или 0,8 — 1,0.

5.Определение содержания тромбоцитов в крови. Применяется подсчет тромбоцитов в камере или мазке.

6.Толерантность плазмы к гепарину. Тест показывает время свертывания цитратной плазмы при внесении в нее небольших количеств гепарина и последующей рекальцификации. Значения теста в норме 5 — 7 мин. Он считается общекоагуляционным, но более чувствительно отражает наклонность крови к тромбообразованию (значение теста менее 5 мин), что, видимо, косвенно связано с содержанием в исследуемой плазме AT-III, при снижении которого и развивает­ся тромбоопасность.

7.Приборные тесты. В лабораториях можно использовать приборы, дающие графическую запись процесса свертывания крови, ретракции и лизиса кровяного сгустка. Расшифровка графиков по специальным формулам позволяет получить целый ряд параметров, характеризующих состояние различных звеньев гемостаза.

8.Определение ретракции кровяного сгустка. Регистрируется как часть (%) жидкости, отжатой сгустком при сокращении, от количества плазмы. Норма 70 — 85%. Тест «груб», малоинформативен, зависит от множества физико-химических параметров (качество стекла, применение якорьков, проволочек для фиксации сгустка и т. д.) и биохимиче­ских показателей крови.

9.Клинические пробы - жгута, баночная проба Нестерова. Показывают состояние проницаемости сосудистой стенки под влиянием относительно дозированного воздействия (наложение жгута на плечо, присасывающее действие «банки» при разряжении воздуха под ней). Дает грубую, но часто важную информацию о состоянии сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Результат оценивается по количеству петехий, появляющихся на исследуемом участке ко­жи после механического воздействия.

Лабораторная оценка иммунного статуса организма и диагностика иммунопатологии

План:

1.  Понятие о иммунном статусе.

Молекулярные механизмы и химия иммунных реакций.

2.  Лабораторная оценка иммунного статуса и диагностика основных иммунопатологических состояний.

1. Понятие о иммунном статусе Молекулярные механизмы и химия иммунных реакций

Иммунный статус организма - это количественная и качественная (функциональная) характери­стики отдельных звеньев иммунитета на определенном этапе развития организма или на определенной ста­дии развития заболевания. Работа отдельных звеньев иммунитета строго согласована. Дефект одной из час­ти иммунной системы первичного (врожденного) или вторичного (приобретенного) характера чаще ком­пенсируется другими компонентами иммунитета. Так, у новорожденных недостаток гуморального звена иммунитета компенсируется за счет клеточного (врожденный нейтрофиллез и лейкоцитоз). Поэтому недос­таток одного из звеньев - это не заболевание, а лишь фактор риска. Для суждения о иммунном заболевании необходимо наряду с этим и клиническое проявление.

Иммунный статус в зависимости от функционирования отдельных звеньев иммунитета подразделя­ется на виды (таблица).

Типы иммунного статуса	Т-звено	В-звено
Нормальный	N	N
Равномерно активированный	*	*
Равномерно супрессированный	Ф	Ф
Активированный по гуморальному звену	N	*
Активированный по гуморальному звену и супрессированный по клеточ­ному	Ф	*
Супрессированный по гуморальному звену	N	Ф
Супрессированный по клеточному звену	Ф	N

С точки зрения молекулярной биохимии иммунная реакция в любом случае является строго специфи­ческой. Под иммунной реакцией понимается специфическое взаимодействие крупных молекул посредством рецепторного механизма. Продут реакции выключается из циркуляции из организма и подвергается пре­вращениях доступными методами. В иммунную реакцию могут вовлекаться и клетки, в том случае если они несут на своей поверхности определенный рецептор (аг или ат). Иммунная реакция основной механизм слежения за генетической информацией в организме.

В организме определено на настоящее время значительное число иммунокомпетентных (участвующих в иммунитете) молекул (табл.). Т. к. называемый клеточный иммунитет, осуществляемый фагоцитами, так же зависим от некоторых иммунологических молекул и ими направляемый. Например химотаксис нейтро-филов направляется рецепртором С4

2. Лабораторная оценка иммунного статуса и диагностика основных иммунопатологических

состояний

Оценка иммунного статуса проводится поэтапно. Прежде всего, чем приступить к лабораторному ана­лизу, необходимо собрать иммунологический анамнез и выявить специфическую клиническую картину.

Лабораторные исследования подразделяют на тесты нескольких уровней. В ветеринарной практике ис­пользуются в основном общий иммунологический анализ, позволяющий оценить иммунный статус и опре­делить тип его функционированния.

Общий иммунологический анализ включает в себя:

Оценка клеточного звена иммунитета

подсчет общего числа лейкоцитов; выведение лейкограммы и расчет абсолютного количества лимфоцитов; определение относительного и абсолютного количества Т - В-лимфоцитов; определение фагоцитарной активности нейтрофилов

Оценка клеточного звена иммунитета

определение концентрации в сыворотке крови суммарного количества иммуноглобулинов и их основных классов

Оценка естественной резистентности

определение бактерицидной, лизоцимной активности крови; определение концентрации лизоцима, пропердина, интеферрона, комплемента и др неспецифическиз факторов иммуно­логической защиты

Подсчет количества лейкоцитов и выведение лейкограммы, проводится по общепринятой методике. Почти все заболевания иммунной системы протекают с изменением количества лейкоцитов и их отдельных видов, зачастую меня­ется и их морфология.

Определение относительного и абсолютного количества Т - и В-лимфоцитов крови. Определение соотношения между Т- и В-лимфоцитами позволяет выявить направленность иммунологической реакции в какой-то мосент. Напри­мер, резкое увеличение числа В-лимфоцитов указывает на протекание фазы иммунного ответа, характеризующейся про­дукцией антител. Т-лимфоциты обеспечивают клеточные реакции иммунитета, в частности реакции гиперчувствитель­ности замедленного типа (ГЗТ) и реакции трансплантационного иммунитета.

Т - и В-популяции лимфоцитов мало различимы при световой микроскопии. Вместе с тем эти клетки имеют отчет­ливые антигенные и функциональные различия.