Постнатальный морфогенез органов иммунной системы и кожи потомства самок мышей, подвергшихся иммуностимуляции в ранние сроки беременности (стр. 6 )

Изменения продукции цитокинов in vitro клетками тимуса и селезёнки потомства самок мышей, перенесших однократную стимуляцию иммунной системы в ранние сроки беременности, в разные периоды постнатального онтогенеза в ответ на стимуляцию Т - и В- клеточными митогенами

У мышей контрольной группы максимальное увеличение продукции тимоцитами ИЛ-2 и ФНО-α при действии Т-клеточного митогена Кон А наблюдали в возрасте 1,5 месяцев, а ТФР-β – в 2,5 месяцев. У мышей опытной группы максимальное увеличение продукции всех цитокинов отмечали в возрасте 17-ти суток, затем секреция цитокинов снижалась. Воздействие В-клеточного митогена ЛПС вызывало наибольшую продукцию цитокинов у мышей контрольной и опытной групп в возрасте 17-ти суток, но в опытной группе продукция цитокинов была более выраженной. Эти данные указывают на наличие в тимусе мышей опытной группы большего количества функционально зрелых клеток в возрасте 17-ти суток, что согласуется с результатами анализа субпопуляционного состава лимфоцитов тимуса (рис.1) .

Рис.1. Продукция цитокинов клетками тимуса in vitro при стимуляции митогенами

Примечание: * - статистически значимые отличия от контрольной группы, # - статистически значимые отличия в группах от предыдущего срока исследования.

При сравнении возрастных особенностей продукции цитокинов клетками селезёнки в ответ на стимуляцию Т - и В-клеточными митогенами у мышей опытной группы также как и в тимусе отмечали более высокую секреторную активность в возрасте 17-ти суток, что указывает на большее количество зрелых Т - и В - клеток. В 1,5 месяца продукция цитокинов была ниже, чем в контрольной группе, что подтверждало выявленное снижение числа дифференцированных лимфоцитов в селезёнке (рис.2).

Рис. 2. Продукция цитокинов клетками селезёнки in vitro при стимуляции митогенами

Примечание: * - статистически значимые отличия от контрольной группы, # - статистически значимые отличия в группах от предыдущего срока исследования.

Морфофункциональные изменения органов иммунной системы потомства самок мышей, перенесших однократную стимуляцию иммунной системы в ранние сроки беременности, при развитии системного воспалительного ответа

Развитие системного воспалительного ответа после введения сублетальной дозы ЛПС у потомства самок, подвергшихся однократной иммуностимуляции на 7-ые сутки беременности, было менее выраженным, о чем свидетельствовала значительно меньшая по сравнению с контрольной группой концентрация ФНО-α в сыворотке через 3 ч после введения ЛПС, а также статистически значимо меньшее количество лейкоцитов в периферической крови с большим содержанием моноцитов и меньшим содержанием лимфоцитов и меньшая гибель животных через 24 ч (30% и 70%, соответственно).

Морфофункциональные изменения тимуса мышей

Через 24 ч после введения ЛПС у мышей контрольной группы наблюдали уменьшение относительной массы тимуса (табл. 10), выявляли массивную гибель лимфоцитов в корковом и в мозговом веществе, что проявлялось пикнозом и распадом ядер клеток, появлением множественных очагов опустошения коры, уменьшение толщины субкапсулярного слоя, количества лимфоцитов и тимических телец в мозговом веществе (табл. 6).

Табл. 6

Морфофункциональные характеристики тимуса мышей контрольной и опытной групп в разные сроки после введения ЛПС (M±m)

Морфологические показатели	До введения ЛПС	Через 24ч после введения ЛПС	Через 48ч после введения ЛПС
Относительная масса тимуса, % Контрольная группа Опытная группа	0,67±0,11 0,63±0,03	0,21±0,02# 0,76±0,03*	0,13±0,01♦ 0,21±0,02♦*
Доля коркового вещества, % Контрольная группа Опытная группа	73,31±3,68 77,35±3,51	72,02±5,27 78,47±5,73	72,04±3,08 67,90±1,84
Ширина субкапсулярного слоя, мкм Контрольная группа Опытная группа	58,48±4,46 53,01±3,36	22,15±1,35# 12,53±0,78#*	15,90±0,97♦ 9,87±0,49♦*
Количество тимических телец в мм2 среза мозгового вещества Контрольная группа Опытная группа	10,27±0,53 12,25±0,68*	5,06±0,65# 13,49±1,25*	8,39±0,75♦ 18,91±0,09♦*
Количество ретикулоэпителиоцитов в тимическом тельце Контрольная группа Опытная группа	3,39±0,18 4,0±0,21	2,79±0,30 3,12±0,21#	3,12±0,21 2,40±0,51
Количество лимфоцитов в мм2 мозгового вещества Контрольная группа Опытная группа	22180,0±818,0 17440,0±668,0*	12860,0±814,6# 17516,7±2137,3*	18116,7±530,7♦ 13700,0±1306,6♦*
Количество лимфоцитов в мм2 коркового вещества Контрольная группа Опытная группа	— —	— —	4515,0±267 2841,3±221,6*

Примечания: * - статистически значимые различия между опытной и контрольной группами; # - статистически значимые различия между значениями до введения ЛПС и через 24ч после введения ЛПС; ♦ - статистически значимые различия между значениями через 24ч после введения ЛПС и через 48ч после введения ЛПС.

