УДК 543.544.5.068.7
Определение амлодипина в субстанциях и готовых лекарственных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
,+, , Буланова Анджела Владимировна*
Кафедра общей химии и хроматографии. Самарский государственный университет.
Ул. Академика Павлова, 1. Самара, 443011. Россия
Тел.: +7 (846)334-54-47. E-mail: *****@***ru
_______________________________________________
*Ведущий направление; +Поддерживающий переписку
Ключевые слова: амлодипин, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), качественный и количественный анализ.
Аннотация
Разработана методика качественного и количественного анализа амлодипина с использованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Определены оптимальные хроматографические условия проведения анализа. Методика позволяет осуществлять определение подлинности препарата «Амлодипин».
Введение
Одной их основных практических задач современной фармакологии и фармации является создание высокоэффективных лекарственных препаратов, поэтому так важна проблема контроля, связанная с точной оценкой качественного и количественного состава препарата. В настоящее время большинство фармацевтических фирм для контроля качества своей продукции предпочитают использовать высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), так как она идеально подходит для проверки чистоты и качества лекарственных препаратов, большинство которых являются термически неустойчивыми или обладают низкой летучестью, что затрудняет использование газожидкостной хроматографии [1]. ВЭЖХ включена в отечественную фармакопею [2] и ряд зарубежных фармакопей [3,4]. Однако в литературе практически нет упоминаний о применении метода ВЭЖХ для анализа лекарственных препаратов, используемых для лечения таких часто встречающихся заболеваний сердечно-сосудистой системы, как артериальная гипертензия и ишемическая болезнь сердца.
К лекарственным препаратам, используемым для лечения таких заболеваний, относится амлодипин [5].
Амлодипин - лекарственный препарат, относящийся к группе веществ, оказывающих антиангинальное, антигипертензивное действие. При стенокардии уменьшает выраженность ишемии миокарда, снижает общее периферические сосудистое сопротивление, уменьшает преднагрузку на сердце, снижает потребность миокарда в кислороде[5].
Структурная формула амлодипина (2-[(2-Аминоэтокси)метил]-4-(2-хлорфенил)-1,4-дигидро-6-метил-3,5-пиридин дикарбоновой кислоты 3-этил 5-метиловый эфир в виде безилата и малеата) представлена на рисунке 1.
Рис. 1 Структурная формула амлопидина.
Целью настоящей работы являлось разработка ВЭЖХ-методики определения амлодипина в субстанциях и готовых лекарственных препаратах.
Экспериментальная часть
Анализы проводили на жидкостном хроматографе Милихром–1, модифицированном системой подачи подвижной фазы с помощью шприцевого насоса. Детектирование осуществляли УФ-спектрофотометрическим детектором при длине волны 236 нм. Использовали колонку Ultrasep ES 100RP18 (120х4мм), заполненную обращенно-фазовым сорбентом С18 с размером частиц 4 мкм. В качестве элюентов использовали смесь буферного раствора с рН 2.5 и ацетонитрила различного состава. Скорость потока элюента составляла 100 мкл/мин. Объем вводимой пробы - 40 мкл. В работе использовали ацетонитрил для хроматографии ос. ч. фирмы Криохром (Россия). Исследовали амлопидин, содержащийся в лекарственных препаратах, выпускающихся фирмами Канонфарм» и «Реплекфарм». Используемые для анализа реактивы имели чистоту не ниже «ч. д.а». Для приготовления всех рабочих растворов и элюента использовали дистиллированную и дегазированную воду с удельным сопротивлением 18 Мом/см. В качестве образца сравнения определяемого лекарственного препарата использовали фармацевтическую субстанцию, проверенную отделом контроля предприятия-изготовителя и соответствующую всем требованиям нормативной документации (НД).
В качестве буферных растворов использовали фосфатный буфер (растворы фосфата калия двузамещенного и ортофосфорной кислоты). Для его приготовления
0.136 г фосфата калия двузамещенного помещали в колбу 1000 мл, прибавляли 800 мл воды и доводили рН раствора ортофосфорной кислотой до 2±0.1 (потенциометрическим методом). Объем раствора доводили водой до метки и перемешивали.
Для приготовления испытуемых растворов готовых лекарственных препаратов таблетки растирали в порошок. Порошок «Амлодипина» массой 0,4 г растворяли в 60 мл дистиллированной воды и раствор обрабатывали ультразвуком до полного диспергирования порошка. Объем полученного раствора доводили до 100 мл дистиллированной воды, перемешивали и фильтровали через бумажный фильтр. Раствор использовали свежеприготовленным.
Растворы стандартных образцов (РСО) готовили аналогично растворам исследуемых лекарственных препаратов.
Обработку результатов хроматографического эксперимента проводили с применением системы сбора и обработки данных «МультиХром» 1.52v (Ampersand LTd). Расчет количественного содержания определяемых компонентов находили по формуле (1):
(1)
где Sи и Sст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно; тст, тс и тн - соответственно массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса в граммах таблетки и масса растертых таблеток, взятых для приготовления испытуемого раствора соответственно.
Результаты и их обсуждение
В ходе работы исследовано влияние состава подвижной фазы на хроматографические характеристики удерживания исследуемых соединений. Для этого проводили хроматографирование растворов стандартного образца вещества - амлодипина (табл.1).
Таблица 1
Времена удерживания амлодипина, содержащихся в РСО, при использовании различных подвижных фаз
Подвижная фаза | tR, мин |
75 фосфатный буфер / 25 ацетонитрил (об. %) | 14.652 |
68 фосфатный буфер / 32 ацетонитрил (об. %) | 4.855 |
30 вода / 70 ацетонитрил (об. %) | 5.186 |
Как видно из таблицы, состав подвижной фазы сильно влияет на времена удерживания анализируемого соединения и в целом на эффективность хроматографирующей системы. С увеличением объемного содержания ацетонитрила в элюенте уменьшается время выхода амлодипина, но разделяющая способность системы улучшается. Использование в качестве элюента смеси вода – ацетонитрил ухудшает разделение вследствие диссоциации молекул амлодипина и на хроматограмме фиксируются 2 пика с практически одинаковой интенсивностью.
Оптимальные соотношения смеси буферного раствора и ацетонитрила для исследуемых веществ составили - 68:32 по объему.
Количественный хроматографический анализ РСО амлопидина и препаратов «Амлодипина» проводили с использованием элюента: фосфатный буфер / ацетонитрил - 68 / 32 (об. %) По формуле (1) определили количественное содержание амлодипина в препарате «Амлодипина». Методом внутренней нормализации находили общее содержание примеси в таблетках.
Хроматограммы образцов препарата «Амлодипин» производителей «Канонфарм» и «Реплекфарм» представлены на рис. 2-3.
Рис. 2. Хроматограмма образца лекарственного препарата «Амлодипин» фирмы «Канонфарм». Аналитическая длина волны 236 нм. Состав подвижной фазы - фосфатный буфер/ацетонитрил 68/32 об.%. Пики по времени удерживания: 1 - примесь, 2- амлодипин.
Рис. 3. Хроматограмма образца лекарственного препарата «Амлодипин» фирмы «Реплекфарм». Аналитическая длина волны 236 нм. Состав подвижной фазы - фосфатный буфер/ацетонитрил 68/32 об.%. Пики по времени удерживания: 1 - примесь, 2- амлодипин.
В табл. 2 представлены значения величин, характеризующих эффективность хроматографического разделения для образцов лекарственного препарата «Амлодипин».
Таблица 2
Результаты хроматографического анализа образца лекарственных препаратов
Компонент | Эффективность колонки* N | Степень асимметрии б |
амлодипин (Канонфарм) | 1751 | 6.62 |
амлодипин (Реплекфарм) | 3335 | 5.45 |
* - среднее из 5 независимых определений.
Результаты количественного анализа лекарственных препаратов представлены
в табл. 3.
Таблица 3
Результаты количественного анализа лекарственного препарата
Компонент | Норма по нормативным документам, мг | Среднее арифметическое значение Хср, мг | Среднее квадратичное отклонение S, мг | Абсолютная погрешность ДХ, мг |
амлодипин (Канонфарм) | 5.0±0.5 | 5.539 | 0.04544 | 0.059 |
амлодипин (Реплекфарм) | 5.437 | 0.10428 | 0.129 |
Таким образом, предложена методика качественного и количественного анализа амлопидина с использованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показано, что содержание действующих веществ в исследуемых лекарственных препаратах соответствует требованиям нормативных документов по показателю «Количественное определение».
Предложенную методику можно использовать для судебно-химического и химико-токсикологического исследования, а также для определения подлинности препарата при фармацевтическом контроле.
Работа выполнена в рамках государственного задания по гранту №3.3209.2011.
Литература
[1] , , Иванов аналитической химии. 2008. Т 63. №6. С. 566-580.
[2] Государственная Фармакопея Российской Федерации. - 12 изд., ч. 1. М.: Изд-во «Научный центр экспертизы средств медицинского применения». 2008. 704 с.
[3] British Pharmacopeia. CD 1998 v. 2.0, System Simulation Ltd. 1998.
[4] The United States Pharmacopeia.23-rd Ed, Rockville. 1995.
[5] Рациональная фармакотерапия сердечно-сосудистых заболеваний: Рук-во для практ. врачей / Под ред. , М.: Литтерра. 2005. 972 с.
Determination of amlodipine in substances and finished pharmaceutical preparations by high-performance liquid chromatography
Safronova Irina Anatolyevna,+ Shafigulin Roman Vladimirovich, Vasilyeva Marya Vladimirovna, Ivanova Tatyana Viktorovna, Bulanova Andgela Vladimirovna*
General Chemistry and Chromatography Department/ Samara State University/
Academic Pavlov, 1. Samara, 443011. Russia
Тel.: +7 (846)334-54-47. E-mail: *****@***ru
Key words: amlodipine, high-performance liquid chromatography (HPLC), quantitative and qualitative analysis.
Abstract
Methods of amlodipine quantitative and qualitative analysis by means of reserved – phase high-performance liquid chromatography have been developed. The optimal chromatographic conditions have been determined. The proposed method is possible to determine the identity of «Amlodipine».
