Фармацевтическая ценность дождевых червей (стр. 5 )

Аргинин 4,18 4,47 3,81 4,20 3,53

Из данных таблиц можно видеть, что препараты сухого порошка из дождевых червей, получаемых по методу 1 и 2, обогащены белками, липидами и металлами и содержится больше незаменимых аминокислот.

Примеры. 1 кг живых червей L. rubellus промывали в воде, помещали в 4 л кислого раствора (рН 6,2) , оставляли при 8О С на три часа. После лиофильной сушки получали 265 г сухого препарата ДЧ. В желатиновые капсулы помещали по 150-250 мг сухого порошка. Эти же авторы запатентовали во Франции в 1989 году патент FR2630008.

В 1983 году японские исследователи Sumi Hiroyuki и Mihara Hisaahi запатентовали в Великобритании (GB2116565), а в 1986 году в США способ получения тромболитического вещества (US4568545). В качестве фибринолитических и тромболитических ингредиентов, экстрагируемых и очищенных из ткани дождевых червей, предложен препарат, содержащий шесть протеолитических ферментов. Описаны методы получения этих протеаз, свойства и характеристики. Представлены различные медикаментозные формы препаратов и описаны результаты применения в клинических испытаниях при оральном введении новых протеаз.

В состав для наружного применения при лечении ревматизма и полиартритов (патент Германии, 1986, DE3519736) Westhoeffer рекомендует в автолизат дождевых червей в комбинации с водным экстрактом коры бука и камфорным спиртом.

Известен китайский патент CN1102098 (1995, Tianye Yang) на способ получения жидкого лекарственного средства для лечения ожогов. Делают смесь из 20-49 г сахара, 50-80 г живых дождевых червей. Образующуюся жидкость собирают, фильтруют и добавляют 0,5-1,0 г борного спирта. Этот препарат используют для лечения различного рода ожогов (огонь, кипяток, электрический). При этом не требуется пересадки ткани, перевязок и дезинфекции поверхности раны.

В китайском патенте CN1114202 (Xinguan Du, 1996) запатентовано как противораковое средство препарат, полученный из дождевых червей. Лиофильно высушенный порошок экстракта из тканей дождевых червей либо помещали в капсулы, либо смешивали с медом. Препарат обладает высокими питательными свойствами, низкой стоимостью и фармакологическими свойствами.

В патенте США китайские исследователи Li Yu-Ten и Li Su-Chen (1991, US5047337) описывают способ получения фермента церамидглюконазы, который расщепляет олигосахариды от гликофосфолипидов и алкилгликолипидов. Фермент не гидролизует моносахариды. Фермент выделен из мышечной ткани дождевых червей и пиявок. Фермент очищен с помощью экстракции, фракционирования сульфатом аммония, гель-хроматографией и гидрофобной хроматографией с целью освобождения его от экзогликозидазной активности. Описываются методы получения олигосахаридов с помощью гидролиза гликолипидов, алкилгликолипидов, гликосфинголипидов с помощью данного фермента. Источником церамидглюканазы являются пиявки и Люмбрициды. У них этот фермент имеется в относительно высоких концентрациях, хотя и присутствует экзогликозидазы, которую необходимо удалять при очистке препарата.

Ишии Йечи с сотр. в 1993 году запантетовали в США способ терапевтического лечения тромбозов (US186944) с помощью препаратов, полученных из дождевых червей. Рассмотрены недостатки лечения тромбозов с помощью урокиназы и стрептококкокиназы. Сообщается о преимуществах применения препаратов из дождевых червей. Бельгийский ученый De Baetselier запатентовал способ получения пептидов и нуклеиновых кислот из компостного червя и препараты на их основе для лечения рака, трипаносомных инфекций, микробных инфекций, а также заболеваний иммунной системы и воспалений. Представлена первичная структура полипептида и гена, его кодирующего (WO99/31229).

Альфа-фактор некроза опухоли (TNF-альфа) является многофункциональным цитокином, продуцируемым позвоночными животными, главным образом с помощью активированных макрофагов. In vitro он обладает несколькими биологическими эффектами, вызывая гибель трансформированных клеток и паразитов. Кроме того, у него имеется лектинподобные свойства, что проявляется в трипанолитической активности против трипаносом таких, как Tripanosoma brucei.

Система активизации профенолоксидазы является важным защитным механизмом у большинства беспозвоночных животных. Эта система основана на узнавании бактериальных антигенов таких, как липополисахариды или пептидогликан и бета-1,3-гликан, которые являются главными компонентами клеточных стенок дрожжей и грибов. Активизируемый фермент профенолоксидаза катализирует о-гидроокисление монофенолов, также хорошо как и дифенолы до хинонов, которые последовательно полимеризуются неферментативно, образуя меланин. Меланин и его предшественники, вовлеченные в систему активизации профенооксидызы, имеют цитотоксические и антимикробные свойства, и принимают участие в широком ряде других биологических процессов (фагоцитоз, опсонизация, инкапсулирование, образование включений, дегрануляция и заживление ран.

Фишер (1978) и Валембуа с сотр. (1991) обнаружили фенолоксидазную активность у дождевых червей L. terrestris и Е. foetida, соответственно. Затем Пак с сотр. (1994) обнаружили, что эта активность присуща белку с молекулярной массой 30 Кд, который был выделен из целомической жидкости L. rubellus.

