Изучение генетического аппарата микроорганизмов, форм и механизмов генетической изменчивости определило развитие прикладной науки – генной инженерии, основными задачами которой на современном этапе являются: создание новых вакцин, производство гормональных и ферментных препаратов, разработка современных молекулярно-генетических методов диагностики. В основе методов молекулярной гибридизации (ДНК-зонд, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и др.) лежит способность однонитчатой ДНК (зонд, праймер) достраиваться и взаимодействовать по принципу комплементарности с ДНК искомого возбудителя при ее наличии в исследуемом материале.
Работа 1. Изучить плазмидные признаки бактерий на примере антилизоцимной активности (АЛА).
Методика. Для определения бактерий с АЛА-признаком в плотную питательную среду добавляют необходимое количество лизоцима, затем на поверхность засевают в виде бляшек исследуемые бактерии, а через сутки после обработки хлороформом наносят второй слой агара с тест-штаммом микрококка, чувствительного к лизоциму. Учет проводят по росту микрококка над культурами, инактивировавшими лизоцим.
ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Исследуемый материал | Количество АЛА+культур | Рисунок с обозначениями |
Работа 2. Воспроизвести явление трансформации.
Методика. Для воспроизведения явления трансформации берут штаммы стафилококка, чувствительного (культура-реципиент) и устойчивого (культура-донор) к стрептомицину. Культура-донор помещается в специальный лизирующий буфер для выделения чистой ДНК. Культуру-реципиент помещают в буферный раствор с выделенной ДНК и инкубируют в термостате в течение суток. Проводят высевы на селективные среды, содержащие стрептомицин из контрольных и опытной пробирок. Посевы инкубируют в течение суток в термостате.
СХЕМА ОПЫТА
1 2
1.Культура-реципиент
2.ДНК культуры-донора
 |
 |
 |
Среда со стрептомицином
контроль 1 опыт контроль 2
ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Ингредиенты | Наличие роста на среде со стрептомицином |
Контроль1 | |
Контроль 2 | |
Опыт |
Работа 3. Определить фаготип исследуемой культуры.
Методика. На чашки Петри засевают шпателем взвеси исследуемых культур. На засеянную поверхность агара пастеровскими пипетками наносят аккуратными каплями сальмонеллезные индикаторные бактериофаги различных типов. Места нанесения фагов маркируют на дне чашки. Пипетки и шпатель помещают в стакан с дезраствором. Посев помещают в термостат на 24 часа. Через сутки учитывают результат. На поверхности выросших исследуемых культур определяют зоны лизиса бактерий соответствующим типом фага. Сравнивают фаготипы выделенных из разных источников культур бактерий.
ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Вид возбудителя | Результат | |
Исследуемая культура № 1 (вода) (рис. с обозначениями) | Исследуемая культура № 2 (больной А) (рис. с обозначениями) | |
Работа 4. Формы генетической изменчивости бактерий
Определяющий фактор изменчивости | Формы генетической изменчивости бактерий. |
УФЛ, гамма-излучение | |
F-плазмида | |
Бактериофаг | |
Питательная среда с фрагментами ДНК бактерий. |
Работа 5. Оценить результаты опыта по трансдукции.
Методика. Для проведения опыта в качестве реципиента берут штамм кишечной палочки, не сбраживающий лактозу (E. coli lac-), и фаголизат, содержащий умеренный бактериофаг, полученный при облучении УФЛ штамма E. coli lac+. Культуру реципиента и фаголизат смешивают и инкубируют 15 минут в термостате. Делают высевы на среду Эндо из пробирки с культурой-реципиентом (контороль) и из опытной пробирки. Посевы инкубируют в течение суток.
СХЕМА ОПЫТА
1 2
1. Культура-реципиент E. coli lac-
2. Умеренный фаг, полученный
при лизисе E. coli lac+
3. Среда Эндо.
Контроль Опыт
 |
 |
ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Ингредиенты | Характеристика колоний |
Контроль | |
Опыт |
МОДУЛЬ 3. Экология микроорганизмов. Использование микроорганизмов в биологии и медицине.
Практическое занятие. Экология микробных сообществ, роль микроорганизмов в круговороте веществ в природе. Основы биотехнологии. Использование микроорганизмов для получения пищевых и кормовых продуктов, химических реактивов и лекарственных препаратов
Цели и задачи. Сформировать представления об экологии микробных сообществ, сапрофитных, патогенных, условно-патогенных микроорганизмов в окружающей среде, использование сапрофитных бактерий антагонистов, продуцентов биологически активных веществ для оптимизации микробиоценозов, участие микроорганизмов в круговороте веществ, использование микроорганизмов в народном хозяйстве, ветеринарии и медицине.
Вопросы для рассмотрения
1. Формы симбиоза. Особенности паразит - хозяинных взаимодействий. Взаимоотношения между микробами в ассоциациях: симбиоз, метабиоз; синергизм, антагонизм; микробы – антагонисты, их использование в производстве.
2. Факторы внешней среды, результаты их действий на микроорганизмы, условия, определяющие подобный результат. Понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике и антисептике. Примеры. Способы стерилизации. Аппаратура.
3. Антибиотики. Определение. Классификация по источнику и способу получения. Классификация по химической структуре, по механизму и спектру действия.
4. Механизмы, обеспечивающие формирование резистентности микроорганизмов к лекарственным препаратам. Пути преодоления.
5. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
6. Использование микроорганизмов для получения пищевых и кормовых продуктов, химических реактивов и лекарственных препаратов. Микробная биотехнология, как сфера приложения микробиологии.
7. Ферменты микроорганизмов, имеющие практическое значение. Методы получения.
8. Краткая характеристика основных групп микроорганизмов - возбудителей заболеваний человека. Группы патогенности микроорганизмов. Методы лабораторного исследования.
Основные понятия темы.
Стерилизация – уничтожение всех форм жизни в объектах внешней среды с использованием преимущественно физических факторов. К методам стерилизации относят кипячение, фильтрование, автоклавирование, воздействие ультрафиолетовыми лучами – УФЛ и др. Дезинфекция – уничтожение патогенных микроорганизмов в объектах внешней среды с использованием преимущественно химических веществ - дезинфектантов. Наиболее часто используют производные хлора и фенолов, кислоты, щелочи, детергенты.
Антисептика – уничтожение патогенных микроорганизмов на поверхности тела человека и в ране с использованием химических веществ – антисептиков. С этой целью широко используются спирты, анилиновые красители, йод, растворы фурациллина, риванола и др.
Асептика – комплекс мероприятий (стерилизация, дезинфекция, антисептика, химиотерапия), направленный на предотвращение попадания микробов в заведомо стерильный объект (например, в операционную рану).
Антибиотики – продукты жизнедеятельности живых организмов или их синтетические аналоги, избирательно подавляющие жизнедеятельность других живых организмов или опухолевых клеток. По происхождению выделяют антибиотики растительного (фитонциды), животного (лизоцим) и микробного (пенициллин) происхождения, а также полусинтетические (ампициллин) и синтетические (хлорамфеникол) препараты. Механизм действия антибиотиков связан с точами их приложения в бактериальной клетке. Выделяют антибиотики, действующие на синтез белка на рибосомах, структуру клеточной стенки, цитоплазматическую мембрану, синтез нуклеиновых кислот. Антибиотикотерапия, как вариант химиотерапии, влечет за собой ряд побочных явлений, связанных с точками приложения и химической структурой антибиотика (токсическое действие, дисбиоз, аллергия, иммуносупрессия и др.).
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 |
Основные порталы (построено редакторами)