МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ АСПИРАНТАМ
ПО ПОДГОТОВКЕ К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ ПО ДИСЦИПЛИНЕ «МИКРОБИОЛОГИЯ»
Дисциплина «Микробиология» включает 10 часов практических занятий. Практическое занятие - это одна из форм учебной работы, которая ориентирована на закрепление изученного теоретического материала, его более глубокое усвоение и формирование умения применять теоретические знания в практических, прикладных целях. На практических занятиях особое внимание уделяется выработке учебных или профессиональных навыков.
При подготовке к практическому занятию выделяют организационный этап и этап закрепления и углубления теоретических знаний. На первом этапе аспирант планирует свою самостоятельную работу, которая включает: понимание задания на самостоятельную работу; подбор рекомендованной литературы; составление плана работы, в котором определяются основные пункты предстоящей подготовки. Составление плана дисциплинирует и повышает организованность в работе. Второй этап включает непосредственную подготовку аспиранта к занятию. Особое внимание при работе с рекомендованной литературой необходимо обратить на содержание основных положений и выводов, объяснение явлений и фактов, уяснение практического приложения рассматриваемых теоретических вопросов. В процессе этой работы аспирант должен стремиться понять и запомнить основные положения рассматриваемого материала, примеры, поясняющие его, а также разобраться в иллюстративном материале. Заканчивать подготовку следует составлением плана - перечня основных пунктов по изучаемому материалу, который позволит составить концентрированное, сжатое представление по изучаемым вопросам.
В процессе подготовки к практическому занятию при необходимости следует обращаться за консультацией к преподавателю. Идя на консультацию, необходимо хорошо продумать вопросы, которые требуют разъяснения.
МОДУЛЬ 1. Морфология, систематика, физиология микроорганизмов.
Практическое занятие 1.
Морфология и систематика микроорганизмов. Методы изучения морфологии микроорганизмов.
Цели и задачи: ознакомиться с методами изучения морфологии микроорганизмов, овладеть методами приготовления и окраски микропрепаратов, приобрести навык иммерсионной микроскопии, приобрести навык микроскопической дифференцировки микроорганизмов.
Вопросы для рассмотрения:
1. Значение микробиологии и иммунологии в жизнедеятельности человека. Связь микробиологии с другими дисциплинами.
2. Организация работы и техника безопасности в бактериологической лаборатории.
3. Правила забора, транспортировки исследуемого материала, оформления направления для микробиологических исследований.
4. Методы микроскопии: иммерсионная, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная, конфокальная лазерная, рентгеновская. Принципы и диагностическая значимость каждого метода.
5. Назначение и типы микропрепаратов из микроорганизмов: нативные, окрашенные (позитивно, негативно). Простые и сложные методы окраски.
6. Сравнительная морфология микроорганизмов.
7. Морфология и физиология вирусов.
8. Особенности патогенеза вирусных инфекций и механизмы противовирусного иммунитета.
9. Практическое использование системы антиген-антитело в вирусологии: а) для диагностики (реакции нейтрализации: реакция задержки гемагглютинации, реакция задержки ЦПД; иммуноферментный анализ, иммунный БЛОТ и др.); б) для специфической профилактики и терапии (вакцины и сыворотки при вирусных инфекциях).
ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ
Работа 1. Приготовление, окраска по Граму и иммерсионная микроскопия микропрепаратов из чистой культуры бактерий.
I. Приготовление препарата из агаровой культуры
Для приготовления мазка необходимо взять чистое обезжиренное стекло. На предметном стекле обозначают стеклографом место нанесения материала. На обратную сторону стекла от обозначенного места наносят петлей каплю физиологического раствора. В левую руку берут пробирку с агаровой культурой, а в правую - петлю за петледержатель. Петлю обжигают на пламени горелки. Пробку прижимают к ладони 4 и 5 пальцами и медленными вращающими движениями извлекают из пробирки. Край пробирки обжигают. Петлю вводят в пробирку и остужают о стенки. Скользящим движением петлей берут материал и осторожно, не задевая о стенки, извлекают. Пробирку снова обжигают и закрывают пробкой. В каплю физиологического раствора вносят исследуемую культуру и смешивают петлей до образования слегка мутноватой взвеси. Полученную взвесь равномерно распределяют на поверхности стекла, чтобы диаметр мазка был 1 – 1,5 см. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют, для этого проводят стекло над пламенем горелки три раза, при этом мазок должен быть сверху.
