Морфофункциональная характеристика поджелудочной железы у 45 дневных клинически здоровых поросят и влияние на нее селеданта и липотона (стр. 2 )

В 45 дневном возрасте от каждой группы поросят подвергали убою 3-4 головы. Материал отбирался в соответствии с поставленными целями и задачами. Образцы поджелудочной железы фиксировались в 10-12%-ном растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа. Материал подвергался обезвоживанию и заливался в парафин, с парафиновых блоков готовились серийные срезы толщиной 5-7 мкм на микротоме МП-2.

Для общей оценки морфологической структуры органа парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином и по Ван-Гизон. Для подсчета размера, диаметра, площади, объема клеточных структур использовали морфометрическую линейку и статистическую программу Meta Vision 1.2. Для подсчета количественного и процентного соотношения клеток применяли окулярную измерительную сетку с известной площадью (0,0114 мм2) при увеличении объектива 90 под иммерсией. Количество морфометрических измерений, необходимых для объективного определения исходной величины было установлено по формуле: Х=400*(100-м)/М (, 1980).

Окрашивали срезы на ДНК с реактивом Шиффа по методу Фельгена, для выявления ДНК и РНК проводили окраску по методу Браше метиловым зелёным – пиронином, окраску на В-клетки островков Лангерганса проводили по методу Гомори (Э. Пирс, 1962), для выявления белков использовали метод с Амидочерным 10В (, 1976), выявление мукополисахоридов производили реакцией Шиф-йодной кислоты (ШИК-реакция) (Э. Пирс, 1962). Учет реакций проводили методом цитофотометрии. Оптическая плотность гистохимических реакций на срезах измеряли на цитофотометре «Люмам И-3».

Для электронной микроскопии материал фиксировали в 2,5 % - ном глютаровом альдегиде на 0,114 М коллидновом буфере на холоде с постфиксацией в 1 % - ном растворе тетраокси осмия на том же буфере. Осмомолярность 360 мосм достигали введением во второй фиксатор 0,05 М железосинеродистого калия и раствора Рингера. Материал заключали в эпон-812. Готовились полутонкие срезы, которые окрашивались азур-2 в сочетании фуксином основным и просматривались в световом микроскопе «Leica». Ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме Ultracut (Leica), контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом и просматривали в электронном микроскопе EM-208 (Philips).

Результаты исследований были подвергнуты статистической обработке на персональном компьютере IBM (программа Микрософт Эксель 2003).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Структурная организация поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней

У клинически здоровых поросят 45 дневного возраста паренхима поджелудочной железа была разделена на дольки, которые состояли из групп ацинусов. Дольки отделялись друг от друга соединительнотканной прослойкой, в которой располагались сосуды, нервы, нервные ганглии и выводные протоки.

Ширина соединительнотканной прослойки колебалась от 4 до 10 мкм. Междольковая соединительная ткань и стромальные элементы занимали 30% площади поджелудочной железы. На гистологических срезах, на фоне более темных по окраске ацинусов, просматривались достаточно светлые участки скоплений островковых клеток (Рис. 1А). Общее количество железистой паренхимы составило 70%. На долю экзокринной части железы, представленной ацинусами, приходилось 63,8%, а островковая – эндокринная часть железы составила 6,2%.

Большинство ацинусов не имели четких границ, каждый из них был окутан узкими прослойками соединительной ткани с тонкими коллагеновыми и эластическими волокнами (Рис. 1Б). Ацинусы были округлой или овальной формы с диаметром 52,14 ± 1,24 мкм и площадью ацинарной клетки 55,85 ± 3,91 мкм².

В ацинусе в среднем выявлялось от 7 до 12 ацинарных клеток довольно крупного размера, которые имели вид конуса с усеченной верхушкой и располагались на базальной мембране. Вершины клеток составляли просвет ацинуса. Высота ацинарных клеток составила 10,66 ± 0,41мкм.

Клетки ацинуса имели эозинофильную зернистую цитоплазму и крупные базофильные ядра. Иногда встречались ацинарные клетки с двумя ядрами. Ядра имели округлую форму, преимущественно с одним ядрышком и кариоплазму с крупноглыбчатым хроматином. В большинстве своем, ядра были смещены к базальному краю клетки (Рис. 1В). Наблюдалось и центральное расположение ядер в клетке.

У клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней средний диаметр ядер клеток ацинусов составлял 4,67 ± 0,14 мкм, объем ядер – 53,41 ± 2,77 мкм³ и площадь – 15,80 ± 0,52 мкм² (Табл. 1).

