Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

______________________________________________________________

______________________________________________________________

______________________________________________________________

Рекомендуемая литература

Основная

1 Кухта, В. К и др. Биологическая химия: учебник / , , ; под ред. . – Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. – С. 155-166.

2 Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. . – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 297-312, 315-332.

3 Филиппович, Ю. Б. Основы биохимии. – 4-е изд. – М.: Агар, 1999. – С. 306-328.

4 Николаев, А. Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 248-254.

5 и др. Биохимия человека: в 2-х т.: Пер. с англ., М.: Мир, 2004. – Т.1: С. Т.1: 140-150, 189-194.

Дополнительная

6 Березов, Т. Т. Биологическая химия / , . – М.: Медицина, 1998. – С. 319–326, 335-338, 665-670.

Занятие 10

Углеводы-2. Тканевой обмен углеводов.
анаэробный и аэробный гликолиз

Цель занятия: сформировать у студентов знания о путях и механизмах обмена глюкозы в организме. Научиться определять концентрацию глюкозы в крови.

Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

1  Цикл Кребса – реакции, ферменты, энергетический баланс, регуляция.

2  Молекулярные механизмы транспорта веществ через биологические мембраны.

Студент должен уметь:

1  Выполнять колориметрический анализ.

Структура занятия

1 Теоретическая часть

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

1.1 Пути обмена глюкозо 6-фосфата в тканях (схема углеводного обмена в организме).

1.2 Анаэробное расщепление углеводов – гликолиз, гликогенолиз (ферменты, реакции). Киназные реакции гликолиза. Субстратное фосфорилирование. Гликолитическая оксидоредукция.

1.2.1 Молочнокислое и спиртовое брожение – ферменты, реакции, сходство и отличие.

1.3 Метаболизм этанола в организме. Механизм токсического действия этанола и пути детоксикации (алкоголь ДГ, МЭОС, каталаза).

1.4 Аэробный гликолиз. Окислительное декарбоксилирование ПВК (фер­менты, реакции). Строение пируватдегидрогеназного комплекса.

1.5 Витамин B1. Строение, роль в обмене, картина гипо - и авитаминоза.

1.6 Регуляция гликолиза и гликогенолиза. Эффект Пастера (сущность и механизм).

1.7 Энергетический баланс окисления углеводов.

2 Практическая часть

2.1 Решение задач.

2.2 Лабораторные работы.

Задачи

1. Пируватдегидрогеназный комплекс является мультиэнзимной системой, в его состав входят:

а) 3 фермента и 5 коферментов; б) 5 ферментов и 5 коферментов; в) 5 ферментов и 3 кофермента?

2.  Функцией пируватдегидрогеназного комплекса является образование:

а) ЩУК; б) пирувата; в) ацетил-КоА; г) лактата?

3.  Фермент субстратного фосфорилирования в гликолизе:

а) лактатдегидрогеназа; б) гексозофосфатизомераза; в) альдолаза; г) фосфоглицератмутаза; д) пируваткиназа?

4.  Механизм мобилизации гликогена:

а) гуанилатциклазный; б) инозитольный; в) аденилатциклазный; г) перекисный?

5.  Количество АТФ, образующееся при полном окислении одной молекулы глюкозы:

а) 15; б) 24; в) 30; г) 37; д) 38?

6.  Выбрать реакцию субстратного фосфорилирования:

а)  3-фосфоглицерат ↔ 2-фосфоглицерат;

б)  фосфоенолпируват + АДФ → пируват + АТФ;

в)  глюкозо-6-фосфат + Н2О → глюкоза + Н3РО4;

г)  оксалоацетат + ГТФ → фосфоенолпируват + СО2 + ГДФ?

7.  УДФ-глюкоза необходима для:

а) синтеза гликогена; б) разветвления цепей гликогена; в) синтеза Г-6Ф; г) метаболизма галактозы; д) метаболизма этанола; е) метаболизма фруктозы?

8.  Какие из последующих кофакторов или их производных необходимы для перехода пирувата в CH3-CO~S-КоА:

а) аскорбат; б) NAD+; в) ТПФ; г) KoQ; д) витамин А; е) цитохром P450; ж) FAD; з) липоевая кислота; и) цитохром b5; к) HS-КоA?

9.  Развитие ацидоза при сильной физической нагрузке можно объяснить увеличением содержания:

а) NADH в мышце; б) лактата в крови; в) АТФ в мышце; г) пирувата в крови; д) NAD+ в крови; е) кислорода в мышце?

Лабораторная работа № 1. Определение глюкозы в слюне глюкозооксидазным методом.

Принцип метода. Глюкоза окисляется в присутствии глюкозооксидазы согласно реакции:

Глюкоза +O2 = глюконолактон + Н2О2

Образующаяся перекись водорода под действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта определяемого фотометрически.