Окрашивание по методу Грама. 1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин её снимают, а краситель сливают. 2. Наносят раствор Люголя на 1 мин. 3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30- 60 сек. до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя. 4. Промывают препарат водой. 5. Докрашивают мазок водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промывают водой и высушивают.
Окрашенные препараты рассматривают под микроскопом с использованием масляной иммерсии.
Подготовка микроскопа для работы: поднять конденсор до уровня предметного столика, полностью открыть диафрагму, поставить плоское (при естественном освещении) или вогнутое (при искусственном освещении) зеркало. Осветить поле зрения под контролем объектива х 8.
Нанести на препарат каплю масла, положить препарат на столик микроскопа и закрепить зажимами. Установить иммерсионный объектив. Под контролем зрения (смотреть на объектив сбоку!) медленно опустить объектив макровинтом до погружения в масло. Затем, глядя в окуляр, медленно поднимать объектив до появления объекта. Провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, медленно вращая его только в пределах одного оборота.
ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Исследуемый материал | Ингредиенты окраски по Граму и время их действия | Назначение основных ингредиентов | Результат (рисунок с обозначениями) |
Работа 2. Сложный метод окраски по Цилю-Нильсену.
Методика. Окрашивают готовый препарат из смеси кислотоустойчивых и некислотоустойчивых бактерий по Цилю – Нильсену. 1. На фиксированный мазок наносят карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров в течение 3-5 мин. 2. Снимают бумагу, промывают мазок водой. 3. На мазок наносят 5% раствор серной кислоты или 3% раствор солянокислого спирта на 1-2 мин для обесцвечивания. 4. Промывают водой. 5. Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин. 6. Промывают водой, высушивают и микроскопируют.
Исследуемый материал | Ингредиенты окраски по Цилю-Нильсену | Назначение основных ингредиентов | Результат (рисунок с обозначениями) |
Работа 3. Изучение сравнительной морфологии основных групп микроорганизмов с использованием методов иммерсионной микроскопии и дифференциальной окраски микропрепаратов.
Рассмотреть демонстрационные микропрепараты под световым микроскопом с масляной иммерсией. Препараты стафилококка, стрептококка, кишечной палочки, стрептобацилл, холерного вибриона, риккетсий Провачека окрашены по Граму. Препарат лептоспир окрашен негативным способом. Вирус оспы – по Морозову.
Протокол исследования:
Микроорганизмы | Рисунок | Метод окраски | |
Бактерии | Стафилококки | ||
Кишечные палочки | |||
Спирохеты | Трепонемы | ||
Риккетсии | Риккетсии Провачека | ||
Вирусы | Вирус натуральной оспы |
Работа 4. Методы выделения и идентификации вирусов.
Методика 1. Окраска препаратов по методу Морозова-Пашена. Препарат из везикул после фиксации обрабатывается раствором таннина, затем окрашивается раствором серебра.
Методика 2. Выделение вируса в культуре клеток. Исследуемый материал в различных разведениях (1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000) в объеме 0,1-0,2 мл вносят в пробирки с культурой клеток (можно использовать как перевиваемые, так и неперевиваемые линии). В течение 7 дней наблюдают появление цитопатического действия.
Методика 3. Идентификация вируса в реакции нейтрализации. Вирус в рабочей дозе смешивается с соответствующей иммунной, диагностической сывороткой. Эта смесь инкубируется 1- 1,5 часа при температуре 370 С, затем помещается в культуру клеток. Учет реакции проводят по отсутствию цитопатического действия в культуре клеток, при наличии его в контроле.
ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Микроскопия препараты из везикул | Опыт | Контроль |
Вирус+иммунная сыворотка + культура клеток | Вирус + культура клеток | |
Рис. с обозначениями | Рис. с обозначениями | Рис. с обозначениями |
МОДУЛЬ 1. Морфология, систематика, физиология микроорганизмов.
Практическое занятие 2. Метаболизм, энергетические и биосинтетические процессы у микроорганизмов.
Цели и задачи. Изучить особенности энергетических ресурсов микроорганизмов. Способы обеспечения энергией: брожение, дыхание и фотосинтез. Универсальные формы энергии, используемые клеткой.
Вопросы для самоподготовки:
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 |
Основные порталы (построено редакторами)