Удивительно, что ранее описанный у червей Е. foetida цитолитический белок с массой 42 Кд, именуемый как CCF-1 (целомический цитолитический фактор 1), связывал ЛПС и бета-1,3-гликан и что некоторые белки были ответственны за трипанолитическую активность целомической жидкости (Bilej с сотр., 1995). Еще более удивительным оказалось, что цитолитическая, трипанолитическая и гликансвязывающая активности белка являлись аттрибутом небольшого домена из 13 аминокислотных остатков, проявляющих биологическую активность. Последовательность этого пептида полностью отличалась от таковой TIP-участка TNF-альфа, хотя они и обладают схожими функциональными свойствами.

Csonti с сотр. (1991, WO9107480) запатентовали метод получения смесь жиров, содержащую ейкозопентоат эфира из дождевых червей семейства Люмбрицид и смесь жирных кислот, содержащую ейкозопентаеновую кислоту. (Найти текст патента).

Carter с сотр., (1992) описал метод очистки фермента церамидгликаназы из дождевых червей L. terrestris. Молекулярная масса белка 43,7 Кд. Оптимум рН от 3,5 до 4,0.

Jin с сотр. (2000) исследовали действие люмброкиназы дождевых червей на антикоагуляцию и фибринолизис при лечении церебрального инфаркта. Показано, что люмброкиназа является эффективной при лечении церебрального инфаркта. Действие люмброкиназы проявляется в подавлении коагуляции и активации фибринолизиса с помощью уменьшения активности активатора тканевого плазминогена.

Nakajima с сотр. (1999) изучали сериновые протеазы дождевых червей L. rubellus, в частности специфичнjность дву[ фибринолитических ферментов.

Park с сотр. (1999) изучали антитромботическую активность люмброкиназы (потенциального фибринолитического фермента), иммобилизованной на полиуретане. Для этого 30 нг/мм2 фермента иммобилизовали с помощью фотореакции в присутствии полиаллиламина как фотореактивного линкера. Затем вводили имплантанты на три дня овцам весом по 50 кг, имеющих поражения сердца. После имплантации фибринолитическая активность обнаруживалась только в опыте с помощью метода фибриновой пластинки. Протеолитическая активность в опыте была в три раза выше, чем в контроле, используя азоказеиновый метод. Эти данные показывают, что люмброкиназа, иммобилизованная на полиуретане, приводит к уменьшению образования тромбов in vivo и она является более биосовместимой.

Nakajima с сотр. (1996) химически модифицировал один из сильнейших фибринолитических ферментов из 6-ти ферментов, выделенных из L. rubellus (Nakajima с сотр.,1993), с помощью фрагментированного сывороточного альбумина человека мол. массой 10-30 тыс. Д. Модифицированный фермент потерял антигенность нативного фермента. Конъюгат был более стабилен к инактивации ингибиторами протеаз плазмы крыс. Фермент вызывал геморрагии и не индуцировал агрегацию тромбоцитов. Такой фермент обладал большей протеолитической активностью для фибрина и фибриногена, чем для человеческого плазмина. Фермент действительно растворял фибриновые бляшки (тромбы), индуцированные тромбином у крыс. Постоянный фибринолизис в суспензии фибрина в реакторе-ферментере, используя модифицированный фермент, иммобилизованный на акриловых гранулах, можно достигать без какой-либо инактивации фермента в течение более 1 месяца. Исследована N-концевая последовательность белка и обнаружена родственность с таковыми сериновых протеаз (плазмин и химотрипсин).

Ryu с сотр. (1995) изучали поверхностные свойства и характеристики люмброкиназы, иммобилизованной на полиуретане. Люмброкиназу выделяли из дождевых червей L. rubellus. Показано, что иммобилизованная люмброкиназа проявляла стабильную протеолитическую активность в течение различных инкубационных периодов времени. Она проявляла протеолитическую активность к фибриногену и фибрину почти специфически, и трудно гидролизовала другие плазматические белки, включая плазминоген и альбумин. Таким образом, иммобилизованный фермент обладал высокой тромболитической активностью. Авторы разработали высокоэффективный метод поверхностной модификации на полиуретановой поверхности, и эта техника иммобилизации будет очень полезна для достижения биосовместимости препарата, контактирующего с кровью.

Ryu с сотр. (1994) разработали метод иммобилизации люмброкиназы на полиуретане, используя МАМЕС кополимер метилвинилового эфира малеиновой кислоты в качестве носителя фермента. Иммобилизованный фермент сохранял 34% от первоначальной активности растворенного фермента. Показано, что такой фермент способен переваривать адсорбированный фибриноген и ингибировать адгезию на поверхности тромбцитов, вероятно, с помощью ингибирования адсорбции фибриногена, что делает его высокоэффективным антитромбогеном. Клинические испытания такого фермента на пораженных органах могут быть осуществлены в ближайшее будущее.

Mezzei с сотр. (1997) в патенте Венгрии HU212824 описывает промышленный способ получения ферментов из компостного червя Е.foetida с помощью непрерывного аутофокусирования. Из гомогената тканей червей было выделено 4 вида ферментов: