Молекулярные маркеры риска злокачественной трансформации лейкоплакии слизистой оболочки полости рта

Молекулярные маркеры риска злокачественной трансформации лейкоплакии слизистой оболочки полости рта

1, 2, 1,3, 2, 1, 1, 1,3

Учреждение Российской академии наук Институт биологии гена РАН, г. Москва. Нижегородская государственная медицинская академия, г. Нижний Новгород. Российский государственный медицинский университет, г. Москва.

Резюме

Лейкоплакия слизистой оболочки полости рта характеризуется способностью к злокачественной трансформации в плоскоклеточный рак. В настоящее время в клинической практике отсутствует метод, позволяющий достоверно определить злокачественный потенциал каждой конкретной лейкоплакии и выбрать на основании этого стратегию лечения пациента. Предполагается, что таким объективным методом может стать исследование молекулярных маркеров. В данном обзоре рассмотрены молекулярные маркеры, для которых в ходе когортных исследований было продемонстрировано прогностическое значение: плоидность ДНК, потеря гетерозиготности, р63, сурвивин, подопланин, матриксные металлопротеиназы 1 и 9. Однако полученной информации пока недостаточно для использования этих маркеров в клинической диагностике. Для этого требуются рандомизированные контролируемые когортные исследования, подтверждающие и уточняющие полученные результаты.

Ключевые слова: предраковые заболевания слизистой оболочки полости рта, лейкоплакия слизистой оболочки полости рта, плоскоклеточный рак слизистой оболочки полости рта, молекулярные маркеры.

Abstract

Oral leukoplakia is characterized by the ability to transform into the oral squamous cell carcinoma. Currently, there is no method in clinical practice, which could help reliably determine malignant potential of each leukoplakia and choose appropriate management strategy. It is supposed, that identification of molecular markers may become such objective method. In this review molecular markers that showed prognostic value in studies with longitudinal design are considered: DNA ploidy, loss of heterozigosity, p63, survivin, podoplanin, matrix metalloproteinases 1 and 9. Available information is not enough for routine diagnostic use. Randomized controlled longitudinal studies are demanded to confirm and specify obtained data.

Key words: potentially malignant disorders, oral leukoplakia, oral squamous cell carcinoma, molecular markers.

Введение

Лейкоплакия – это наиболее часто встречающееся и наиболее изученное предраковое заболевание слизистой оболочки полости рта (СОПР). В настоящее время для дифференциальной диагностики между лейкоплакией и раком СОПР проводится гистопатологическое исследование биопсийного образца. На тканевом уровне лейкоплакия проявляется гиперплазией и/или дисплазией [2]. На основании патогистологического исследования также оценивают риск трансформации лейкоплакии СОПР. Показано, что лейкоплакии с тяжелой дисплазией имеют высокий риск трансформации в рак СОПР – 15-17% [8; 35; 36], а лейкоплакии с легкой дисплазией или без дисплазии имеют низкий риск – около 1% [8; 36]. Наличие дисплазии не означает обязательную трансформацию лейкоплакии в рак СОПР и не является обязательным условием для развития рака СОПР. Таким образом, невозможно определить злокачественный потенциал каждой конкретной лейкоплакии только по гистологическому исследованию [30]. Кроме того, заключение о наличии и степени дисплазии на основании патогистологического исследования может варьировать как между разными гистологами, так и у одного и того же гистолога [11; 20]. Поэтому актуальной является разработка объективного метода определения злокачественного потенциала лейкоплакии СОПР.

Предраковые заболевания, которые обязательно будут прогрессировать в злокачественные, вероятно, отличаются по наличию генетических нарушений (в генах опухолевых супрессоров и протоонкогенах) от тех предраковых заболеваний, которые не будут прогрессировать. Такие отличия могут стать молекулярными маркерами, которые помогут предсказать поведение каждой конкретной лейкоплакии независимо от степени дисплазии и позволят врачу разработать наиболее оптимальную стратегию лечения.

По мнению многих ученых, лейкоплакии СОПР предшествует хроническая воспалительная реакция, обусловленная рядом местных факторов (механическая, химическая, термическая травма). Таким образом, молекулярные изменения, происходящие в лейкоплакии, могут быть характерны и для воспалительных заболеваний и доброкачественных опухолей. Например, в воспаленном эпителии десен кератин 19 имел распределение такое же, как и в диспластическом эпителии [4; 21], экспрессия кератинов 8 и 18 также увеличивалась и при воспалении и при эпителиальной дисплазии [29].

В исследованиях молекулярных маркеров в лейкоплакии желательно присутствие в качестве контролей образцов нормальной СОПР, а в идеале – и воспаленной СОПР. Однако получение таких контрольных образцов затруднительно по этическим соображениям, и полный набор контрольных образцов почти всегда отсутствует. Поэтому нужно по возможности соотносить результаты исследований молекулярных маркеров в лейкоплакии СОПР с имеющимися данными о молекулярных изменениях при воспалительных заболеваниях и доброкачественных опухолях СОПР.

Молекулярные маркеры риска злокачественной трансформации лейкоплакии слизистой оболочки полости рта

Наиболее охарактеризованные молекулярные маркеры для определения степени риска и прогноза вероятности злокачественной трансформации предраковых заболеваний СОПР включают плоидность ДНК, потерю гетерозиготности, микросателлитную нестабильность, активацию протоонкогенов (с‑ras, c‑myc), инактивацию генов онкосупрессоров (р21, р27, р53, р63, р73), маркеры пролиферации (Ki‑67, PCNA, AgNORs), маркеры дифференциации (кератины, углеводные антигены), молекулы адгезии (интегрины, кадгерины, CD44), маркеры ангиогенеза (VEGF, iNOS, FGFBP) и др. В данном обзоре мы уделим особое внимание тем биомаркерам, для которых в результате когортных исследований было выявлено наличие прогностического значения для оценки риска злокачественной трансформации лейкоплакии СОПР.

Плоидность ДНК

Плоидность ДНК в клетке дает грубую оценку генетической нестабильности и аббераций ДНК. В опухолевых клетках генетически стабильные диплоидные клетки замещаются генетически нестабильными анеуплоидными клетками. Плоидность ДНК оценивается методом флуоресцентной проточной или оптической цитометрии (окраска по Фельгену). Для исследования плоидности ДНК можно использовать биопсийные образцы, так и соскобы со слизистой [24; 28]. Наиболее выраженное прогностическое значение было установлено для анеуплоидии [5; 33; 39]. Анеуплоидия ДНК в лейкоплакии СОПР коррелировала с клиникопатологическими характеристиками, связанными с большим риском злокачественной трансформации. Анеуплоидия встречалась значительно чаще в негомогенной лейкоплакии, в лейкоплакии с тяжелой дисплазией, в определенных анатомических областях полости рта (язык, дно полости рта, мягкое небо) [13; 33]. Для того чтобы ввести определение плоидности ДНК в рутинную практику, необходимо подтверждение полученных корреляций в многоцентровых рандомизированных контролируемых когортных исследованиях на большом количестве образцов.

Потеря гетерозиготности

Потерей гетерозиготности (loss of heterozygosity – LOH) называется потеря генетического материала одной из пары хромосом. Для исследования LOH в лейкоплакии СОПР в основном используются микросателлитные маркеры, расположенные рядом или внутри кодирующих последовательностей генов опухолевых супрессоров. Например, в локусах 3p14-25 расположен FHIT, в локусах 5q21-23 находится APC, в локусе 9p21 должен присутствовать p16INK4A, на длинном плече хромосомы 13 (13q14) локализован ген Rb, а ген tp53 размещается в локусах 17p12-14. Потеря микросателлитов в этих областях может привести к нестабильности мРНК или сдвигу рамки считывания. Это может вызвать инактивацию гена опухолевого супрессора, что является одной из причин злокачественной трансформации.

В нескольких исследованиях LOH в лейкоплакии СОПР была отмечена высокая частота потери хромосомных плеч 3p и/или 9p [31; 32; 44]. Прогрессирующие лейкоплакии имели LOH хромосомных плеч 3p и/или 9p в 77-100% случаев [14; 31]. LOH в этих локусах приводит к повышению риска злокачественной трансформации в 3,8 раза, в то время как LOH дополнительно в одном из локусов 4q, 8p, 11q или 17p связана с увеличением такого риска в 33 раза. У 40-60% пациентов c LOH 3p и/или 9p и в одном из локусов 4q, 8p, 11q или 17p рак развивался в течение 5 лет [31]. На основе этой панели маркеров было предложено оценивать риск злокачественной трансформации как высокий, если есть LOH хромосомных плеч 3p и/или 9p и дополнительно в локусах 4q, 8p, 11q, 13 q и 17p, средний – если есть LOH 3p и/или 9p, низкий – если LOH отсутствует [10; 43].

Можно отметить общую для всех рассмотренных исследований тенденцию: если в образце лейкоплакии СОПР обнаруживается LOH в двух и более локусах ключевых генов, то независимо от стадии дисплазии существует высокий риск злокачественной трансформации этой лейкоплакии [27; 31; 44]. В таком случае показано полное иссечение очага поврежденной ткани с исследованием наличия LOH в краях иссеченной ткани. Отсутствие LOH в краях иссекаемых тканей коррелировало со снижением частоты развития рака СОПР у пациентов с лейкоплакиями со средним и высоким риском злокачественной трансформации [45].

Суммируя вышесказанное, можно сказать, что выявлена прогностическая значимость исследования LOH в определенных локусах. Однако прежде, чем исследование LOH будет использоваться в рутинной диагностике, должен быть определен наиболее оптимальный набор маркеров LOH в ходе многоцентровых рандомизированных контролируемых когортных исследований.

р63

Белок р63 является гомологом опухолевого супрессора белка р53. Однако функция белка p63 несколько отличается от функции p53. Белок р63 экспрессируется исключительно в клетках эпителиального происхождения (эмбриональных и зрелых). В многослойном плоском эпителии р63, в отличие от р53, в норме детектируется иммуногистохимически, но экспрессия белка р63 ограничена слоем базальных клеток. В интактном эпителии в основном экспрессируется ∆Np63б, изоформа р63 без N-терминального домена трансактивации [42]. Изоформа р63 с N-терминальным доменом трансактивации (TAp63) функционирует как р53 – активирует транскрипцию генов-мишеней, а ∆Np63 является его антагонистом – репрессором, то есть может функционировать как онкоген. ∆Np63б в нормальном эпителии поддерживает популяцию камбиальных элементов, а также инициирует программу терминальной дифференциации кератиноцитов [19; 25]. В отличие от р53 в гене р63 очень редко обнаруживаются мутации, гораздо чаще он подвергается амплификации, что обуславливает оверэкспрессию белка р63 [41]. Оверэкспрессия белка р63 в клетках базального слоя приводит к тому, что повышенное его количество сохраняется в более дифференцированных клетках. Тогда повышенное количество белка р63 детектируется иммуногистохимически не только в базальных клетках, но и в более дифференцированных клетках, иногда по всей толщине эпителия [3]. Такой паттерн экспрессии белка р63 часто наблюдается в предраковых заболеваниях СОПР [6; 34]. Интересно отметить, что в воспаленном эпителии экспрессия белка р63 ограничивается базальным слоем, как в нормальной ткани [6]. В некоторых исследованиях количество ядер, позитивно окрашиваемых антителами к р63, коррелировало с тяжестью дисплазии [6; 7], а в других не удалось выявить такой зависимости [3; 12]. Если разница в экспрессии р63 в плоскоклеточном раке СОПР и предраковых заболеваниях не значительна [12], то прогностическое значение может иметь наличие оверэкспрессии р63 вообще. Оверэкспрессия ∆Np63б в лейкоплакии СОПР ассоциировалась с увеличенным риском развития плоскоклеточного рака СОПР, особенно в течение первых 3 лет наблюдения [34]. В случае одновременной экспрессии ∆Np63б, подопланина и наличия внутриэпителиальных воспалительных клеток у 61% больных лейкоплакией в течение 5 лет развился рак СОПР. Кроме того, показано, что подопланин может служить независимым маркером повышенного риска злокачественной трансформации [17].