Ход работы. Компоненты в реакционной смеси отбираются в количествах согласно таблице:

КОМПОНЕНТЫ

ОПЫТНАЯ ПРОБА (мл)

Слюна

0,01

Рабочий реагент

2,00

Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 10 минут при 37°C в термостате при предварительно прогретом рабочем реагенте. Измеряют оптическую плотность опытной пробы (Епр.) на КФК против дистиллированной воды при длине волны 510 нм (зелёный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см. Стабильность окраски опытной пробы 15 мин.

Расчет. Концентрацию глюкозы в исследуемой жидкости в ммоль/л определяют по формуле:

Соп. = Еоп./Ест. • Сст.

где Сст. – концентрация глюкозы в калибровочном растворе (Сст.= 10 моль/л);

Соп – концентрация глюкозы в исследуемой слюне;

Еоп – экстинкция опытной пробы;

Ест – экстинкция калибровочного раствора (Ест = 0,216).

Норма. Концентрация глюкозы в слюне 0,5-1,5 ммоль/л.

Клинико-диагностическое значение. Увеличение концентрации глюкозы в крови (гипергликемия) наблюдается при сахарном диабете, остром панкреатите, панкреатических циррозах, эмоциональных стрессах, после эфирного наркоза, обильного приема углеводов с пищей, а также при повышении гормональной активности ряда желез (щитовидной, гипофиза, коркового и мозгового слоя надпочечников).

Снижение уровня глюкозы в крови (гипогликемия) отмечается при поражении паренхимы печени, нарушении ферментативной активности при распаде гликогена; гипофункции щитовидной железы, надпочечников, гипофиза, передозировке инсулина при лечении сахарного диабета, нарушении всасывания углеводов, отравлениях фосфором, бензолом, хлороформом, при недостатке приема с пищей углеводов, после больших потерь крови.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

______________________________________________________________

______________________________________________________________

______________________________________________________________

Лабораторная работа № 2. Определение концентрации глюкозы в крови по цветной реакции с орто-толуидином

Принцип метода. Глюкоза при нагревании с о-толуидином в кислой среде дает сине-зеленое окрашивание, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации глюкозы и определяется на фотоэлектроколориметре (см. уравнение).

С о-толуидином реагируют все альдегиды, однако их содержание в крови невелико, поэтому метод позволяет определить практически одну глюкозу.

ВНИМАНИЕ! Соблюдать меры безопасности при работе с орто-толуидином и кипячением на водяной бане.

Ход работы. В две центрифужные пробирки наливают по 0,9 мл 3 %-го раствора ТХУ, затем в одну из них вносят 0,1 мл крови, взятой из пальца (или сыворотки), а в другую – 0,1 мл стандартного раствора глюкозы (5,5 ммоль/л). Содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин.

Полученный супернатант (надосадочную жидкость) переливают в чистую сухую пробирку, из которой по 0,5 мл надосадочной жидкости из каждой пробирки вносят в обычные сухие пробирки, добавляют по 4,5 мл ортотолуидинового реактива.

Пробирки закрывают фольгой и помещают в кипящую водяную баню точно на 8 мин. Необходимо следить, чтобы вода в бане непрерывно кипела. Вынимают пробирки и охлаждают их водопроводной водой до комнатной температуры. Затем на фотометре измеряют оптическую плотность проб в кюветах на 10 мм против воды с красным светофильтром (620 нм).

Расчет. Концентрация глюкозы в опытной пробе рассчитывают по формуле:

Cоп = Cст (Eоп/Eст),

где Соп – концентрация глюкозы в крови в пробе, ммоль/л;

Сст – концентрация глюкозы в стандартной пробе (5,5 ммоль/л);

Еоп – оптическая плотность пробы;

Ест – оптическая плотность стандарта глюкозы.

Норма. Нормальная концентрация глюкозы в крови человека колеблется в пределах 3,33–5,55 ммоль/л (60–100 мг%).

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

______________________________________________________________

______________________________________________________________

______________________________________________________________

Рекомендуемая литература

Основная

1 Кухта, В. К и др. Биологическая химия: учебник / , , ; под ред. . – Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. – С. 167-172, 92-96.

2 Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. . – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 333-343, 124-139.

3 Филиппович, Ю. Б. Основы биохимии. – 4-е изд. – М.: Агар, 1999. – С. 328-357.

4 Николаев, А. Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 252-260, 267-268.

5 и др. Биохимия человека: в 2-х т.: Пер. с англ., М.: Мир, 2004. – Т. 1: С. 181-188.

Дополнительная

6 Березов, Т. Т. Биологическая химия / , . – М.: Медицина, 1998. – С. 327-335, 343-353.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4