Таблица – 1. Морфометрические показатели экзокринной части поджелудочной железы клинически здоровых поросят 45 дневного возраста

Показатели	Величина
D ацинусов поджелудочной железы (мкм)	52,14 ± 1,24
Высота ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм)	10,66 ±0,41
S ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм²)	55,87 ± 3,91
D ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм)	4,67 ± 0,14
V ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм³)	53,41 ± 2,77
S ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм²)	15,80 ± 0,52
Я-Ц отношение ацинарных клеток поджелудочной железы	0,28

При этом эндокринные островки у поросят не имели собственной капсулы и были отделены от ацинарной паренхимы лишь незначительной прослойкой ретикулярной ткани. В островках незначительно выявлялась соединительная ткань. Эндокринная паренхима железы составила 6,2%. Островки имели овальную, продолговатую или удлиненную формы, с диаметром 89,12 ± 10,1 мкм и площадью 5351,87 ± 105,6 мкм². Эндокриноциты в большинстве своем имели округлую форму, а строма островков была заполнена многочисленными кровеносными капиллярами.

Большую часть эндокринных островков занимали В-клетки, которые располагались по всей поверхности островка, с наибольшей локализацией в центре. В-клетки имели меньшие размеры по сравнению с ацинарными, округлую форму, с центрально расположенным ядром в цитоплазме клетки. Ядра их были крупными, круглыми, светлыми с мелкоглыбчатым хроматином, разбросанным по всей кариоплазме ядра.

Междольковые выводные протоки располагались в междольковой соединительной ткани и сопровождались кровеносными сосудами (Рис. 1Г). Крупные протоки чаще имели округлую форму и большой просвет, а мелкие – вытянутую форму и узкий просвет. Внутридольковые протоки были немногочисленными, разных размеров и формы. Чаще встречались протоки округлой или продолговатой формы.

Рис. 1. А. Диффузное распределение светлых островков Лангерганса в железистой паренхиме поджелудочной железы у 45 дневного поросенка. Окр. г.-э. Ув. ок. 7, об. 10.; Б. Нечеткое выделение границ ацинусов в поджелудочной железе у 45 дневного клинически здорового поросенка. Ок. г.-э. Ув. ок. 7, об. 40.; В. Смещение ядер к базальному краю клеток в ацинусах поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. по Ван-Гизон. Ув. ок. 7, об. 100.; Г. Строма и кровеносные сосуды в поджелудочной железе у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. по Ван-Гизон. Ув. ок. 7, об. 40.

Оптическая плотность РНК ацинарных клеток составила 0,36±0,011 е. о. п., а в островковых клетках – 0,23 ± 0,024 е. о. п. РНК содержалась равномерно по всей цитоплазме ацинарной клетки, а в панкреатических островках РНК встречалась преимущественно в перинуклеарной зоне (Рис 2А).

Содержание белков и белоксодержащих веществ в экзо - и эндокринном эпителиях составило соответственно 0,340 ± 0,012 и 0,26 ± 0,019 е. о. п., а нуклеиновых кислот – соответственно 0,197 ± 0,023 и 0,165 ± 0,013 е. о. п.. Распределение белков и белоксодержащих веществ в поджелудочной железе у поросят было не равномерным. Наблюдалось увеличение показателей в апикальной части экзокринных клеток (Рис. 2 Б, В).

Цитофотометрические содержание гликогена в поджелудочной железе у 45 дневных клинически здоровых поросят составило в ацинусе 0,49 ± 0,015 е. о. п., в эндокринных островках – 0,37 ± 0,026 е. о. п. Гранулы гликогена располагались избирательно в пределах ацинусов, с незначительным уменьшением в островковой паренхиме (Рис. 2 Г).

Рис. 2. А. Базофилия ядерного РНК клеток поджелудочной железы у клинически здорового 45 дневного поросенка. Окр. метиловым зеленым - пиронином по Браше. Ув. ок. 7, об. 100.; Б. Распределение нуклеиновых кислот в ядрах экзокринных клеток поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. по Фельгену (без дополнительной окраски прочным зеленым). Ув. ок. 7, об. 40.; В. Оптическая плотность суммарных белков в апикальной части ацинусов поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. амидочерным 10В. Ув. ок. 7, об. 40.; Г. Незначительное содержание гликогена в клетках ацинуса поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. ШИК-реакция. Ув. ок. 7, об. 40.

При изучении полутонких срезов установили, что границы между ацинусами едва заметны, междольковая соединительная ткань была выражена слабо. Ацинусы имели овальную или вытянуто-овальную форму. Ядра клеток были шаровидными, крупные ядра содержали одно, два, редко три ядрышка (Рис. 3 А). В апикальной части ацинуса наблюдались немногочисленные скопления гранул зимоген. Внутридольковые протоки имели округлую, реже продолговатую формы и были выстланы однослойным кубическим эпителием с оксифильной цитоплазмой. Ядра экзокриноцитов имели округлую, овальную или угловатую форму. Междольковые крупные протоки были чаще вытянутыми, реже округлыми, выстланы кубическим эпителием. Крупные ядра округлой формы занимали центральное положение в клетке, цитоплазма окрашивалась оксифильно. В просвете протоков встречались гранулы секрета.