После окончания опыта выживших животных подвергают эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием общего эфирного наркоза.
3.4. Процедура определения ингаляционной опасности в насыщающих концентрациях паров
Оценку ингаляционной опасности средства в насыщающих концентрациях проводят в герметичных емкостях (эксикаторы, камеры), в которых создают условия свободного испарения летучих компонентов средства (в количестве 30 г) при комнатной температуре в течение суток. Исследования проводят на мышах (18–22 г) или на крысах (180–200 г) статическим методом из расчета объема воздуха на одно животное в час: для мышей – 2 л, для крыс – 5-7 л. Экспозиция составляет 2-4 ч. Число животных в группе 6 особей. После окончания воздействия у животных оценивают функциональное состояние дыхательной, нервной системы и т. п.
После окончания опыта выживших животных подвергают эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием общего эфирного наркоза.
3.5. Процедура оценки раздражающего действия на кожу
В качестве подопытных животных используют кроликов или морских свинок. Количество используемых животных от 2 до 6 особей (морские свинки). Вещества, обладающие заведомо известным выраженным раздражающим действием, не тестируются. Местное раздражающее действие средства оценивают при однократном или ежедневном нанесении 500 мг вещества в течение 10 дней по 5 дней в неделю на выстриженный участок кожи боковой поверхности спины кроликов площадью 56 см2 с последующим удалением вещества через 4 часа.
При отсутствии видимых проявлений раздражения или наличия слабого раздражения по решению ветеринара или научного сотрудника животное остается в живых для последующего использования в процедуре, классифицированной по степени тяжести как «легкая» или «умеренная».
3.6. Процедура оценки раздражающего действия на слизистую оболочку глаза
В качестве подопытных животных используют кроликов. Количество используемых животных от 2 до 3 особей. Вещества, обладающие заведомо известным выраженным раздражающим действием, не тестируются. Местное раздражающее действие оценивается при однократном внесении 50 мг вещества в конъюнктивальный мешок глаза кролика с последующим наблюдением за состоянием животных в течение 2 недель.
При отсутствии видимых проявлений раздражения или наличия слабого раздражения по решению ветеринара или научного сотрудника животное остается в живых для последующего использования в процедуре, классифицированной по степени тяжести как «легкая» или «умеренная».
3.7. Процедура определения сенсибилизирующих свойств на морских свинках
Исследования проводят на морских свинках-альбиносах. Количество используемых животных от 6 до 8 особей в опытной и контрольной группах. В кожу наружной поверхности уха морской свинки вводили однократно 0,02 мл раствора, содержащего 200-400 мкг средства. Через 10 суток проводят первичное тестирование с нанесением на бок морской свинки разрешающей дозы вещества, не вызывающей раздражения кожи. У подопытных животных регистрируют реакцию кожи: наличие или отсутствие эритемы, толщину кожной складки, рН и температуру кожи. Вторичное тестирование проводят после нанесения 7 дополнительных аппликаций на кожу противоположного бока морской свинки средства. Для проведения тестирования у морских свинок берут 1- 2 мл крови из крайней вены ушной раковины.
После окончания опыта животных опытной группы подвергают эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием общего эфирного наркоза. Животных контрольной группы по решению ветеринара или научного сотрудника оставляют в живых для последующего использования в процедуре, классифицированной по степени тяжести как «легкая» или «умеренная».
3.8. Процедура определения сенсибилизирующих свойств на белых мышах
При оценке сенсибилизирующего действия средств на мышах используют реакцию гиперчувствительности замедленного типа - ГЗТ. Количество используемых животных от 8 до 10 особей в опытной и контрольной группах.
Сенсибилизацию мышей проводят с помощью внутрикожного введения в основания хвоста 60 мкл смеси исследуемого препарата (100 мкг) с полным адъювантом Фройнда в соотношении 1:1. Степень сенсибилизации оценивают через 5 суток путем введения в подушечку задней лапы мышей вещества в дозе 100 мкг в растворе Хенкса с последующим измерением через 24 часа толщины задних лап. Показатель ГЗТ оценивается по величине отека, измеряемого по разнице опытной и контрольной лапок мышей.
После окончания опыта животных опытной группы подвергают эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием общего эфирного наркоза. Животных контрольной группы по решению ветеринара или научного сотрудника оставляют в живых для последующего использования в процедуре, классифицированной по степени тяжести как «легкая» или «умеренная».
3.9. Процедура определения кумулятивных свойств
В качестве подопытных животных используют белых крыс с исходной массой 180–200 г или мышей (18–22 г). Вещество вводят в желудок с помощью металлического зонда. Изучение кумулятивных свойств средств проводят методом Лима в течение 24±4 дней. Число используемых животных от 8 до 10 особей.