Таким образом, ∆Np63б, подопланин и внутриэпителиальные воспалительные клетки могут служить биомаркерами для определения пациентов с лейкоплакией, имеющих высокий риск развития рака СОПР [34]. Но пока прогностическое значение определения оверэкспрессии ∆Np63б было выявлено только в одном проспективном когортном исследовании. Для дальнейшей разработки этого метода прогнозирования требуется подтверждение этих выводов в других рандомизированных контролируемых когортных исследованиях.

Сурвивин – ингибитор апоптоза

Сурвивин – это представитель семейства ингибиторов апоптоза, он также регулирует митотическую активность. Экспрессия сурвивина в опухолевой клетке может способствовать ее выживанию, но его точная роль в злокачественной трансформации еще не определена [9]. В нормальной СОПР сурвивин экспрессируется на уровне белка в отдельных базальных клетках. В раке СОПР была обнаружена обширная экспрессия белка сурвивина [18; 22; 23; 38]. Была установлена ассоциация экспрессии сурвивина в раке СОПР с худшей выживаемостью пациентов [22]. В лейкоплакии СОПР также было обнаружено усиление экспрессии сурвивина по сравнению с нормальными тканями. В 30-40% диспластических лейкоплакий уровень экспрессии сурвивина может достигать уровня, сопоставимого с таковым в опухолях СОПР [18; 23; 38]. Кроме того, в ретроспективном когортном исследовании была показана корреляция экспрессии сурвивина с повышенным риском злокачественной трансформации дисплазии СОПР в рак [23]. Усиленная экспрессия сурвивина была зарегистрирована в 94% образцов дисплазии СОПР (независимо от степени), прогрессировавших в плоскоклеточный рак СОПР [23]. Таким образом, экспрессия белка сурвивина может помочь определить пациентов с лейкоплакией, имеющих высокий риск развития рака СОПР независимо от степени дисплазии. Для окончательных выводов о прогностическом значении сурвивина необходимо провести уточняющие рандомизированные контролируемые когортные исследования его экспрессии в лейкоплакии СОПР.

Матриксные металлопротеиназы

Матриксные металлопротеиназы (matrix metalloproteinase – MMP) – это семейство цинк-зависимых протеиназ, которые участвуют в деградации различных компонентов внеклеточного матрикса. В частности, они разрушают компоненты базальной мембраны, которая является первым препятствием на пути опухолевых клеток. MMP вместе с тканевыми ингибиторами матриксных металлопротеиназ (tissue inhibitor of matrix metalloproteinases – TIMP) участвуют в ремоделировании внеклеточного матрикса во время эмбриогенеза, ангиогенеза, заживления раны. В плоскоклеточном раке СОПР была показана увеличенная экспрессия MMP, которая ассоциировалась с повышенной степенью инвазии опухоли, с наличием метастазов в лимфатические узлы и худшей выживаемостью [16; 37]. В тоже время оверэкспрессия TIMP в плоскоклеточном раке СОПР также коррелировала с худшей выживаемостью [37; 40]. То есть прогрессии опухоли способствует именно нарушение баланса матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов. В потенциально злокачественных заболеваниях было обнаружено увеличение уровня экспрессии MMP на уровне мРНК и белка. Исследованию прогностического значения экспрессии MMP в лейкоплакиях посвящено немного работ, которые были выполнены сравнительно давно. Например, в исследовании Jordan R. C. et al. было установлено, что уровни мРНК MMP­1 и MMP­9 значительно выше в диспластических лейкоплакиях, которые прогрессировали в рак СОПР, по сравнению с непрогрессировавшими лейкоплакиями СОПР [15]. В другом исследовании было показано, что экспрессия стромелизина­3 (MMP­11) может быть индикатором неизбежной трансформации дисплазии СОПР в рак. Две из трех стромелизин-3-позитивных дисплазий слизистой оболочки глотки прогрессировали в рак в течение 5 месяцев [26].

В большинстве исследований экспрессии MMP динамика изменения их уровня по мере прогрессии предракового заболевания СОПР не отслеживалась. Такие исследования позволяют сделать лишь предварительные заключения о прогностическом значении уровня экспрессии металлопротеиназ [1; 37]. Выводы о наличии прогностического значения уровней MMP-1 и MMP-9, которое было выявлено в единичном проспективном когортном исследовании, должны быть подтверждены в аналогичных исследованиях.

