И Н С Т Р У К Ц И Я
по применению набора реагентов для количественного определения общего белка в моче и
спинномозговой жидкости с бромфеноловым синим
ОБЩИЙ БЕЛОК БФС “ДДС”
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для количественного определения общего белка в моче и спинномозговой жидкости человека с бромфеноловым синим (БФС) в клинико-диагностических, биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор выпускается в двух видах фасовки и рассчитан, соответственно, на проведение 100 или 300 определений при расходе 1,0 мл реагента 1 на один анализ.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Белок в кислой среде взаимодействует с бромфеноловым синим с образованием окрашенного комплекса, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации общего белка в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 597 (590-630) нм.
СОСТАВ НАБОРА
Реагент 1: буферный раствор pH 3,0, содержащий глицин, 195 ммоль/л, бромфеноловый синий, 165 мкмоль/л и азид натрия, 0,095% – 1 флакон (100 мл) или 3 флакона (по 100 мл).
Реагент 2: калибратор (калибровочный раствор белка, 200 мг/л, содержащий сывороточный человеческий альбумин, 140 мг/л, глобулин, 60 мг/л, натрий хлористый, 0,9% и азид натрия, 0,095%) – 1 флакон (3,0 мл) или 2 флакона (по 3,0 мл).
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Набор обеспечивает линейную область определения концентрации общего белка в диапазоне от 100 до 3000 мг/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 50 мг/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
Качество набора можно оценивать по отечественной или зарубежной контрольной моче, аттестованной данным методом.
Нормальные величины общего белка в моче человека составляют до 240 мг/л (до 80 мг/сутки – в покое, до 250 мг/сутки – после интенсивной работы), в спинномозговой жидкости – до 400 мг/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей.
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Моча или спинномозговая жидкость.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Реагенты 1 и 2 содержат азид натрия. При работе с ними следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т. к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:
- Спектрофотометр, программируемый фотометр или биохимический анализатор, длина волны 597 (590-630) нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм;
– термостат, обеспечивающий температуру 37+10С;
– секундомер;
– вода дистиллированная;
– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 100 и 1000 мкл;
– 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор); -
– перчатки резиновые или пластиковые.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Реагенты 1 и 2 готовы к использованию.
Инструкция составлена генеральным директором -ДС», к. б.н.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице:
Таблица.
Отмерить, мкл | Опытная проба | Калибровочная проба | Контрольная (холостая) проба |
Моча или спинномозговая жидкость Вода дистиллированная Калибратор Реагент 1 | 100 — — 1000 | — — 100 1000 | — 100 — 1000 |
Пробы перемешать и инкубировать при температуре + 37°С в течение 5 минут. Измерить оптические плотности опытной (Еоп) и калибровочной (Екал) проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 597 (590-630) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов устойчива при комнатной температуре (18-250С) в течение 8 часов.
При содержании общего белка в моче или спинномозговой жидкости выше 3000 мг/л анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором и полученный результат умножить на разведение.
 |
РАСЧЕТЫ
 |
Содержание общего белка в моче или спинномозговой жидкости (мг/л) определить по формуле:
где: С — концентрация общего белка в анализируемой пробе, мг/л;
Еоп. — оптическая плотность пробы, ед. опт. пл.;
Екал. — оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. пл.;
200 — содержание общего белка в калибраторе, мг/л;
Содержание общего белка в суточной моче (мг/сутки) определить по формуле:
 |
где: С обм. — концентрация общего белка в анализируемой пробе, мг/сутки;
Еоп. — оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. пл.;
Екал. — оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. пл.;
V- количество мочи, собранной за сутки, л;
200 — содержание общего белка в калибраторе, мг/л;
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Хранение наборов должно производиться в темном месте при температуре +2-8оС в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов в темном месте при температуре до +25оС не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.
Срок годности набора – 12 месяцев.
Реагент 1 после вскрытия флаконов может храниться при температуре +2-8оС в течение всего срока годности набора при условии достаточной герметичности флаконов.
Калибратор после вскрытия флакона может храниться при температуре +2-8оС в течение 3 месяцев при условии достаточной герметичности флаконов.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора ОБЩИЙ БЕЛОК БФС ”ДДС”, следует обращаться в -ДС» г. Пущино, Московской обл., пр. Науки, 5; тел. Факс (4967) 33-05-54, 33-05-28.
Директор по науке и технике -ДС», к. б.н. .