В отличие от контрольной группы через 24 ч после введения ЛПС масса и размер тимуса мышей опытной группы не изменены (табл. 6). При исследовании гистологических препаратов в долях тимуса границы между корковым и мозговым веществом были чёткими. В корковом веществе наблюдали пикнотизацию ядер лимфоцитов, краевую конденсацию хроматина, распад ядер, но эти процессы были выражены меньше, чем в контрольной группе. Однако ширина субкапсулярного слоя была уменьшена в большей степени, нежели в контрольной группе (табл. 6). Количество лимфоцитов и тимических телец в единице площади мозгового вещества не изменено после введения ЛПС и превышало значения контрольной группы (табл. 6).

Через 48 ч после введения ЛПС масса тимуса мышей контрольной группы уменьшена по сравнению с предыдущим сроком исследования (табл. 6). При исследовании гистологических препаратов в долях тимуса наблюдали опустошение коркового вещества, резкое истончение и фрагментацию субкапсулярного слоя (табл. 6), а также появление митотически делящихся клеток. В мозговом веществе количество лимфоцитов и тимических телец увеличено по сравнению с предыдущим сроком исследования (табл. 6).

Относительная масса тимуса через 48 ч после введения ЛПС у мышей опытной группы уменьшена. Она превышала значения контрольной группы аналогичного срока исследования и соответствовала значениям контрольной группы, наблюдаемым через 24 часа после введения ЛПС (табл. 6). При гистологическом исследовании наблюдали большее опустошение коркового вещества (табл. 6). Выявлено статистически значимое уменьшение ширины субкапсулярного слоя как по сравнению с предыдущим сроком исследования, так и значениями контрольной группы, вплоть до исчезновения в отдельных случаях (табл. 6). В корковом веществе часто встречали тимоциты с пикнотизированными ядрами, фрагменты распавшихся ядер, единичные нейтрофилы. В отличие от контрольной группы митотически делящиеся клетки практически не выявляли. В мозговом веществе количество лимфоцитов уменьшено, было статистически значимо ниже, чем в контрольной группе через 48 часов, и соответствовало значениям контрольной группы через 24 часа после введения ЛПС (табл. 6). Количество тимических телец в единице площади мозгового вещества увеличено и значительно превышало значения контрольной группы (табл. 6). Общим для опытной и контрольной групп было отсутствие тучных клеток в тимусе.

Морфофункциональные изменения селезёнки мышей

Через 24 ч после введения ЛПС у мышей контрольной группы наблюдали увеличение относительной массы селезёнки, доли белой пульпы и уменьшение ширины маргинальной зоны (табл. 7). В маргинальной зоне общее количество лейкоцитов уменьшено, но резко увеличено процентное содержание нейтрофилов (табл. 7). В лимфатических узелках выявляли апоптотически измененные лимфоциты с пикнотизированными и фрагментированными ядрами. Количество гемопоэтических клеток и клеток крови в красной пульпе также уменьшено, а доля нейтрофилов увеличена. Также выявляли тучные клетки с высокой насыщенностью секреторным материалом (табл. 7).

При исследовании селезёнки мышей опытной группы через 24 ч после введения ЛПС выявляли увеличение массы органа и доли белой пульпы аналогичное таковому в контрольной группе (табл. 7). Общей чертой было и уменьшение ширины маргинальной зоны и количества клеток в ней, но, тем не менее, последний показатель превышал значения контрольной группы. Нейтрофилы в маргинальной зоне практически отсутствовали (табл. 7). Известно, что при попадании антигенов в организм усиливается миграция нейтрофилов в маргинальную зону селезёнки, где они трансформируются в В-клеточные хелперные нейтрофилы. Синтезируемые ими В-стимулирующие молекулы инициируют антиген-независимую секрецию иммуноглобулинов В-клетками маргинальной зоны [Mantovani A. et al., 2011; Cerutti A. et al., 2012]. Таким образом, снижение миграции нейтрофилов в маргинальную зону может приводить к снижению выраженности иммунного ответа. В лимфатических узелках селезёнки гибель лимфоцитов была более выражена. Количество клеток в красной пульпе уменьшено, но превышало значения контрольной группы. Нейтрофильные гранулоциты в красной пульпе встречали крайне редко (табл. 7). Количество выявляемых тучных клеток значительно уменьшено и не отличалось от значений контрольной группы. Треть тучных клеток выделяла секреторный материал путем дегрануляции (табл. 7). Изменения цитофизиологических характеристик тучных клеток селезёнки согласуются с данными о миграции тучных клеток из органов кроветворения и иммунной защиты в органы-мишени, а также усиление секреции ими биологически активных веществ при внедрении в организм бактериальных антигенов [, 2009; Crivellato E. et al., 2010]. Это свидетельствует о сохранности защитных функций тучных клеток у потомства мышей, подвергшихся “цитокиновому шторму” на ранних сроках беременности.