Заключение        

Так как разработка объективного метода определения злокачественного потенциала каждой конкретной лейкоплакии СОПР независимо от степени дисплазии является актуальной, накоплено очень много информации о происходящих при этом заболевании молекулярных изменениях. Однако в большинстве исследований не отслеживалась динамика изменения маркеров по мере трансформации лейкоплакии СОПР. Такие исследования могут дать лишь предварительные заключения о прогностическом значении биомаркеров. Значение молекулярных изменений для оценки риска трансформации лейкоплакии может быть выявлено в когортных исследованиях. Исследований с таким дизайном проведено гораздо меньше. Наибольшее количество работ, подтверждающих прогностическое значение какого-либо молекулярного маркера при лейкоплакии, касаются плоидности ДНК и потери гетерозиготности. Но проведенных исследований пока недостаточно для введения этих маркеров в рутинную практику. Исследования изменения экспрессии белков сурвивина, р63, подопланина и матриксных металлопротеиназ 1 и 9 показали некоторое прогностическое значение этих молекулярных маркеров, но они единичны. Определение молекулярных маркеров действительно может стать методом прогнозирования трансформации лейкоплакии в рак, но необходимо подтвердить и уточнить полученные результаты в рандомизированных контролируемых когортных исследованиях.

Список литературы:

