Разработка пробиотического препарата на основе ультрафильтрата культуральной жидкости лактобактерий
, ,
The development of a probiotic drug based upon ultra-filtrate
of a cultural lactobacterial fluid
Molokhova Ye. I., Sorokina Yu. V., Chistokhina L. P., Neschislyaev V. A.
Пермская государственная фармацевтическая академия, г. Пермь
ã , ,
УДК 615.281:8:576.8:547.47
Лактобактерии в процессе своей жизнедеятельности продуцируют биологически активные соединения, оказывающие положительное влияние на нормальную микрофлору, работу желудочно-кишечного тракта, обмен веществ и иммунную систему организма человека (Шендеров Б. А., 1998). Эти свойства лактобактерий используют при получении различных препаратов, содержащих жизнеспособные клетки и их метаболиты, или на основе последних.
Авторами статьи разработан препарат «Микростим», содержащий биологически активные метаболиты лактобактерий. Для получения данного препарата была использована культуральная жидкость производственного штамма лактобактерий Lactobacillus plantarum 8P-A3, выбор которого обусловлен более высокой биологической активностью его метаболитов в сравнении с другими исследованными штаммами лакто - и бифидобактерий.
Действующими веществами препарата «Микростим» являются низкомолекулярные экзометаболиты лактобактерий. Разработанная оригинальная технология включает получение бактериальной взвеси путем реакторного культивирования, отделение низкомолекулярной фракции культуральной жидкости методом ультрафильтрации и последующую термическую обработку ультрафильтрата с целью его стабилизации
и повышения биологической активности (Несчисляев В. А., Чистохина Л. П., 2004).
Ранее проведенными экспериментами показано, что микростим проявляет выраженную пробиотическую активность. Препарат стимулирует рост и активность кислотообразования лакто - и бифидобактерий. Отмечен эффект значительного повышения под действием препарата «Микростим» антагонизма лактобактерий к патогенным и условно-патогенным микробам. Препарат оказывает стимулирующее влияние на показатели антагонистической активности как штамма-продуцента L. plantarum 8P-A3, так и других штаммов лактобактерий, что является ценным для пробиотика (Чистохина Л. П., 2004).
Микростим оказывает прямое угнетающее влияние на патогенные и условно-патогенные микробы, повышает их чувствительность к антибиотикам, а также к антибактериальным веществам, продуцируемым лактобактериями (Несчисляев В. А., Чистохина Л. П., 2004). Такое комплексное антимикробное действие позволяет использовать микростим для проведения клинических испытаний в качестве препарата для профилактики и лечения дисбактериозов, кишечных инфекций, а также гнойно-септических осложнений в акушерско-гинекологической и хирургической практике.
В соответствии с полученными результатами представляет интерес получение концентрата ультрафильтрата культуральной жидкости лактобактерий с целью введения его в различные лекарственные формы.
Для исследований было получено три серии ультрафильтрата (препарат «Микростим»). Концентрирование ультрафильтрата проводилось на вакуум-выпарной установке. Основные параметры концентрирования приведены в табл. 1.
Таблица 1
Параметры концентрирования ультрафильтрата
Серия концен-трата | Темпера- | Давле- | Степень концентри-рования | Время концентри-рования, ч | Среднее |
1 | 80—90 | 0,2—0,4 | 7,5 | 36,6 | 3,6 |
2 | 90 | 0,3—0,5 | 8,4 | 41,75 | 2,9 |
3 | 90 | 0,4—0,5 | 9,9 | 29,4 | 4,2 |
Проведен анализ физико-химических показателей полученных серий ультрафильтрата и концентрата по критериям проекта фармакопейной статьи на препарат «Микростим». Результаты представлены в табл. 2.
Экспериментально установлены следующие параметры концентрирования ультрафильтрата: температура — 90 °С; давление 0,4—0,5 атм; объем однократной порции ультрафильтрата в концентрирующей колбе — 200 мл. Данные условия позволяют получать концентрат со степенью концентрирования 7—9.
Сравнительное исследование физико-химических показателей экспериментальных серий ультрафильтрата и концентрата позволяет сделать предположительный вывод о сохранении в процессе концентрирования бактериальных пептидов. Содержание общего азота в концентрате пропорционально степени концентрирования. В настоящее время проводятся сравнительные исследования биологической активности ультрафильтрата и концентрата.
Таблица 2
Сравнительная характеристика физико-химических показателей
экспериментальных серий ультрафильтрата и концентрата
Наименование образца | рН | УФ-спектр поглощения, нм | Общий азот, мг/мл | |
min | max | |||
Ультрафильтрат | ||||
С. 1 | 5,7 | 244,9 | 263,1 | 7,04 |
С. 2 | 5,5 | 244,9 | 263,9 | 6,85 |
С. 3 | 5,4 | 244,6 | 263,1 | 6,94 |
Концентрат | ||||
С. 1 | 5,6 | 245,7 | 266,1 | 43,81 |
С. 2 | 5,4 | 245,5 | 267,3 | 54,57 |
С. 3 | 5,4 | 244,9 | 265,2 | 54,57 |
Полученные данные свидетельствуют о ценности концентрата ультрафильтрата культуральной жидкости лактобактерий и целесообразности включения его в лекарственные формы (мази, суппозитории).
