Приготовление ватных тампонов. Берут тонкие пласты гигроскопической ваты, отделяют от них небольшие куски, подвертывают их края так, чтобы получились плоские кружки. Тампоны для обеззараживания или протирания крупных приборов готовят диаметром 6—7, а для мелких – 3 - 4 см. Приготовленные тампоны пропитывают 96%-ным - спиртом, затем отжимают, складывают в банки-тампонницы и закрывают притертыми крышками. Сухие тампоны помещают в бумажные пакеты или стеклянные банки с бумажными колпаками и стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 130° в течение 1,5 ч. Спиртовые тампоны применяют для дезинфекции рук, подставок для инструментов, искусственных вагин, спермоприемников, шприцев-катетеров, влагалищных зеркал, пинцетов, стеклянных палочек, термометров и др. Сухими стерильными тампонами пользуются для удаления с приборов и инструментов остатков физиологического раствора, вазелина, спирта и др. Приготовление марлевых салфеток. Марлю разрезают на куски размером 20X30, 30X30 или 40X40 см и для обеззараживания проглаживают их горячим утюгом. Сложенные вчетверо салфетки укладывают в стерильную стеклянную банку и закрывают притертой крышкой. Салфетки используют для удаления капель воды с приборов и инструментов, для протирания предметных и покровных стекол и оптики.
Задание для самостоятельной работы
Задание 1. Опишите устройство искусственной вагины и правила ее сборки.
Задание 2. Описать порядок подготовки искусственной вагины для получения спермы от быка. Зарисовать правильно собранную вагину. Указать, какие условия должны соблюдаться при взятии спермы.
Задание 3. Опишите технику приготовления : 70%-ного спирта, 3%-ного раствора перекиси водорода, хромовой смеси, 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия.
Задание 4.Опишите приготовление ватных тампонов, фильтров, марлевых салфеток.
Практическое занятие № 3. Тема : Оценка спермы по внешним признакам. Визуальная оценка активности и концентрации спермиев. Определение концентрации спермиев в счетных камерах.
Цель занятия: Изучить анатомическое строение спермия, научиться определять концентрацию спермиев в счётных камерах.
Материалы и оборудование: Микроскопы, нагревательные столики Морозова, предметные и покровные стекла, термометры, мерные цилиндры на 10-15 мл, стеклянные палочки, воронки, сливные чашки, горячая и холодная вода, марлевые салфетки, счетная камера Горяева, лейкоцитарный и эритроцитарный меланжеры, 3%-ный раствор хлористого натрия, 96%-ный спирт, дистиллированная вода.
План :
1.Анатомическое строение спермиев
2.Оценка качества спермы.
3.Определение концентрации спермиев в счетных камерах
Теоретическая часть
Каждый полученный эякулят предварительно оценивают визуально, устанавливая при этом, нет ли в сперме примеси гноя, крови, мочи или хлопьев (наличие последних указывает на воспалительный процесс в придаточных половых железах). Сперма с такими примесями к использованию не допускается. После предварительной оценки измеряют объем эякулята и определяют концентрацию и подвижность сперматозоидов.
Объем эякулята быка и барана измеряют посредством смесителя, градуированного спермоприемника, пробирки или пипетки, а объем эякулята жеребцаи хряка - мензуркой.
Объем эякулята в одноразовом полиэтиленовом спермоприемнике можно определять взвешиванием на точных весах типа ВЛК-20, ВЛК-500 или Р-2-200, зная заранее стандартную массу отсоединенной части спермоприемника (1 г спермы соответствует 1 см3).
Для оценки спермы по подвижности применяют микроскоп с нагревательным столиком (столик Морозова или столик Пакенаса), который позволяет автоматически поддерживать температуру 38...40°С. Для оценки подвижности сперматозоидов на предметное стекло, лежащее на нагревательном столике, наносят каплю спермы и каплю 2,9% раствора цитрата натрия, смешивают, накрывают покровным стеклом и оценивают при увеличении микроскопа в 120-200 раз.
Для качественной оценки необходимо правильно настроить освещение поля зрения микроскопа (приложение 7).
Подвижность сперматозоидов определяют по 10-балльной шкале в нескольких полях зрения. Высшую оценку (10 баллов) получает сперма, в которой практически все (100%) сперматозоиды имеют прямолинейно-поступательное движение (ППД). При оценке 9 баллов примерно 9 сперматозоидов из каждых 10 (то есть 90%) имеют ППД и т. д. Другие виды движения сперматозоидов (манежное, колебательное) при оценке спермы по балльной системе не учитывают.
В зависимости от концентрации сперматозоидов неразбавленная сперма имеет следующие оценки: густая (Г), средняя (С) и редкая (Р).
Сперма густая. Густая сперма быка содержит сперматозоидов свыше 1 млрд/см3, барана - 2 млрд/ см, хряка - 0,2 млрд/ см3, жеребца - 0,25 млрд/ см3.
Сперма средняя. Средняя сперма быка содержит сперматозоидов от 0,7 до 1 млрд/см3, барана от 1 до 2 млрд/ см, хряка от 0,1 до 0,2 млрд/ см3, жеребца от 0,15 до 0,25 млрд/ см3.
Сперма редкая. Редкая сперма быка содержит сперматозоидов менее 0.7 млрд/ см, барана менее 1 млрд/ см3, хряка менее 0,1 млрд/ см, жеребцаменее 0,15 млрд/ см.