Arora S., Kaur J., Sharma C. et al. Stromelysin 3, Ets-1, and vascular endothelial growth factor expression in oral precancerous and cancerous lesions: correlation with microvessel density, progression, and prognosis // Clin. Cancer Res. – 2005. – Vol. 11. - № 6. – P. 2272-84. Barnes L., Eveson J. W., Reichart P., Sidransky D. World Health Organization Classification of tumours. Pathology and Genetics of Head and Neck Tumours. –Lyon: IARC Press, 2005. Bortoluzzi M. C., Yurgel L. S., Dekker N. P. et al. Assessment of p63 expression in oral squamous cell carcinomas and dysplasias // Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. Endod. – 2004. – Vol. 98. – P. 698-704. Bosch F. X., Ouhayoun J. P., Bader B. L. et al. Extensive changes in cytokeratin expression patterns in pathologically affected human gingival // Virchows. Arch. B. Cell. Pathol. Incl. Mol. Pathol. – 1989. – Vol. 58. – P. 59–77. Bradley G., Odell E. W., Raphael S. et al. Abnormal DNA content in oral epithelial dysplasia is associated with increased risk of progression to carcinoma // Br. J. Cancer. – 2010. – Vol. 103. – P. 1432-1442. Chen Y. K., Hsue S. S., Lin L. M. Expression of p63 protein and mRNA in oral epithelial dysplasia // J. Oral Pathol. Med. – 2005. – Vol. 34. – № 4. – P. 232-9. Choi H. R., Batsakis J. G., Zhan F. Differential expression of p53 gene family members p63 and p73 in head and neck squamous tumorigenesis // Hum. Pathol. – 2002. – Vol. 33. – № 2. – P. 158-64. Cowan C. G., Gregg T. A., Napier S. S. et al. Potentially malignant oral lesions in Northern Ireland: a 20-year population-based perspective of malignant transformation // Oral Dis. – 2001. – Vol. 7. – № 1. – P. 18-24. De Maria S., Pannone G., Bufo P. et rvivin gene-expression and splicing isoforms in oral squamous cell carcinoma // J. Cancer Res. Clin. Oncol. – 2009. – Vol. 135. – № 1. – P. 107-16. Epstein J. B., Zhang L., Rosin M. Advances in the diagnosis of oral premalignant and malignant lesions // J. Can. Dent. Assoc. – 2002. – Vol. 68. – № 10. – P. 617-21. Fischer D. J., Epstein J. B., Morton T. H., Schwartz S. M. Interobserver reliability in the histopathologic diagnosis of oral pre-malignant and malignant lesions // J. Oral Pathol. Med. – 2004. – Vol. 33. – № 2. – P. 65–70. Haniffa A. M., Saitoh M., Abiko Y. et al. Expression pattern of p63 in oral epithelial lesions and submucous fibrosis associated with betel-quid chewing in Sri Lanka // Med. Mol. Morphol. – 2007. – Vol. 40. – № 4. – P. 203-207. Islam M. N., Kornberg L., Veenker E. et al. Anatomic site based ploidy analysis of oral premalignant lesions // Head Neck Pathol. – 2010. – Vol. 4. – № 1. – P. 10-4. Jiang W. W., Fujii H., Shirai T. et al. Accumulative increase of loss of heterozygosity from leukoplakia to foci of early cancerization in leukoplakia of the oral cavity // Cancer. –2001. – Vol. 92. – P. 2349–2356. Jordan R. C., Macabeo-Ong M., Shiboski C. H. et al. Overexpression of matrix metalloproteinase-1 and -9 mRNA is associated with progression of oral dysplasia to cancer // Clin. Cancer Res. – 2004. – Vol. 10. – № 19. – P. 6460-5. Katayama A., Bandoh N., Kishibe K. et al. Expressions of matrix metalloproteinases in early-stage oral squamous cell carcinoma as predictive indicators for tumor metastases and prognosis // Clin. Cancer Res. – 2004. – Vol. 10. – № 2. – P. 634-40. Kawaguchi H., El-Naggar A. K., Papadimitrakopoulou V. et al. Podoplanin: a novel marker for oral cancer risk in patients with oral premalignancy // J. Clin. Oncol. – 2008. – Vol. 26. – № 3. – P. 354-360. Khan Z., Tiwari R. P., Mulherkar R. et al. Detection of survivin and p53 in human oral cancer: correlation with clinicopathologic findings // Head Neck. – 2009. – Vol. 31. – № 8. – P. 1039-48. Koster M. I., Dai D., Roop D. R. Conflicting roles for p63 in skin development and carcinogenesis // Cell Cycle. – 2007. – Vol. 6. – № 3. – P. 269-273. Kujan O., Khattab A., Oliver R. J. et al. Why oral histopathology suffers inter-observer variability on grading oral epithelial dysplasia: An attempt to understand the sources of variation // Oral Oncol. – 2007. – Vol. 43. – № 3. – P. 224–31. Lindberg K., Rheinwald J. prabasal 40 kd keratin (K19) expression as an immunohistologic marker of premalignancy in oral epithelium // Am. J. Pathol. – 1989. – Vol. 134. – P. 89–98. Lo Muzio L., Pannone G., Staibano S. et rvivin expression in oral squamous cell carcinoma // Br. J. Cancer. – 2003. – Vol. 89. – № 12. – P. 2244-8. Lo Muzio L., Pannone G., Leonardi R. et rvivin, a potential early predictor of tumor progression in the oral mucosa // J. Dent. Res. – 2003. – Vol. 