После окончания опыта выживших животных подвергают эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием общего эфирного наркоза.
3.10. Процедура определения кожно-резорбтивного действия
Определение кожно-резорбтивного действия средства проводится на половозрелых белых крысах с массой г., на крысятах - отъемышах, с исходной массой г. Средство наносят на кожу в разведении, не вызывающим раздражения, один раз в день в течение 2 – 4 недель, открытым способом со смыванием через 1 час. Число используемых животных от 8 до 10 особей.
После окончания опыта животных подвергают эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием общего эфирного наркоза.
При отсутствии клинических проявлений интоксикации по решению ветеринара или научного сотрудника животное остается в живых для последующего использования в процедуре, классифицированной по степени тяжести как «легкая» или «умеренная».
3.11. Процедура определения порогов острого и подострого ингаляционного действия
Оценку ингаляционной опасности проводят на белых крысах в затравочных камерах, моделируя в статических условиях способы применения (орошение, протирание, замачивание или погружение) с учетом режимов применения (нормы расхода, экспозиции). Число используемых животных от 6 до 8 особей. Исследуют рекомендуемые рабочие концентрации (максимальную) или готовое к употреблению средство. Продолжительность пребывания крыс в затравочных камерах зависит от 60 до 90 минут однократно или круглосуточно от 14 дней до трех месяцев.
В острых опытах обработку проводят однократно, а в подострых – ежедневно 5 раз в неделю, на протяжении всего эксперимента (от 2 до 4 недель). Для определения порога острого или подострого действия (Limac/ Limsubac) после окончания затравки проводят исследование состояния дыхательной, сердечной и нервной систем, а также изучают биохимические и гематологические показатели.
Регистрацию электрофизиологических сигналов при сокращении сердечной мышцы и дыхательных движениях животного проводят с помощью Комплекса оценки кардиореспираторной системы мелких лабораторных животных (КОКС-2). Животное помещают в загон ФиксМЖ1. Его голова должна располагаться в вершине загона в виде конуса. Сам конус можно зафиксировать, исходя из размеров животного. Для регистрации сердечных сокращений подключают к телу животного 2 электрода. Места расположения электродов могут меняться в зависимости от требований эксперимента и размеров животного. Одновременно через датчик возле головы животного регистрируется частота дыхания (ЧДД). С помощью кнопки на панели инструментов компьютера включается регистрация измеряемых параметров. Результаты, полученные в ходе данного исследования, выводятся на монитор и фиксируются в отдельном файле.
Для изучения функции нервной системы выбраны метод регистрации суммационно-порогового показателя (СПП) и метод «открытое поле». Принцип метода определения СПП заключается в регистрации раздражений при нарастающем напряжении, подаваемом к задним лапам животного, проводится по методу .
Для оценки поведения методом «открытого поля» животных помещают в манеж из белого пластика, расчерченного черными линиями на 16 квадратов (секторов) и с просверленными отверстиями на пересечении этих линий, в затемненном помещении. Наблюдение за животными проводят в течение 3 минут. Визуально подсчитывают количество пересеченных квадратов, вертикальных вставаний животных и количество заглядываний в отверстия-норки при спонтанном перемещении животного.
Для исследования биохимических и гематологических показателей у животных проводят однократно забор крови из под язычной вены.
Все проводимые исследования позволяют классифицировать данную процедура по степени тяжести как «легкую».
После окончания опыта выживших животных подвергают эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием общего эфирного наркоза.
Животные контрольной группы через 14 дней после завершения данной процедуры по решению ветеринара или научного сотрудника могут остаться в живых для последующего использования в процедурах, классифицированных по степени тяжести как «легкие» или «умеренные».
3.12. Процедура определения поедаемости родентицидных средств
В качестве подопытных животных используются серые и черные крысы, домовые мыши, серые полевки с исходной массой тела крыс 150 – 240 г, мышей 20 – 29 г и полевок 20-35 г. Во время экспериментов животным обеспечивают свободный доступ к воде и корму. Используют водопроводную воду питьевого качества. Количество используемых животных каждого вида от 6 до 10 особей. Изучение поедаемости родентицидных средств в эксперименте проводят до момента гибели грызуна, но не более 3 суток для родентицидов острого действия, 10 суток – для антикоагулянтов второго поколения и ядов смешанного действия и 14 суток – для антикоагулянтов первого поколения. После окончания наблюдения, выжившие животные подвергаются эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием эфирного наркоза.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