К использованию допускается сперма быков, баранов, хряков и. жеребцов с оценкой густая и средняя.
Густоту спермы и подвижность обозначают двумя знаками, Например, Г-9, что означает сперма густая, имеет 90% подвижных, с прямолинейно-поступательным движением сперматозоидов.
Концентрацию сперматозоидов определяют при помощи счетных камер, фотоэлектроколориметра и оптических стандартов (приложение 8).
При снижении качественных показателей спермы у отдельных производителей подсчитывают патологические формы сперматозоидов, определяют рН, физиологическую резистентность и интенсивность окислительно-восстановительных процессов по существующим методикам.
При хранении спермы при плюсовых температурах для биологического контроля оставляют от каждого разбавленного эякулята быка 0,5-1 см3, барана - до 0,5 см3, хряка - 10 см3, жеребца 3-5 см3 и исследуют в течение 3 дней. Результаты оценки записывают в лабораторный журнал.
Практическая часть
1.У спермия различают головку, шейку, тело и хвост. Головка является носителем наследственной информации. Шейка, тело и хвост – двигательная часть спермия.
Приготовление раздавленной капли. На чистое предметное стекло нанести стеклянной палочкой каплю исследуемой спермы, накрыть покровным стеклом. Капля должна быть среднего размера. Если капля слишком маленькая, то под покровным стеклом останутся свободные промежутки или образуются пузырьки воздуха, что будет затруднять исследование. Если капля очень большая, сперма вытекает из-под покровного стекла (стекло плавает), при этом может попасть на объектив, затруднив правильность наводки поля зрения и нарушив тем самым процесс исследования.
Микроскопирование спермы. Исследование спермы под микроскопом с несколькими объективами начинают с установки поля зрения при малом увеличении. Затем, переведя револьвер микроскопа, устанавливают объектив нужного увеличения. Резкость при этом сохраняется или требует незначительной регулировки микровинтом микроскопа.
Сперма очень чувствительна к температурным колебаниям. При резком ее охлаждении наступает холодовой удар (температурный шок), движение спермиев прекращается, значительная часть их погибает. Чтобы не допустить этого, работу со спермой следует проводить в помещении с температурой 18-250С.
Если температура ниже 180С, необходимо пользоваться специальным термостатом или обогревательным столиком. Исследование на подвижность спермы, охлажденной до 00С, проводят обязательно при температуре 38-400С в термостате или на обогревательном столике.
Задание для самостоятельной работы
Задание1.Опишите и зарисуйте анатомическое строение спермия.
Задание 2.Опишите органолептические показатели спермы здоровых производителей разных видов животных.
Задание 3. Записать порядок визуальной оценки спермы по ее активности.
а. Температура воздуха в помещении:
в. Температура в столике Морозова:
с. Кратность увеличения микроскопа:
д. Яркость освещения поля зрения:
Задание 4. Описать виды движения спермиев:
а. Прямолинейное поступательное.
в. Манежное.
с. Колебательное.
д. Отсутствие движения.
Задание 5. Опишите сперму разной густоты.
Задание 6. Оценить представленный эякулят по внешним признакам. Сделать заключение о качестве и целесообразности дальнейшего использования спермы.
Модуль 2
Практическое занятие № 4. Тема: Определение резистентности спермиев.
Цель занятия: Научиться определять скорость активности и процент живых спермиев.
Материалы и оборудование: Микроскоп, предметные и покровные стекла, микропипетка на 0,02 мл, градуированные пипетки на 1 и 10 мл, комплект из 2 флаконов на 20 мл каждый, стеклянные палочки, 1%-ный раствор химически чистого хлористого натрия, салфетки, стеклянная трубка диаметром 0,8-1,0 мм (можно использовать трубку от шприца-катетера), предметные стекла, 2 глазные пипетки, песочные часы, 0,01%-ный раствор метиленовой синьки, белая бумага, салфетки, раствор эозина, 96%-ный спирт, салфетки.
План :
1.Оценка спермы по интенсивности дыхания.
2.Определение процента живых спермиев
Теоретическая часть
Спермии в процессе спермиогенеза в извитых канальцах семенников приобретают сравнительно плотную клеточную оболочку, представляющую по химическому составу сложное белковое образование и придающую мужским половым клеткам определенную постоянную форму.
Проходя по длинному (40-70 м) каналу придатка семенника, спермии покрываются липоидной оболочкой. Она выполняет защитные функции, предохраняя сперматозоиды от неблагоприятного воздействия факторов внешней среды, а также придает спермиям отрицательные одноименные электрические заряды. Чем устойчивее эта оболочка, тем более жизнеспособны спермии, тем лучшего качества сперма, выше ее оплодотворяющая способность.
Активность спермы оценивают по скорости обесцвечивания (восстановления) метиленовой синьки, смешанной со спермой (методика ).
При дыхании спермии потребляют кислород, растворенный в смеси, в результате этого синька обесцвечивается. Интенсивность дыхания зависит от концентрации и активности спермиев. Спермии, способные к прямолинейно-поступательному движению, имеют более высокую активность жизненных процессов и дыхания. Следовательно, чем выше концентрация спермиев и чем большее их количество способно к прямолинейно-поступательному движению, тем быстрее расходуется кислород, скорее происходит обесцвечивание метиленовой синьки и, соответственно, выше качество спермы.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 |