82. – № 11. – P. 923-928. Maraki D., Becker J., Boecking A. Cytologic and DNA-cytometric very early diagnosis of oral cancer //J Oral Pathol Med. – 2004. – Vol. 33. – № 7. – P. 398-404. Moll U. M., Slade N. p63 and p73: roles in development and tumor formation // Mol. Cancer Res. – USA. – 2004. – Vol. 2. – P. 371-386. Munck-Wikland E., Heselmeyer K., Lindholm J. et al. Stromelysin-3 mRNA expression in dysplasias and invasive epithelial cancer of the larynx // Int. J. Oncol. – 1998. – Vol. 12. – № 4. – P. 859-64. Partridge M., Emilion G., Pateromichelakis S. et al. Allelic imbalance at chromosomal loci implicated in the pathogenesis of oral precancer, cumulative loss and its relationship with progression to cancer // Oral Oncol. – 1998. – Vol. 34. – № 2. – P. 77–83. Pektas Z. O., Keskin A., Gьnhan O., Karslioрlu Y. Evaluation of nuclear morphometry and DNA ploidy status for detection of malignant and premalignant oral lesions: quantitative cytologic assessment and review of methods for cytomorphometric measurements // J Oral Maxillofac Surg. – 2006. – Vol. 64. – № 4. – P. 628-35. Pritlove-Carson S., Charlesworth S., Morgan P. R., Palmer R. M. Cytokeratin phenotypes at the dento-gingival junction in relative health and inflammation, in smokers and nonsmokers. // Oral Dis. – 1997. – Vol. 3. – P. 19–24. Reibel J. Prognosis of oral pre-malignant lesions: significance of clinical, histopathological, and molecular biological characteristics // Crit. Rev. Oral Biol. Med. – 2003. – Vol. 14. – P. 47–62. Rosin M. P., Cheng X., Poh C. et al. Use of allelic loss to predict malignant risk for low-grade oral epithelial dysplasia // Clin. Cancer Res. – 2000. – Vol. 6. – P. 357–362. Roz L., Wu C. L., Porter S. et al. Allelic imbalance on chromosome 3p in oral dysplastic lesions: an early event in oral carcinogenesis // Cancer Res. – 1996. – Vol. 56. – P. 1228-1231 Saito T., Yamashita T., Notani K. et al. Flow cytometric analysis of nuclear DNA content in oral leukoplakia: relation to clinicopathologic findings // Int. J. Oral. rg. – 1995. – Vol. 24. – № 1. – Part 1. – P. 44-7. Saintigny P., El-Naggar A. K., Papadimitrakopoulou V. et al. ДNp63 overexpression, alone and in combination with other biomarkers, predicts the development of oral cancer in patients with leukoplakia // Clinical Cancer Research. – 2009. – Vol. 15. – № 19. – P. 6284-91 Schepman K. P., Van der Meij E. H., Smeele L. E., Van der Waal I. Malignant transformation of oral leukoplakia: a follow-up study of a hospital-based population of 166 patients with oral leukoplakia in the Netherlands. Oral Oncol. – 1998. – Vol. 34. – № 4. – P. 270–5. Silverman S. Jr., Gorsky M., Lozda F. Oral leukoplakia and malignant transformation: a follow up study of 257 patients // Cancer. – 1984. – Vol. 53. – № 3. – P. 563–8. Sutinen M, Kainulainen T, Hurskainen T. et al. Expression of matrix metalloproteinases (MMP­1 and ­2) and their inhibitors (TIMP­1, ­2 and ­3) in oral lichen planus, dysplasia, squamous cell carcinoma and lymph node metastasis // Br. J. Cancer. – 1998. – Vol. 77. – P. 2239-45. Tanaka C., Uzawa K., Shibahara T. et al. Expression of an inhibitor of apoptosis, survivin, in oral carcinogenesis // J. Dent. Res. – 2003. – Vol. 82. № 8. – P. 607-11. Torres-Rendon A., Stewart R., Craig G. T. et al. DNA ploidy analysis by image cytometry helps to identify oral epithelial dysplasias with a high risk of malignant progression // Oral. Oncol. – 2009. – Vol. 45. – № 6. – P. 468-73. de Vicente J. C., Fresno M. F., Villalain L. et al. Immunoexpression and prognostic significance of TIMP-1 and -2 in oral squamous cell carcinoma // Oral Oncol. – 2005. – Vol. 41. – № 6. – P. 568-79. Weber A., Bellmann U., Bootz F. et al. Expression of p53 and its homologues in primary and recurrent squamous cell carcinomas of the head and neck // Int. J. Cancer. – 2002. – Vol. 99. – № 1. – P. 22-8. Westfall M. D., Pietenpol J. A. p63: molecular complexity in development and cancer // Carcinogenesis. – 2004. – Vol. 25. – № 6. – P. 857-864. Zhang L., Rosin M. P. Loss of heterozygosity: a potential tool in management of oral premalignant lesions? // J. Oral Pathol. Med. – 2001. – Vol. 30. – № 9. – P. 513–520. Zhang L., Cheung K­J., Lam W. L. et al. Increased genetic damage in oral leukoplakia from high risk sites: potential impact on staging and clinical management // Cancer. – 2001. – Vol. 91. – P. 2148–55. Zhang L., Poh C. F., Lam W. L. et al. Impact of localized treatment in reducing risk of progression of low-grade oral dysplasia: molecular evidence of incomplete resection // Oral Oncol. – 2001. – Vol. 37. – № 6. – P. 505-12.